Stain by May Grünwald-Giemsa รากฐานเทคนิคและการใช้งาน

อาจGrünwald-Giemsa เปื้อน o Pappenheim เป็นเทคนิคการระบายสีแบบพิเศษที่ผสมน้ำยา Giemsa และ May Grünwald มันใช้สำหรับการแยกความแตกต่างของเซลล์เม็ดเลือดปกติและผิดปกติในรอยเปื้อนเลือดและไขกระดูกเช่นเดียวกับการย้อมสีของส่วนเนื้อเยื่อและเซลล์ตัวอย่าง.

รีเอเจนต์ทั้งสอง - Gemsa และ May Grünwald - มาจากการย้อมสีแบบ Romanowsky ซึ่งเป็นเทคนิคที่ใช้ส่วนผสมของกรดและสีย้อมพื้นฐาน.

Giemsa ปรับปรุงเทคนิคโดยการทำให้ส่วนผสมของอีโอซินเมทิลีนบลูและอนุพันธ์ของมันคงที่ด้วยกลีเซอรอล ในทางตรงกันข้าม May Grünwaldใช้ eosin และ methylene blue โดยใช้เมทานอลเป็นตัวทำละลาย การรวมกันเชิงกลยุทธ์นี้ได้ให้ผลลัพธ์ที่ยอดเยี่ยม.

แม้ว่าในแง่ของการสังเกตสัณฐานวิทยาของเซลล์ทำหน้าที่คล้ายกับ Giemsa และ Wright colorations เทคนิคนี้ปรับปรุงก่อนหน้านี้โดยการปรับแต่งสีของปรสิตที่ทำให้เกิดโรคมาลาเรีย, Chagas, leishmaniasis และ trichomoniasis.

นอกจากนี้ยังได้พิสูจน์แล้วว่าเป็นเทคนิคที่มีประโยชน์มากสำหรับการศึกษาทางเซลล์วิทยาของของเหลวสเปิร์ม มันได้รับการเน้นไม่เพียง แต่การแสดงลักษณะทางสัณฐานวิทยาของสเปิร์ม แต่ยังช่วยให้แยกความแตกต่างกับเม็ดเลือดขาวที่มีประสิทธิภาพที่ดีเซลล์เยื่อบุผิวและเซลล์ของสเปิร์ม.

ดัชนี

• 1 มูลนิธิ
  • 1.1 ความหลากหลายของสีย้อม
• 2 เทคนิค
  • 2.1 วัสดุ
  • 2.2 น้ำยาย้อมสีเข้มข้น May Grünwald
  • 2.3 สีย้อมเข้มข้น Giemsa
  • 2.4 การเตรียมสารละลายบัฟเฟอร์ที่ pH 7.2
  • 2.5 ขั้นตอนการเปื้อนเลือดหรือไขกระดูก
  • 2.6 เทคนิคการระบายสีแบบยาวของของเหลวอสุจิ
  • 2.7 ข้อกำหนดที่สำคัญ
• 3 ใช้
  • 3.1 เซลล์ในช่องคลอด
  • 3.2 ตัวอย่างสเปิร์ม
• 4 อ้างอิง

มูลนิธิ

เทคนิคดังต่อไปนี้เป็นรากฐานของคราบของ Romanowsky ซึ่งสีย้อมที่เป็นกรดมีความสัมพันธ์แบบคัดเลือกสำหรับองค์ประกอบพื้นฐานของเซลล์และส่วนประกอบที่เป็นกรดดึงดูดสีย้อมพื้นฐาน.

อธิบายในอีกทางหนึ่งทั้งโครงสร้างของเซลล์และสีย้อมมีประจุไฟฟ้าบวกหรือลบ ค่าใช้จ่ายที่เท่าเทียมกันผลักไสและค่าใช้จ่ายที่แตกต่างกันจะดึงดูด.

