หุ้น:
รากฐานการย้อมสีเชิงลบเทคนิคข้อดีและข้อเสีย
การย้อมสีเชิงลบ มันเป็นวิธีการระบายสีแบบพิเศษเพื่อเน้นการมีอยู่ของแคปซูลในจุลินทรีย์บางชนิด - ส่วนใหญ่ Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae และ Cryptococcus neoformans-, จากตัวอย่างทางคลินิกหรือวัฒนธรรมที่บริสุทธิ์.
ตัวอย่างโดยตรงที่ใช้กันทั่วไปในการใช้การย้อมสีเชิงลบคือของเหลวในสมอง เทคนิคนี้แสดงให้เห็นถึงทางเลือกที่รวดเร็วสำหรับการวินิจฉัยสันนิษฐานของเยื่อหุ้มสมองอักเสบโดยเฉพาะอย่างยิ่ง Cryptococcus neoformans.
ในทำนองเดียวกันคราบนี้สามารถนำไปใช้กับเสมหะและของเหลวที่ผ่านการฆ่าเชื้อโดยทั่วไปเช่นเดียวกับสายพันธุ์ที่ได้รับจากวัฒนธรรมบริสุทธิ์หนุ่ม เทคนิคนี้ใช้หมึกนิกโรซีนหรือหมึกจีนสำหรับการดำเนินการ ดังนั้นจึงเป็นวิธีการที่ง่ายและประหยัดในการใช้ข้อมูลที่มีค่าการวินิจฉัยที่ดีในเวลาอันสั้น.
ในแง่นี้ห้องปฏิบัติการใด ๆ สามารถทำสีนี้ แน่นอนห้องปฏิบัติการจะต้องมีพนักงานที่มีความสามารถซึ่งสามารถจดจำยีสต์ของ Cryptococcus neoformans แยกหรือออกดอกและแยกแยะความแตกต่างจากเม็ดเลือดขาวและสิ่งประดิษฐ์ที่ตัวอย่างอาจมีอยู่.
ดัชนี
- 1 มูลนิธิ
- 2 เทคนิค
- 2.1 วัสดุ
- 2.2 ข้อมูลจำเพาะสำหรับการสุ่มตัวอย่าง
- 2.3 การดำเนินการของเทคนิคพร้อมตัวอย่างโดยตรง
- 2.4 การดำเนินการของเทคนิคกับสายพันธุ์จากวัฒนธรรม
- 2.5 การสังเกตการณ์ในกล้องจุลทรรศน์
- 3 ข้อดี
- 4 ข้อเสีย
- 5 การย้อมสีเนื้อเยื่อด้วยหมึกอินเดีย
- 6 อ้างอิง
มูลนิธิ
Nigrosine และหมึกอินเดียทำหน้าที่คล้ายกัน ดังนั้นทั้งสองสารสามารถใช้แทนกันได้.
เทคนิคนี้เรียกว่าการย้อมสีเชิงลบเพราะทำหน้าที่ตรงกันข้ามกับเทคนิคการระบายสีที่เหลือ ในสิ่งนี้สิ่งที่หลงเหลืออยู่คือโครงสร้างที่ถูกแสวงหาหรือที่คุณต้องการดู นั่นคือจุลินทรีย์.
ดังนั้นการย้อมสีจึงขึ้นอยู่กับการย้อมก้นสีสเมียร์ในสีเข้ม ในสถานการณ์นี้โครงสร้างที่ต่อยอดจะถูกเน้นเป็นสีอ่อนหรือไม่มีสี.
โดยทั่วไปแล้วยีสต์นั้นจะสังเกตเห็นได้ว่ามีการหักเหของแสงล้อมรอบด้วยรัศมีที่ชัดเจนซึ่งสอดคล้องกับแคปซูล สิ่งนี้เกิดขึ้นเนื่องจากหมึกและนิโคตินจีนเป็นสารที่ไม่สามารถแทรกซึม polysaccharide ที่เป็นแคปซูลของจุลินทรีย์ที่มีชีวิต.
มันเป็นที่น่าสังเกตว่าโครงสร้างอื่น ๆ ที่อาจมีอยู่ในตัวอย่างโดยตรงเช่นเม็ดเลือดขาวหรือเซลล์เม็ดเลือดแดงไม่เจาะ.
