รากฐานน้ำซุป Tetrathionate การเตรียมและการใช้งาน

น้ำซุป tetrationate หรือ TT broth เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีคุณสมบัติเป็นของเหลวที่เหมาะสำหรับการเสริมสร้างและฟื้นฟูสายพันธุ์เชื้อ Salmonella มันถูกสร้างขึ้นโดยMüellerและดัดแปลงในภายหลังโดย Kauffmann ด้วยเหตุนี้จึงมีผู้ที่เรียกมันว่าMüeller-Kauffmann broth.

สื่อดั้งเดิมประกอบด้วยโปรตีน peptones, แคลเซียมคาร์บอเนตและโซเดียมไธโอซัลเฟต คอฟฟ์มันน์เพิ่มเกลือน้ำดีและสร้างรูปแบบอื่นด้วยสีเขียวสดใส สารเหล่านี้ยับยั้งการเจริญเติบโตของโคลิฟอร์มออกจากสื่อฟรีสำหรับการพัฒนาของแบคทีเรียที่ทำให้เกิดโรคในกรณีนี้ Salmonella.

การดัดแปลงนั้นประสบความสำเร็จอย่างมากเพราะมันเพิ่มความไวของสื่ออย่างมาก ดังนั้นในปัจจุบันจึงมีประโยชน์สำหรับการค้นหา Salmonellas ในตัวอย่างทุกประเภทโดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับอุจจาระที่เป็นของแข็งหรือของเหลวและอาหาร.

การเตรียมการประกอบด้วยสองขั้นตอน สื่อการค้าเป็นฐานสำหรับการเตรียมน้ำซุปเตตราไธโอเนตและจากนั้นสำหรับเทเตราไทโอเนตที่จะก่อตัวสารละลายไอโอดีนที่เสริมไอโอดีนจะถูกเติมเพื่อเติมสารตัวกลาง.

สมาคมสาธารณสุขแห่งสหรัฐอเมริกา (APHA) แนะนำให้ใช้น้ำซุปที่มีส่วนประกอบของสีเขียวสดใสเพื่อเพิ่มปริมาณตัวอย่างในการค้นหาเชื้อ Salmonella เนื่องจากมีการคัดเลือกมากกว่าน้ำซุปเตตราธาไอออนและน้ำเซเลไนท์.

โดยทั่วไปแล้วน้ำซุป tetrathionate เป็นอุดมคติเมื่อแบคทีเรียในสกุล Salmonella ถูกสงสัยในปริมาณน้อยหรือถูกทารุณกรรมจากการสัมผัสกับสารยับยั้งหรือกระบวนการทางอุตสาหกรรมที่ลดการมีชีวิตอยู่.

ดัชนี

• 1 มูลนิธิ
• 2 การเตรียมการ
  • 2.1 - Tetrathionate
  • 2.2 น้ำซุปเตตริโอทีเอเทอเรชันที่มีสีเขียวสดใส
• 3 ใช้
• 4 การควบคุมคุณภาพ
• 5 ข้อเสนอแนะ
• 6 อ้างอิง

มูลนิธิ

peptones ในปัจจุบันสอดคล้องกับการย่อยของเคซีนในตับอ่อนและการย่อยสลายของเนื้อเยื่อในสัตว์ สิ่งเหล่านี้เป็นแหล่งของคาร์บอนไนโตรเจนและสารอาหารโดยทั่วไปสำหรับการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย.

โซเดียมไธโอซัลเฟตทำปฏิกิริยากับสารละลายไอโอดีนในรูปแบบ tetrathionate สิ่งนี้ยับยั้งการเจริญเติบโตของ coliforms และสนับสนุนการพัฒนาของแบคทีเรียที่มีเอนไซม์ tetrathionate reductase ในหมู่พวกเขาคือสกุลซัลโมเนลลา แต่ยัง Proteus.

เกลือน้ำดียังทำหน้าที่เป็นสารยับยั้งแบคทีเรียแกรมบวกส่วนใหญ่และแบคทีเรียแกรมลบบางตัว (โคลิฟอร์ม).

แคลเซียมคาร์บอเนตดูดซับสารพิษที่เกิดจากการสลายตัวของ tetrathionate ซึ่งเป็นกรดซัลฟูริก ในแง่นี้แคลเซียมคาร์บอเนตจะทำให้ความเป็นกรดเป็นกลางนั้นรักษาค่า pH ของตัวกลางที่เสถียร.