ตัวอย่างเช่นสีย้อมพื้นฐานเช่นเมทิลีนบลูจะมีประจุบวกและถูกดึงดูดโดยโครงสร้างที่มีประจุลบ นั่นเป็นเหตุผลว่าทำไมสีย้อมนี้ทำให้เกิดนิวเคลียสที่อุดมไปด้วย DNA และ RNA ที่มีกลุ่มฟอสเฟตที่มีประจุลบ.

แกรนูลของ basophils แบบแบ่งส่วนและไซโตพลาสม่าของเม็ดเลือดขาวโมโนนิวเคลียร์ที่มี RNA.

ในทำนองเดียวกันสีย้อมกรดจะมีประจุเป็นลบซึ่งเป็นสาเหตุที่ทำให้เกิดการรวมตัวกันของโครงสร้างที่มีประจุบวกเช่นเม็ดเลือดแดงและเม็ดของ eosinophils ที่แบ่งส่วน ในส่วนของแกรนูลของนิวโทรฟิลที่ถูกแบ่งส่วนนั้นจะทำการย้อมสีทั้งสอง.

หลากหลายสี

ในเทคนิคนี้การรวมกันของปฏิกิริยาระหว่างสีออร์โธโครมาติกและการอยู่ร่วมกันของ metachromatics Orthochromatics (eosin และ methylene blue) เชื่อมโยงกับโครงสร้างของเซลล์ที่สัมพันธ์กันและให้สีที่คงที่ซึ่งไม่เปลี่ยนแปลง.

ในทางตรงกันข้าม metachromatics (อนุพันธ์ของเมทิลีนสีฟ้าสีฟ้าและสีฟ้าข) เปลี่ยนสีดั้งเดิมเมื่อพวกเขาถูกผูกไว้กับโครงสร้างเฉพาะและอาจมีความหลากหลายของเฉดสี.

ในที่สุดขั้นตอนที่ดำเนินการโดยโซลูชั่น May Grünwaldต้องมีน้ำเพราะไม่มีสีย้อมจะเจาะโครงสร้าง แต่จะไม่ได้รับการแก้ไข สิ่งนี้จะเกิดขึ้นได้สีย้อมต้องกลายเป็นขั้วหรือแตกตัวเป็นไอออนและทำให้สามารถตกตะกอนและยึดติดกับโครงสร้างที่เกี่ยวข้อง.

เทคนิค

วัสดุ

- สไลด์สำหรับสไลด์.

- ระบายสีสะพาน.

- ทางออกของ May-Grünwald.

- คราบ Giemsa.

- น้ำกลั่น.

น้ำยาย้อมสีเข้มข้น May Grünwald

เราต้องชั่งน้ำหนัก eosin-methylene blue 0.25 กรัม (ย้อมตาม May Grünwald) และละลายในเมทานอล 100 มิลลิลิตร จากนั้นผสมให้เข้ากัน 1 ชั่วโมงแล้วพักไว้ 24 ชั่วโมง เสร็จเวลามันกรอง.

ในการประยุกต์ใช้เทคนิคการย้อม May Grünwaldควรเจือจางดังนี้: สำหรับ 200 มล. ของสีย้อมเจือจาง 30 มล. ของสารละลายเข้มข้นที่มีการวัดความเข้มข้นของสารละลายบัฟเฟอร์ 20 มล. และ 150 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นที่ปรับเป็น pH7.2-7.3 . มันจะถูกผสมและกรองแล้ว.

สียำซ่าเข้มข้น

น้ำหนัก 0.5 กรัมของ azur-eosin-methylene blue (ย้อมสีตาม Giemsa) ละลายในเมทานอล 50 มล. และวางกลีเซอรีน 50 มล. ในส่วนผสม.

ในการดำเนินการเทคนิคเจือจาง 1:10 ด้วยสารละลายบัฟเฟอร์และปล่อยให้มันพักเป็นเวลา 10 นาที สามารถกรองได้ถ้าจำเป็น.

การเตรียมสารละลายบัฟเฟอร์ที่ pH 7.2

พวกเขาจะต้องชั่งน้ำหนัก:

- 40 mg ของโพแทสเซียม di-hydrogen ฟอสเฟต (KH2PO4).

