รากฐานน้ำซุปถั่วเหลืองเตรียมและการใช้งาน

น้ำซุปถั่วเหลืองtripticaseína มันเป็นสื่อวัฒนธรรมของเหลวมีคุณค่าทางโภชนาการและไม่เลือก ด้วยความสามารถรอบด้านที่ยอดเยี่ยมจึงเป็นหนึ่งในสื่อการเลี้ยงของเหลวที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยา.

เป็นที่รู้จักกันว่า broth tripticasa soy หรือ casein-soy ที่ย่อยแล้วซึ่งตัวย่อคือ TSB สำหรับคำย่อในภาษาอังกฤษ Tryptic ฉันเป็น น้ำซุปหรือ CST สำหรับคำย่อในภาษาสเปน การใช้งานมีความหลากหลายมากเนื่องจากองค์ประกอบของมัน มันประกอบด้วย triptein, ถั่วเหลืองเปปโตน, โซเดียมคลอไรด์, ไดโพแทสเซียมฟอสเฟตและกลูโคส.

มันมีความสามารถในการทำซ้ำแบคทีเรียที่ทำให้เกิดโรคที่สำคัญทางคลินิกรวมถึงพวกที่มีความต้องการทางโภชนาการและแบคทีเรียแบบไม่ใช้ออกซิเจน เชื้อราฉวยโอกาสและสารปนเปื้อนบางชนิดสามารถพัฒนาได้ในสภาพแวดล้อมเช่นนี้.

เนื่องจากมีพลังงานทางโภชนาการสูงจึงมีความไวสูงในการตรวจจับการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ด้วยเหตุนี้จึงได้รับเลือกจาก USDA Animal and Plant Health Service Service สำหรับการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของวัคซีน.

เช่นเดียวกันซุปถั่วเหลืองของไตรเซติเซสสนองความต้องการของตำรับยาต่าง ๆ (European EP, JP ญี่ปุ่นและอเมริกาเหนือ USP) สำหรับการศึกษาทางจุลชีววิทยาของผลิตภัณฑ์ในระดับอุตสาหกรรมเช่นเครื่องสำอางและอาหาร.

ในทางกลับกันมันเป็นสิ่งที่ควรค่าแก่การกล่าวถึงแม้ว่ายูทิลิตี้ที่ยอดเยี่ยมของมันจะมีราคาไม่แพงดังนั้นจึงมีราคาไม่แพงสำหรับห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยาส่วนใหญ่ นอกจากนี้ยังง่ายต่อการเตรียมการ.

ดัชนี

• 1 มูลนิธิ
• 2 การเตรียมการ
  • 2.1 Trypticamine soybean
  • 2.2 - น้ำซุปทริปปิกาเซซินถั่วเหลืองแปรปรวน
• 3 ใช้
• 4 เมล็ด
• 5 การควบคุมคุณภาพ
• 6 ข้อ จำกัด
• 7 อ้างอิง

มูลนิธิ

tripteína, peptone และกลูโคสให้คุณสมบัติทางโภชนาการที่จำเป็นแก่เขาในการเปลี่ยนเป็นอาหารในอุดมคติสำหรับการพัฒนาของจุลินทรีย์อย่างรวดเร็ว.

การฟักตัวประมาณ 6 ถึง 8 ชั่วโมงสามารถเห็นการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ส่วนใหญ่แล้ว อย่างไรก็ตามมีสายพันธุ์ที่เติบโตช้าที่สามารถอยู่ได้นานหลายวันที่จะเติบโต.

โซเดียมคลอไรด์และไดโพแทสเซียมฟอสเฟตทำหน้าที่เป็นสมดุลออสโมติกและควบคุมค่า pH ตามลำดับ การปรากฏตัวของการเติบโตเป็นหลักฐานจากการปรากฏตัวของความขุ่นในสื่อ; ถ้าไม่มีการเติบโตตัวกลางจะยังคงโปร่งแสง.

เนื่องจากสีอ่อนของมันจึงเป็นไปได้ที่จะสังเกตการผลิตเม็ดสีเช่นที่แสดงในภาพที่อยู่ที่จุดเริ่มต้นของบทความซึ่งสอดคล้องกับเม็ดสีที่ผลิตโดย Pseudomonas aeruginosa. 

การจัดเตรียม

-น้ำซุปถั่วเหลือง tryptic

ในการเตรียมน้ำซุปถั่วเหลือง tripticase ให้ชั่งน้ำหนัก 30 กรัมของตัวกลางการค้าที่ขาดน้ำในระดับดิจิตอล จากนั้นมันจะละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตรที่บรรจุอยู่ใน fiola.

