หุ้น:
รากฐานการย้อมสี Kinyoun และเทคนิค
การย้อมสี Kinyoun มันเป็นเทคนิคการระบายสีที่ใช้ในการย้อมสีแบคทีเรียที่ไวต่อกรดและปรสิตในกรด มันเกิดจากการดัดแปลงสีของ Ziehl-Neelsen เทคนิคทั้งสองถูกตีความในลักษณะเดียวกัน แต่แตกต่างกันในสององค์ประกอบ: ในการเตรียมน้ำยาหลักและเทคนิค Kinyoun ไม่ใช้ความร้อน.
ด้วยเหตุนี้จึงเป็นที่รู้จักกันในชื่อ Ziehl-Neelsen หรือ Kinyoun ที่มีการย้อมเย็น มันถูกระบุสำหรับสีของ วัณโรคมัยโคแบคทีเรีย, Mycobacterium leprae, มัยโคแบคทีเรียที่ผิดปกติ, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris และ Cyclosporas cayetanensis.
เป็นมูลค่าการกล่าวขวัญว่า Nocardias เปื้อนด้วยเทคนิคนี้เล็กน้อยเนื่องจากเป็นแอลกอฮอล์ที่ทนกรดบางส่วนดังนั้นสำหรับประเภทนี้มีการปรับเปลี่ยนวิธีการ.
ในทางกลับกันเทคนิคเย็น Kinyoun ถูกรวมกับเทคนิค Trichrome ดัดแปลงโดย Didier สำหรับการตรวจจับ coccidia (Cryptosporidium parvum และ Isospora belli) และสปอร์ของ microsporidia (Enterocytozoon bieneusi และ Encephalitozoon ลำไส้).
ดัชนี
- 1 มูลนิธิ
- 2 เทคนิค
- 2.1 วัสดุ
- 2.2 การเตรียมคินยูนเฟินฟูเชียน
- 2.3 การเตรียมกรดแอลกอฮอล์
- 2.4 การเตรียมสีย้อมเมทิลีนสีน้ำเงิน
- 2.5 เทคนิคการย้อมคินยูน
- 2.6 เทคนิคพิเศษ Kinyoun สำหรับ Nocardias
- 2.7 เทคนิคการรวมฟีนอลิกและเฟชชิมิกฟูซินดัดแปลงโดยดิดิเยร์
- 2.8 การควบคุมคุณภาพ
- 3 เทคนิค Kinyoun เทียบกับเทคนิค Ziehl -Neelsen
- 4 อ้างอิง
มูลนิธิ
น้ำยาย้อมสีหลักคือ carbol fuchsin หรือ fuchsin fenicada ซึ่งมีคุณสมบัติในการจับกับกรดคาร์โบลิกที่มีอยู่ภายในผนังเซลล์ข้าวเหนียวที่อุดมไปด้วยไขมัน (กรด mycolic) ของเชื้อมัยโคแบคทีเรียและปรสิตบางชนิด.
การรวมกันนั้นไม่ได้ถูกต่อต้านโดยการลดความเป็นกรด ดังนั้นจุลินทรีย์หมายถึงแอลกอฮอล์ทนกรด.
ซึ่งแตกต่างจากเทคนิค Ziehl-Neelsen ซึ่งแก้ไขสีด้วยความร้อนในเทคนิค Kinyoun ขั้นตอนนี้ไม่จำเป็นเนื่องจากสารละลาย phenolic fuchsin ที่เตรียมไว้สำหรับเทคนิคนี้มีความเข้มข้นสูงของฟีนอล.
ฟีนอลละลายวัสดุไขมันของผนังเซลล์ซึ่งช่วยให้การป้อนสีย้อม carbol fuchsin หลังจากที่สีย้อมแทรกซึมมันยังคงอยู่แม้จะล้างด้วยกรดแอลกอฮอล์.
ด้วยวิธีนี้จุลินทรีย์ที่ทนกรดใช้สีแดงลักษณะเฉพาะในขณะที่ทุกอย่างที่ไม่ใช่แอลกอฮอล์ทนกรดจะเปลี่ยนสีและย้อมสีน้ำเงิน.
เทคนิค
วัสดุ
- ฟีนอลฟิชชันดัดแปลง.
- -acetic เครื่องดื่มแอลกอฮอล์.
- เมทิลีนสีน้ำเงิน.