- 151 mg di-sodium ไฮโดรเจนฟอสเฟต 12-hydrate (Na2HPO4).

สารประกอบทั้งสองนี้ละลายในน้ำ 100 มิลลิลิตร.

ขั้นตอนการย้อมสีเลือดหรือไขกระดูก

มีสองวิธี: คลาสสิกและแบบรวดเร็ว.

โหมดคลาสสิค

1. ปิดบังรอยเปื้อนเป็นเวลา 2 หรือ 3 นาทีด้วยสารละลาย May-Grünwaldเจือจาง.
2. ล้างด้วยน้ำกลั่นบัฟเฟอร์เพื่อกำจัดการแก้ปัญหาก่อนหน้า.
3. คลุมด้วยน้ำยาล้างบัฟเฟอร์เดียวกันแล้วทิ้งไว้ 1 นาที แนวคิดก็คือว่าสีย้อมก่อนหน้านี้จะถูกตรึงอยู่กับโครงสร้างและในขณะเดียวกันเซลล์ก็จะถูกทำให้ชุ่มชื้น.
4. เพิ่มทิงเจอร์ Giemsa เจือจาง 12 หยดลงบนน้ำบัฟเฟอร์แล้วเป่าให้เข้ากันแล้วผสมให้เข้ากัน ปล่อยให้เป็นเวลา 15 หรือ 20 นาที.
5. ล้างรอยเปื้อนด้วยน้ำกลั่นที่บัฟเฟอร์แล้ววางให้แห้ง.
6. เน้นและสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์แสงเซลล์เม็ดเลือดที่ย้อมสีด้วยวัตถุประสงค์ 40X หากจำเป็นสามารถใช้ 100X ได้.

โหมดด่วน

1. ปกปิดรอยเปื้อนด้วยสีย้อม May Grünwaldเจือจางเป็นเวลา 1 นาที.
2. ล้างด้วยน้ำกลั่นบัฟเฟอร์.
3. ปกคลุมด้วยน้ำบัฟเฟอร์และปล่อยให้ยืนเป็นเวลา 1 นาที.
4. วางสีย้อม Giemsa เจือจางทิ้งไว้ประมาณ 5 นาที.
5. ล้างด้วยน้ำกลั่นบัฟเฟอร์และอนุญาตให้อากาศแห้ง.

เทคนิคที่อธิบายไว้ที่นี่เป็นแนวทางนำ แต่ต้องคำนึงถึงว่าขั้นตอนและเวลาในการระบายสีแตกต่างกันไปตามบ้านเชิงพาณิชย์ที่จำหน่ายน้ำยา ขอแนะนำให้ทำตามขั้นตอนที่ระบุอย่างเคร่งครัดโดยบ้านเชิงพาณิชย์แต่ละแห่ง.

เทคนิคการระบายสีของเหลวขยายตัวอสุจิ

1- คลุมสเปรดด้วยชั้นบาง ๆ ของสารละลาย May Grünwaldเป็นเวลา 4 นาที.

2- เอาสีย้อมและล้างด้วยน้ำกลั่น.

3- วางชั้นของ Giemsa เจือจาง (1:10) ในน้ำกลั่นเป็นเวลา 15 นาที.

4- ลบสีย้อมและล้างด้วยน้ำกลั่น.

5- ปล่อยให้แห้งและสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์.

ข้อกำหนดที่สำคัญ

เทคนิคนี้ต้องการให้น้ำยาและน้ำยาซักผ้ามีค่า pH ปรับเป็น 7.2-7.3 เพื่อให้ความชื่นชอบของสีย้อมสำหรับโครงสร้างเซลล์ไม่บิดเบือนและไม่เปลี่ยนสีสุดท้ายที่คาดไว้.

การใช้งาน

ห้องปฏิบัติการทางคลินิกใช้เทคนิคนี้เพื่อกำจัดรอยเปื้อนเลือดและไขกระดูกส่วนเนื้อเยื่อและเซลล์วิทยา.