ทีนี้ถ้าจุลินทรีย์ตายไปแล้วทิงเจอร์สามารถเจาะเข้าไปในพวกมันได้ในลักษณะที่การย้อมสีนี้ก็มีประโยชน์ในการประเมินความมีชีวิตของจุลินทรีย์ด้วย.
เทคนิค
วัสดุ
nigrosine
ไนโกรซินเป็นหนี้ชื่อของมันเป็นสีดำ มันเป็นสารสังเคราะห์ที่ได้จากการให้ความร้อนกับส่วนผสมของสารอินทรีย์เช่นไนโตรเบนซีนอะนิลีนและอะนิลีนไฮโดรคลอไรด์โดยใช้ตัวเร่งปฏิกิริยา (เหล็กหรือทองแดง) ในปฏิกิริยาดังกล่าว.
หมึกจีน
หมึกจีนเป็นสารที่ชาวเอเชียใช้เป็นหลักในการเขียนทำผลงานศิลปะและภาพเขียนสีเดียว เป็นที่นิยมในวัฒนธรรมจีน.
มันได้มาจากหมึกปลาหมึกผสมกับถ่านหินที่ถูกบดละเอียดซึ่งเป็นผลมาจากการเผาต้นไม้เล็ก ๆ.
นอกจากนี้ยังเป็นไปได้ที่จะเตรียมความพร้อมจากเขม่าควันไฮโดรคาร์บอน (น้ำมันพืช) พร้อมกับโปรตีนเจลาตินที่ให้ความสม่ำเสมอที่ถูกต้องเพื่อป้องกันการตกตะกอนของอนุภาคคาร์บอน.
ข้อมูลจำเพาะสำหรับการสุ่มตัวอย่าง
- ไม่ต้องอดอาหาร.
- ตัวอย่างน้ำไขสันหลังเสมหะหรือของเหลวที่ผ่านการฆ่าเชื้อจะต้องมีปริมาณอย่างน้อย 1 มิลลิลิตรและจะต้องถูกย้ายไปที่อุณหภูมิห้องในห้องปฏิบัติการทันที.
- ตัวอย่างน้ำไขสันหลังและของเหลวที่ผ่านการฆ่าเชื้อควรนำโดยแพทย์เฉพาะทาง.
- นอกจากนี้ยังอาจเป็นวัฒนธรรมที่บริสุทธิ์ของสายพันธุ์ต้องสงสัยที่เชื่อมโยงกับเชื้อโรคดังกล่าว.
การดำเนินการของเทคนิคพร้อมตัวอย่างโดยตรง
- ตัวอย่างจะต้องหมุนเหวี่ยงจากนั้นส่วนเหนือจะถูกทิ้งและตะกอนจะถูกนำไป.
- หยดของวัสดุที่ปั่นแยก (ตะกอน) และหยดหมึกหรือนิโคตินจีนวางอยู่บนสไลด์ที่สะอาด.
- ควรผสมให้เข้ากันและคลุมด้วยสลิปเพื่อให้หยดกระจายออกมาเหมือนฟิล์มบาง ๆ โดยไม่เกินขอบ.
- หลังจากนั้นการเตรียมการจะถูกติดตั้งในกล้องจุลทรรศน์.
- หากการเตรียมมืดเกินไปก็สามารถเจือจางด้วยน้ำ.
การดำเนินการของเทคนิคกับสายพันธุ์จากวัฒนธรรม
- ส่วนเล็ก ๆ ของพืชผลเล็ก ๆ นั้นใช้เข็มหยอดเมล็ดและละลายด้วยหยดหมึกจีนก่อนหน้านี้ที่วางไว้บนสไลด์ที่สะอาด.
- ผ้าคลุมวางอยู่ด้านบน.
- มันถูกพบในกล้องจุลทรรศน์ที่ 10X และที่ 40X.
คุณยังสามารถละลายส่วนหนึ่งของอาณานิคมในน้ำกลั่นและจากนั้นหยดและผสมกับหมึก ด้วยวิธีนี้การเตรียมการจะไม่หนามากทำให้สามารถสังเกตโครงสร้างที่แยกได้ หากมีการรวมตัวกันมันจะไม่ถูกสังเกตได้ดี.