การเตรียมการของ Finyicated Fuchicated Fuchsin
- Fuchsin พื้นฐาน: 4 gr.
- ฟีนอล: 8 มล.
- แอลกอฮอล์ (95%): 20 มล.
- น้ำกลั่น: 100 มล.
ฟิวซินขั้นพื้นฐานในแอลกอฮอล์จะต้องละลายอย่างช้าๆผสมอย่างต่อเนื่อง ต่อจากนั้นฟีนอลที่ตกผลึกจะถูกละลายในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 56 องศาเซลเซียส เมื่อละลายเพิ่ม 8 มล. ในสารละลายฟูชสินที่เตรียมไว้ข้างต้น.
การเตรียมกรดแอลกอฮอล์
- กรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น: 3 มล.
- เอทานอล (95%): 97 มล.
มันจะต้องถูกวัดเข้าร่วมและผสม.
การเตรียมสีย้อมเมทิลีนสีน้ำเงิน
- เมทิลีนสีน้ำเงิน: 0.3 กรัม.
- น้ำกลั่น: 100 มล.
มันชั่งน้ำหนักและละลาย.
เทคนิคการย้อม Kinyoun
1- เตรียม smear โดยตรงจากตัวอย่างซึ่งอาจเป็นเสมหะของเหลวในปอด, ตะกอนปัสสาวะ, น้ำไขสันหลังหรืออุจจาระกลุ่มอื่น ๆ ; หรือจากการระงับของจุลินทรีย์ที่ได้จากอาณานิคมบริสุทธิ์ที่พัฒนาในสื่อวัฒนธรรมหลัก.
2- แก้ไข smear ด้วยความร้อน.
3- วางรอยเปื้อนบนสะพานระบายสีและปิดบังด้วยน้ำยาฟีนอลฟินซินของ Kinyoun ปล่อยให้มันนั่งเป็นเวลา 3 หรือ 5 นาที.
4- ล้างด้วยน้ำกลั่น.
5- ฟอกขาวด้วยแอลกอฮอล์กรดเป็นเวลา 3 นาทีและล้างอีกครั้งด้วยน้ำกลั่น.
6- ฟอกขาวอีกครั้งด้วยกรดแอลกอฮอล์เป็นเวลา 1 หรือ 2 นาทีจนกว่าจะไม่มีการย้อมอีกต่อไป.
7- ล้างด้วยน้ำกลั่นและปล่อยให้ระบายวางสไลด์ในตำแหน่งตั้งตรง.
8- ปิดการเตรียมด้วยเมทิลีนบลูและทิ้งไว้ 4 นาที.
9- ล้างด้วยน้ำกลั่นและปล่อยให้อากาศแห้ง.
10- ตรวจสอบที่ 40X และต่อที่ 100X.
ถ้าคุณต้องการที่จะปรับปรุงและเร่งการย้อมสีของจุลินทรีย์ที่เป็นกรดอย่างรวดเร็วให้เพิ่มตัวแทนหยดน้ำ 1 หยด (เช่น tergitol หมายเลข 7) เป็น 30 หรือ 40 มล. ของฟีนอลิกฟิชชันของ Kinyoun.
ห้องแล็บบางแห่งเปลี่ยนสีย้อมเมทิลีนสีน้ำเงินเพื่อให้ได้สีเขียวหรือกรด ครั้งแรกให้สีเขียวกับพื้นหลังและที่สองสร้างสีเหลือง.
เทคนิค Kinyoun พิเศษสำหรับ Nocardias
เพื่อปรับปรุงการย้อมสีของแบคทีเรีย Nocardia จึงใช้การย้อมสี Kinyoun เทคนิคดังต่อไปนี้:
1- ปกปิดรอยเปื้อนด้วย Kinyoun fuchicated fuchsin เป็นเวลา 3 นาที.
2- ล้างด้วยน้ำกลั่น.
3- ฟอกสีด้วยแอลกอฮอล์ที่เตรียมกรด 3% จนกระทั่งไม่มีสีย้อมติดอีก.
4- ล้างอีกครั้งด้วยน้ำกลั่น.
5- ปิดการเตรียมด้วยเมทิลีนบลูและทิ้งไว้ 30 วินาที.
6- ล้างด้วยน้ำกลั่นและปล่อยให้อากาศแห้ง.