ในกรณีที่มีสีเขียวสดใสสารนี้จะเพิ่มพลังในการเลือกน้ำซุปเตตราเธโอเนตโดยการยับยั้งเชื้อจุลินทรีย์อื่นนอกเหนือจากซัลโมเนลล่าสกุล.

การจัดเตรียม

-น้ำซุป Tetrationate

สารละลายไอโอดีนไอโอดีน

เสียใจ:

• 6 กรัมของไอโอดีน.
• โพแทสเซียมไอโอไดด์ 5 กรัม.

โพแทสเซียมไอโอไดด์จะละลายในน้ำกลั่นที่ผ่านการฆ่าเชื้อประมาณ 5 มล. จากนั้นไอโอดีนจะถูกเพิ่มทีละน้อยในขณะที่ส่วนผสมถูกทำให้ร้อน หลังจากละลายอย่างสมบูรณ์แล้วจะเต็มไปด้วยน้ำกลั่นที่ผ่านการฆ่าเชื้อจนกว่าจะถึงปริมาตร 20 มล.

ครึ่งฐานสำหรับน้ำซุป tetrathionate

มีน้ำหนัก 46 กรัมของตัวกลางที่ถูกทำให้แห้งและแขวนในน้ำกลั่น 1 ลิตร ผสมกับความร้อนจนละลายสนิทสามารถต้มได้เพียงไม่กี่นาที อย่าฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดัน ฐานของสื่อได้รับอนุญาตให้เย็นถึงประมาณ 45 ° C และในเวลานั้นเติมสารละลายไอโอดีน 20 มล..

หลังจากเพิ่มโซลูชัน iodurada ลงในสื่อควรใช้งานทันที หากคุณไม่ต้องการใช้ส่วนผสมทั้งหมดให้ทำดังนี้:

ขนาดกลาง 10 มิลลิลิตรถูกกระจายในหลอดและสารละลายไอโอดีน 0.2 มล. เท่านั้นที่ถูกเติมเข้าไปในตัวอย่างที่จะฉีดวัคซีน.

ผู้ที่ไม่ได้นำไปใช้ยังสามารถเก็บไว้ในตู้เย็นได้อย่างไรก็ตามเนื่องจากสื่อไม่ได้ผ่านการฆ่าเชื้ออุดมคติคือการเตรียมปริมาณที่แน่นอน.

สีของสื่อก่อนที่จะเติมสารละลายไอโอดีนไอโอดีนเป็นสีขาวนมกับตะกอนสีขาวและหลังจากเพิ่มมันเป็นสีน้ำตาลที่มีการตกตะกอนหนาแน่น การตกตะกอนที่สังเกตเป็นเรื่องปกติและสอดคล้องกับแคลเซียมคาร์บอเนตที่ไม่ละลาย ค่า pH สุดท้ายของสื่อคือ 8.4 ± 0.2.

-น้ำซุป Tetrathionate มีสีเขียวสด

ในการเตรียมน้ำซุป tetrathionate ด้วยสีเขียวสดใสทุกขั้นตอนที่อธิบายไว้ข้างต้นจะถูกดำเนินการ แต่นอกจากนี้จะมีการเพิ่มสารละลายสีเขียวสดใส 10 มล. ที่เตรียมไว้ที่ 0.1% ลงในส่วนผสม.

เขียวชอุ่ม

โซลูชันนี้จัดทำขึ้นดังต่อไปนี้:

มีน้ำหนักสีเขียวสดใส 0.1 กรัมและแขวนในน้ำกลั่น 100 มล. ตั้งไฟจนเดือดเพื่อให้ส่วนผสมทั้งหมดละลาย ประหยัดในขวดอำพัน.

ใช้

สำหรับตัวอย่างอุจจาระ (วัฒนธรรมอุจจาระ) โปรโตคอลมีดังนี้:

ฉีดยาอุจจาระแข็ง 1 กรัมหรืออุจจาระเหลว 1 มล. ในหลอดที่มีน้ำซุปเตตราธีโอเนตเตรียมไว้ 10 มล. เขย่าอย่างแรงและฟักใน aerobiosis ที่อุณหภูมิ 43 ° C เป็นเวลา 6-24 ชั่วโมง.