ส่วนผสมได้รับอนุญาตให้ยืนเป็นเวลา 5 นาทีแล้วนำไปยังแหล่งความร้อนเพื่อช่วยในการละลายของสื่อ ควรเขย่าบ่อยๆขณะต้มเป็นเวลา 1 นาที.

เมื่อละลายแล้วจะกระจายเป็นหลอดขนาดที่เหมาะสมตามต้องการ สามารถใช้หลอดที่มีปลั๊กฝ้ายหรือหมวกเบ็กไลต์ได้ ต่อจากนั้นท่อจะผ่านการฆ่าเชื้อด้วยตัวกลางในหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที.

ค่าความเป็นกรด - ด่างของตัวกลางควรเท่ากับ 7.3 ± 0.2

ควรคำนึงถึงสีของอาหารเลี้ยงเชื้อที่ขาดน้ำคือสีเบจอ่อนและควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 10 ถึง 35 °ซในที่แห้ง ในขณะที่น้ำซุปที่เตรียมไว้นั้นเป็นสีเหลืองอ่อนและควรเก็บไว้ในตู้เย็น (2 ถึง 8 ° C).

-การเปลี่ยนแปลงของน้ำซุปถั่วเหลือง tripticasein

ทริปทีมีมีนที่ดัดแปลงจากน้ำซุปถั่วเหลืองสามารถเตรียมได้โดยการเติมเกลือน้ำดีและโนโวบีซินเพื่อให้สามารถเลือกแยก อี. โคไล. ตัวเลือกอื่นสำหรับจุดประสงค์เดียวกันคือการเตรียมน้ำซุปถั่วเหลือง tripticase ที่เสริมด้วย vancomycin, เซฟิกซิมและเทลลูไรท์ (2.5 μg / ml).

ในทางกลับกันก็สามารถเติมกลูโคส (0.25%) เพิ่มเข้าไปใน trypticasein soy broth เมื่อมีวัตถุประสงค์เพื่อกระตุ้นการสร้างไบโอฟิล์ม.

ใช้

มันมีคุณค่าทางโภชนาการเพียงพอที่จะทำให้การเจริญเติบโตของแบคทีเรียที่ต้องการหรือน่ารำคาญเช่น Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp และ Brucella sp, ไม่จำเป็นต้องเสริมด้วยเลือดหรือเซรั่ม.

ในทำนองเดียวกันเชื้อราบางชนิดสามารถพัฒนาในน้ำซุปนี้เช่น แคนดิดาอัลบิแคนคอมเพล็กซ์, Aspergillus sp และ ฮีสโตพลาสม่าแคปซูล.

นอกจากนี้สื่อนี้ภายใต้เงื่อนไขแบบไม่ใช้ออกซิเจนเหมาะสำหรับการกู้คืนแบคทีเรียที่อยู่ในสกุล Clostridium เช่นเดียวกับแบคทีเรียแบบไม่ใช้ออกซิเจนแบบไม่ใช้สปอร์ที่มีความสำคัญทางคลินิก.

หากเพิ่มโซเดียมคลอไรด์ 6.5% สามารถใช้สำหรับการเจริญเติบโตของ Enterococcus และกลุ่ม D Streptococcus อื่น ๆ.

ในระดับการวิจัยมันมีประโยชน์มากในโปรโตคอลต่าง ๆ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการศึกษาของแบคทีเรียที่สร้างไบโอฟิล์มหรือไบโอฟิล์ม นอกจากนี้ยังใช้ในการเตรียมการระงับแบคทีเรียที่ 0.5% ของ Mac Farland ที่จำเป็นในการทำ antibiogram โดยวิธีการของ Kirby และ Bauer.

ในกรณีนี้ 3 ถึง 5 โคโลนีที่มีรูปร่างคล้ายกันจะถูกถ่ายและผสมกับน้ำซุปทริปติกเซซินถั่วเหลือง 4-5 มิลลิลิตร จากนั้นจะทำการบ่มเป็นเวลา 2 ถึง 6 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 35-37 ° C และปรับตามความเข้มข้นที่ต้องการโดยใช้น้ำเกลือปลอดเชื้อ Trypticase broths ไม่ควรใช้เวลา 18 ถึง 24 ชั่วโมงในการบ่ม.

ปลูก

ตัวอย่างสามารถหว่านโดยตรงหรือเพาะเลี้ยงอาณานิคมบริสุทธิ์ที่นำมาจากสื่อที่เลือก หัวเชื้อควรมีขนาดเล็กเพื่อไม่ให้เป็นก้อนเมฆก่อนที่จะฟักตัว.