เทคนิคผสมผสานของฟีนอลิกและเฟชชิมิชชันฟูซินดัดแปลงโดยดิดิเยร์
เทคนิคนี้เหมาะสำหรับการวิเคราะห์ตัวอย่างอุจจาระเพื่อค้นหา coccidia และสปอร์ของ Microsporidium sp ในเวลาเดียวกัน ขั้นตอนที่ต้องปฏิบัติตามมีดังนี้:
1- ปกปิดรอยเปื้อนด้วย Kinyoun phenolic fuchsin เป็นเวลา 10 นาที.
2- เอาสีย้อมและล้างด้วยน้ำกลั่น.
สารฟอกขาวเป็นเวลา 30 วินาทีด้วยกรดไฮโดรคลอริกแอลกอฮอล์.
4- ล้างอีกครั้งด้วยน้ำกลั่น.
5- ปกคลุม smear ด้วยสารละลายไตรคลอร์เรียมเป็นเวลา 30 นาทีที่ 37 ° C.
6- ล้างด้วยน้ำกลั่น.
7- ลดสีเป็นเวลา 10 วินาทีด้วยกรดอะซิติกแอลกอฮอล์.
8- ล้าง smear เป็นเวลา 30 วินาทีโดยใช้ 95% เอทานอล.
การควบคุมคุณภาพ
ในฐานะที่เป็นการควบคุมในเชิงบวกรอยเปื้อนจะถูกจัดทำขึ้นด้วยสายพันธุ์ของ วัณโรคมัยโคแบคทีเรีย และย้อมด้วยรีเอเจนต์ที่เตรียมไว้เพื่อตรวจสอบว่าแบคทีเรียใช้สีที่เหมาะสม (แดง - บานเย็น).
การควบคุมเชิงลบยังสามารถนำมาใช้โดยการเตรียมรอยเปื้อนด้วยสายพันธุ์ที่ไม่ใช่แอลกอฮอล์ทนกรดจึงตรวจสอบว่าตัวอย่างทั้งหมดใช้สีของความคมชัด.
เทคนิค Kinyoun เปรียบเทียบกับเทคนิค Ziehl -Neelsen
เทคนิค Kinyoun นั้นง่ายกว่าเพราะจะช่วยลดขั้นตอนการให้ความร้อน แต่ข้อดีหลักของมันคือการป้องกันการปล่อยไอระเหยของสารพิษและก่อให้เกิดมะเร็งในระยะยาว ดังนั้นการย้อมสี Kinyoun จึงปลอดภัยสำหรับการย้อมสีบุคลากร.
มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องคำนึงถึงว่ามันเป็นสิ่งจำเป็นที่จะต้องดูแลว่าน้ำยาที่ไม่ได้สัมผัสโดยตรงกับผิวหนังเนื่องจากพวกเขามีการกัดกร่อนและสารฟอกขาวเป็นสารไวไฟ.
เกี่ยวกับข้อเสีย, การละเลงเชิงลบไม่จำเป็นต้องระบุว่าจุลินทรีย์นั้นไม่ได้มีอยู่ นอกจากนี้การมีเซลล์ของเศษซากสามารถทำให้เกิดผลบวกปลอมซึ่งสร้างความสับสนในการวินิจฉัย.
การอ้างอิง
- เคมีประยุกต์คลินิก (2016) Kit BK Kinyoun มีจำหน่ายที่: cromakit.es
- Orozco-Rico Miguel Kinyoun เปื้อนและสอง Coccidia ในเอชไอวี วารสารการแพทย์ ปี 2011 3 (2): 137
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด อาร์เจนตินา Panamericana S.A บทบรรณาธิการ.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา (ฉบับที่ 5) อาร์เจนตินา, Panamericana บรรณาธิการ.
- ผู้มีส่วนร่วมใน Wikipedia "Kinyoun เปื้อน" Wikipedia, สารานุกรมเสรี. Wikipedia, The Free Encyclopedia, 8 ก.พ. 2018 เว็บ 5 ม.ค. 2019.
- Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. การนำเทคนิคการใช้สีมาใช้ในการวินิจฉัยโรค Coccidia และ Microsporidia พร้อมกัน สถาบันสุขอนามัยของมหาวิทยาลัยแห่งสาธารณรัฐ มอนเตวิเด อุรุกวัย มีจำหน่ายที่: higiene.edu.uy