จากนั้นใช้น้ำซุป 10 ถึง 20 ไมโครลิตรในน้ำซุปและเลี้ยงเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อเพื่อเลือกเชื้อซัลโมเนลล่าเช่น SS agar, SS agar, XLD agar, agar สีเขียวสดใส, Hektoen enteric agar และอื่น ๆ.

ในแบบคู่ขนานสื่อที่เลือกใช้สำหรับ Salmonella ควรได้รับการฉีดวัคซีนด้วยตัวอย่างโดยตรง (อุจจาระ) โดยไม่มีการตกแต่ง สำหรับตัวอย่างของไส้เดือนทวารหนักให้ดาวน์โหลดวัสดุที่เก็บรวบรวมในหลอดและดำเนินการตามที่อธิบายไว้ข้างต้น.

สำหรับตัวอย่างอาหารที่มีน้ำหนักอาหารแข็ง 10 กรัมหรืออาหารเหลว 10 มล. และฉีดวัคซีนที่มีน้ำซุปเตตราเธโอเนต 100 มิลลิลิตรพร้อมดื่ม ดำเนินการในลักษณะเดียวกับที่อธิบายข้างต้น แต่บ่มที่ 37 ° C.

ดังที่เห็นได้ว่าความสัมพันธ์ระหว่างตัวอย่างกับน้ำซุปจะเป็น 1:10 เสมอ.

การควบคุมคุณภาพ

เพื่อทดสอบสื่อการเพาะเลี้ยงสามารถใช้สายพันธุ์ควบคุมที่รู้จักได้ ที่ใช้กันมากที่สุดคือสายพันธุ์ที่ได้รับการรับรอง ATCC.

สายพันธุ์ที่จะใช้คือ Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, เชื้อ Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 และ เชื้อ Staphylococcus aureus ATCC 25923.

สำหรับเชื้อ Salmonella คาดว่าจะมีการพัฒนาที่ดีเยี่ยม Escherichia coli อาจมีการพัฒนาที่อ่อนแอหรือปกติและสายพันธุ์แกรมบวก (Enterococcus และ Staphylococcus) ถูกยับยั้งบางส่วนหรือทั้งหมด.

คำแนะนำ

-เนื่องจากสื่อนี้ไม่สามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของโพรทูสได้ห้องปฏิบัติการบางแห่งใช้ยาโนบิโนซิซิน 40 มก. / ลิตรเพื่อป้องกันการพัฒนาของเชื้อจุลินทรีย์สายพันธุ์นี้ ควรเพิ่มยาปฏิชีวนะก่อนสารละลายไอโอดีนไอโอดีน.

-หลังจากเตรียมสื่อแล้วรวมถึงสารละลายไอโอดีนไอโอดีนไม่ควรเกิน 2 ชั่วโมงหลังจากฉีดวัคซีน.

-ในขณะที่การกระจายสื่อในหลอดส่วนผสมจะต้องเป็นเนื้อเดียวกันอย่างต่อเนื่องเพื่อแขวนตะกอนที่เกิดขึ้นอีกครั้ง.

-ในตัวอย่างที่มีการปนเปื้อนน้อยน้ำซุปเทตราเธโอเนตจะถูกบ่มที่อุณหภูมิ 35-37 ° C และในตัวอย่างที่มีการปนเปื้อนสูงแนะนำให้ใช้การบ่มที่ 43 ° C.

การอ้างอิง

1. ห้องปฏิบัติการ Conda Pronadisa 2010 ฐานน้ำซุป tetrathionate อ้างอิงจากMüeller-Kauffmann ที่มีอยู่ใน:
2. BD Laboratories 2546. ฐานน้ำซุป Tetrathionate ที่มีอยู่ใน:
3. ห้องปฏิบัติการ Britania 2558. ฐานน้ำซุปเทธิโอเนท ที่มีอยู่ใน:
4. สื่อ BBL 2548. การเตรียมท่อสำหรับการเพาะพันธุ์ของเชื้อ Salmonella.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด บรรณาธิการ Panamericana S.A. อาร์เจนตินา.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. การเปรียบเทียบระหว่างสื่อวัฒนธรรมของโซเดียม selenite และ tetrathionate ของโซเดียมทั้งบ่มที่ 37 ° C และ 42 ° C สำหรับ ความเหงาของ Salmonella spp ของอุจจาระพาหะ. Rev Biomed 2003 14 (4): 215-220