อีกวิธีการหนึ่งดังต่อไปนี้:
- วางหยดของวัฒนธรรมในการระงับที่ปลายด้านหนึ่งของภาพนิ่ง.
- วางหยดนิโคตินบนปลายเดียวกันและผสม.
- ด้วยความช่วยเหลือของสไลด์อื่นขยายตัวอย่างเช่นถ้าคุณกำลังทำป้ายโลหิตวิทยา.
- ปล่อยให้แห้งและสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์.
การสังเกตในกล้องจุลทรรศน์
ก่อนอื่นคุณต้องโฟกัสด้วยวัตถุประสงค์ 10X เพื่อให้ได้ภาพในมุมกว้าง หลังจากนั้นคุณควรค้นหาว่ามีช่องว่างที่ชัดเจนหรือไม่ หากมีให้โฟกัสด้วย 40X เพื่อดูรายละเอียด.
ประโยชน์
- มันง่ายต่อการดำเนินการ.
- มันเป็นเทคนิคทางเศรษฐกิจ.
- วิธีนี้ไม่ต้องการให้สเมียร์ติดกับความร้อนหรือสารเคมี ดังนั้นจุลินทรีย์จะถูกตรวจสอบโดยไม่มีการบิดเบือน.
- การเตรียมที่สดใหม่ไม่จำเป็นต้องทำให้แห้งจึงสามารถสังเกตได้ทันทีทำให้เกิดผลลัพธ์ได้อย่างรวดเร็ว.
ข้อเสียเปรียบ
เมื่อประกอบแล้วควรสังเกตการเตรียมการใหม่ทันที หากพวกเขาได้รับอนุญาตให้แห้งมันจะเป็นไปไม่ได้อีกต่อไปที่จะสังเกตพวกเขาและใหม่.
การย้อมสีเนื้อเยื่อด้วยหมึกอินเดีย
ฟังก์ชั่นอื่น ๆ ที่หมึกจีนสามารถเติมเต็มได้คือในห้องปฏิบัติการพยาธิวิทยา สิ่งนี้ใช้กับตัวอย่างเนื้อเยื่อที่ผ่าตัดเอาออกเพื่อทำเครื่องหมายระยะขอบของการผ่าตัดเนื้องอก.
เนื้อเยื่อที่ถูกทำเครื่องหมายถูกฉีดพ่นด้วยกรดอะซิติก สิ่งนี้ทำหน้าที่เหมือน mordant และป้องกันไม่ให้หมึกหลุดออกมาเมื่อเนื้อเยื่อถูกประมวลผลตามปกติสำหรับการเตรียมการตรวจชิ้นเนื้อ.
ขั้นตอนประกอบด้วยการอาบน้ำเนื้อเยื่อในแอลกอฮอล์และไซลีนแล้วดูดซับด้วยขี้ผึ้งพาราฟิน การทำเครื่องหมายนี้จะแนะนำนักพยาธิวิทยาเมื่อทำการสังเกตเนื้อเยื่อโดยระบุว่าระยะขอบของการผ่าตัดหรือจุดที่น่าสนใจอื่น ๆ อยู่ที่ใด.
การอ้างอิง
- "Nigrosine". Wikipedia, สารานุกรมฟรี. 11 ก.ค. 2017, 22:46 UTC 6 ม.ค. 2019, 16:56: en.wikipedia.org
- "หมึกจีน". Wikipedia, สารานุกรมฟรี. 1 ต.ค. 2018, 03:08 UTC 6 ม.ค. 2019, 18:20: en.wikipedia.org/
- Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J และผู้ทำงานร่วมกัน (2006) บุคลากรแรงงานของชุมชนปกครองตนเองของ Extremadura วาระที่เฉพาะเจาะจงเล่ม IV MAD บรรณาธิการ เซวิลล์ - สเปน, pp 211-212.
- Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006). ผู้เชี่ยวชาญด้านเทคนิคห้องปฏิบัติการ, จาก Galician Health Service (SERGAS) เนื้อหาเฉพาะเรื่อง 2. บรรณาธิการ MAD เซวิลล์ - สเปน, หน้า 79-80.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด อาร์เจนตินา Panamericana S.A บทบรรณาธิการ