ในด้านโลหิตวิทยาเทคนิคนี้มีความสำคัญอย่างยิ่งในการศึกษาความผิดปกติของเซลล์ในแง่ของรูปร่างขนาดและจำนวน มันเป็นเครื่องมือที่มีค่ามากสำหรับการวินิจฉัยโรคบางชนิดเช่นโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวและโรคโลหิตจาง.

นอกจากนี้ยังนำเสนอโปรแกรมอรรถประโยชน์ที่โดดเด่นเมื่อมองหาปรสิตในเขตโลหิตวิทยาพลาสโมเดียม sp และ Trypanosoma cruzi) หรือเนื้อเยื่อวิทยา (Leishmanias sp).

ติดเชื้อ HPV

สำหรับเซลล์ทางช่องคลอดติดเชื้อเทคนิคนี้มีประโยชน์โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับการสังเกต Trichomonas vaginalis. นี่คือการค้นพบที่สำคัญเนื่องจากการมีอยู่ของมันจำลองภาพมะเร็ง ในแหล่งกำเนิด ซึ่งจะหายไปเมื่อปรสิตถูกกำจัด.

ตัวอย่างสเปิร์ม

มันเป็นเครื่องมือที่เหมาะสำหรับการศึกษาตัวอย่างตัวอสุจิเนื่องจากให้ข้อมูลที่มีค่าเกี่ยวกับคุณภาพของตัวอสุจิ.

ข้อมูลที่นำเสนอนั้นเกี่ยวข้องกับตัวเลขและสัณฐานวิทยาเป็นหลักรวมถึงเซลล์ที่เกิดขึ้นพร้อมกันและอาจมีความสำคัญอย่างยิ่งเช่นเซลล์สืบพันธุ์เม็ดเลือดขาวและเซลล์เยื่อบุผิว.

ด้วยการวิเคราะห์นี้เป็นไปได้ที่จะอธิบายความผิดปกติที่พบในสเปิร์มในหัวคอชิ้นกลางและชิ้นหลัก.

นอกจากนี้พวกเขายังสามารถช่วยแสดงกรณีของ hemospermia (การปรากฏตัวของเซลล์เม็ดเลือดแดงในน้ำอสุจิ) และ leucospermia หรือ pyospermia (เพิ่มจำนวนของเม็ดเลือดขาวในน้ำอสุจิ).

การอ้างอิง

1. Costamagna S, Prado M. การตรวจสอบความถูกต้องของการทดสอบใหม่, May Grünwald-Giemsa และสี Gram และสื่อวัฒนธรรมสำหรับการวินิจฉัย Trichomonas vaginalis. Parasitol 2001 25 (1-2): 60-64 มีอยู่ใน: scielo.
2. ห้องปฏิบัติการ Merck KGaA May Grünwald eosin methylene blue สำหรับกล้องจุลทรรศน์.
3. "May-Grünwald-Giemsa stain" Wikipedia, สารานุกรมฟรี. 15 พ.ย. 2018, 14:37 UTC 8 ม.ค. 2019, 04:29: en.wikipedia.org
4. สารเคมีกระจกในห้องปฏิบัติการ Panreac รีเอเจนต์สำหรับเทคนิคทางเนื้อเยื่อวิทยาโลหิตวิทยาและจุลชีววิทยา มีจำหน่ายที่: glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. คำแนะนำสำหรับการย้อมสีเปื้อนเลือดสำหรับการอ่านจำนวนเลือด ห้องปฏิบัติการชีวการแพทย์แห่งชาติและอ้างอิง สถาบันสาธารณสุขของประเทศชิลี.
6. Sarabia L. Spermiogram ตามเกณฑ์ของ WHO โปรแกรมกายวิภาคศาสตร์และชีววิทยาของการพัฒนา คณะแพทยศาสตร์ มหาวิทยาลัยชิลี หาได้ที่: pp.centramerica.com