ปกติจะฟักตัวที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง แต่เงื่อนไขเหล่านี้อาจแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับจุลินทรีย์ที่ต้องการ นอกจากนี้ยังสามารถบ่มในสภาวะไร้อากาศที่อุณหภูมิ 37 ° C เป็นเวลาหลายวันหากจำเป็น ตัวอย่างเช่นในการเพาะเลี้ยงเชื้อที่เรียกร้องหรือเติบโตช้าสามารถบ่มได้นานถึง 7 วัน.

ในการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของสารยา - เช่นวัคซีน - โปรโตคอลมีความเข้มงวด ในกรณีเหล่านี้น้ำซุปที่ไม่มีการเจริญเติบโตจะไม่ถูกทิ้งจนกว่าจะถึง 14 วันของการฟักอย่างต่อเนื่อง.

การควบคุมคุณภาพ

สำหรับแต่ละชุดเตรียม 1 หรือ 2 หลอดควรได้รับการบ่มโดยไม่ต้องฉีดวัคซีนเพื่อแสดงให้เห็นถึงการฆ่าเชื้อ มันจะต้องไม่เปลี่ยนแปลง.

คุณสามารถปลูกสายพันธุ์ที่รู้จักเพื่อประเมินพฤติกรรมของพวกเขา ในสายพันธุ์ที่สามารถใช้ได้คือ:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, เชื้อ Staphylococcus aureus ATCC 6538 หรือ 25923, Escherichia coli ATCC 8739,  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

ในทุกกรณีการเจริญเติบโตจะต้องเป็นที่น่าพอใจภายใต้เงื่อนไขของบรรยากาศและอุณหภูมิที่เหมาะสมสำหรับจุลินทรีย์แต่ละชนิด.

ข้อ จำกัด

-การหมักกลูโคสทำให้ค่า pH ของตัวกลางลดลงเนื่องจากการผลิตกรด สิ่งนี้อาจไม่เป็นผลดีต่อการอยู่รอดของจุลินทรีย์บางชนิดที่ไวต่อความเป็นกรด.

-ไม่แนะนำสำหรับการบำรุงรักษาสายพันธุ์เพราะนอกเหนือไปจากความเป็นกรดแบคทีเรียหลังจากไม่กี่วันทำให้หมดสิ้นลงสารอาหารที่มีการสะสมของสารพิษที่เป็นผลที่ทำให้สภาพแวดล้อมที่ไม่เอื้ออำนวย.

-ต้องใช้ความระมัดระวังในการดูแลโปรโตคอลการฆ่าเชื้อทั้งหมดเนื่องจากน้ำซุปมีการปนเปื้อนได้ง่าย.

-หลังจากการเตรียม tripticasein ในน้ำซุปถั่วเหลืองอย่าพยายามถ่ายโอนน้ำซุปไปยังหลอดที่ปลอดเชื้ออีกอันเนื่องจากการประลองยุทธ์ประเภทนี้มีความเสี่ยงสูงต่อการปนเปื้อน.

การอ้างอิง

1. Cona E. เงื่อนไขสำหรับการศึกษาความอ่อนไหวที่ดีโดยการทดสอบการแพร่ของวุ้น รายได้ชิล infectol ปี 2002 19 (2): 77-81 มีจำหน่ายที่: scielo.org
2. ห้องปฏิบัติการอังกฤษ Tryteine ​​น้ำซุปถั่วเหลือง 2558 มีจำหน่ายที่: britanialab.com
3. ห้องปฏิบัติการ MCD Trytica น้ำซุปถั่วเหลือง มีจำหน่ายที่: electronic-systems.com
4. ห้องปฏิบัติการ Neogen น้ำซุปถั่วเหลืองอันมีค่า มีจำหน่ายที่: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด บรรณาธิการ Panamericana S.A. อาร์เจนตินา.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. การประเมินผลของเทคนิคการกระตุ้นด้วยคลื่นแม่เหล็กไฟฟ้า Escherichia coli O157: H7 ในครีมนม อลัน 2006 56 (3): 257-264 มีจำหน่ายที่: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Biofilm การก่อตัวในที่แยก เชื้อ Staphylococcus aureus ตามความไวต่อยาต้านจุลชีพและที่มาทางคลินิก ใบสมัครงาน 2015; 62 (1): 1-8 มีจำหน่ายที่: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. การแยกของ Escherichia coli O157: H7 ในตัวอย่างวัวโควัตถุประสงค์สองตัวจากเทศบาลเมืองมิแรนดารัฐซูเลียประเทศเวเนซุเอลา รายได้ Cient (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245 มีจำหน่ายที่: scielo.org