รากฐานน้ำซุปยูเรียการเตรียมและการใช้งาน

น้ำซุปยูเรีย เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อเหลวใช้เพื่อแสดงการมีอยู่ของเอนไซม์ยูเรียในจุลินทรีย์บางชนิด Urease เป็นเอนไซม์จุลินทรีย์ที่ผลิตขึ้นเองนั่นคือมันถูกสังเคราะห์อย่างอิสระไม่ว่าจะเป็นสารตั้งต้นหรือไม่ก็ตาม.

หน้าที่ของยูเรียเกี่ยวข้องกับการสลายตัวของสารประกอบอินทรีย์ จุลินทรีย์ทั้งหมดไม่สามารถสังเคราะห์เอนไซม์นี้ได้ดังนั้นความมุ่งมั่นของมันในห้องปฏิบัติการจึงช่วยให้สามารถระบุสายพันธุ์แบคทีเรียบางชนิดและสามารถแยกแยะความแตกต่างระหว่างสายพันธุ์ของพืชสกุลเดียวกันได้.

การทดสอบยูเรียมีสองประเภท: Stuart และ Christensen พวกเขาแตกต่างกันในองค์ประกอบและความไวของพวกเขา สิ่งแรกคือสิ่งพิเศษที่แสดงยูเรียจำนวนมากที่ผลิตโดยสปีชีส์ของโปรตีอุส.

ที่สองมีความไวมากขึ้นและสามารถตรวจพบยูเรียจำนวนเล็กน้อยที่เกิดขึ้นในช่วงปลายของเชื้อแบคทีเรียอื่น ๆ เช่น Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter และ Mycobacterium.

Stuart urea broth ประกอบด้วยยูเรีย, โซเดียมคลอไรด์, ไดโพแทสเซียมฟอสเฟต, โมโนโพแทสเซียมฟอสเฟต, สารสกัดจากยีสต์, ฟีนอลสีแดงและน้ำกลั่น.

ในขณะที่น้ำซุปคริสเตนเซนหรือยูเรียประกอบด้วย peptones, โซเดียมคลอไรด์, โมโนโพแทสเซียมฟอสเฟต, กลูโคส, ยูเรีย, ฟีนอลสีแดง, น้ำกลั่นและวุ้นวุ้น หลังเท่านั้นหากเป็นสื่อที่เป็นของแข็ง.

ดัชนี

• 1 มูลนิธิ
  • 1.1 Stuart urea broth
  • 1.2 Christensen broth หรือ agar urea
  • 1.3 การตีความสื่อทั้งสอง (สจวร์ตและคริสเตนเซน)
• 2 การเตรียมการ
  • 2.1 Stuart urea broth
  • 2.2 Christensen broth หรือ agar urea
• 3 ใช้
• 4 การหว่านยูเรียทดสอบ
• 5 การควบคุมคุณภาพ
• 6 อ้างอิง

มูลนิธิ

เอนไซม์ยูเรียไฮโดรไลซ์ยูเรียจะกลายเป็นคาร์บอนไดออกไซด์น้ำและโมเลกุลของแอมโมเนียสองโมเลกุล สารประกอบเหล่านี้จะทำปฏิกิริยากับผลิตภัณฑ์สุดท้ายที่เรียกว่าแอมโมเนียมคาร์บอเนต.

Stuart ยูเรียซุป

Stuart urea broth นั้นถูกบัฟเฟอร์มากขึ้นด้วยค่า pH 6.8 ดังนั้นจุลินทรีย์จะต้องสามารถสร้างแอมโมเนียมจำนวนมากเพื่อเปลี่ยนเป็นสีแดงเป็นฟีนอล pH จะต้องสูงกว่า 8.

ดังนั้น Stuart urea broth จึงเป็นสายพันธุ์ที่เลือกให้กับ Proteus ให้ผลบวกใน 24 ถึง 48 ชั่วโมงของการฟักไข่และไม่มีประสิทธิภาพสำหรับแบคทีเรียที่ผลิตยูเรียในปริมาณต่ำหรือยูเรียไฮโดรไลซ์ช้า.

เนื่องจากโพรทูสนั้นสามารถใช้ยูเรียเป็นแหล่งไนโตรเจนได้ ในทางตรงกันข้ามแบคทีเรียที่ผลิตยูเรียอื่น ๆ ต้องการแหล่งเพิ่มเติม.

อย่างไรก็ตามPérez et al. (2002) ระบุว่า Stuart urea broth นั้นมีประสิทธิภาพเทียบเท่ากับ urea agar จาก Christensen เพื่อตรวจสอบ urease ในยีสต์สายพันธุ์ของสกุล Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon และ Saccharomyces.

ผู้เขียนอ้างว่าได้รับความบังเอิญ 100% ทั้งจากสื่อ (สจวร์ตและคริสเตนเซน) โดยการบ่มเพาะเป็นเวลา 24 และ 48 ชั่วโมง; ทำให้เงื่อนไขที่พวกเขาเป็นบวกสายพันธุ์ที่สามารถเปลี่ยนสื่อให้เป็นสีบานเย็นสีชมพูที่แข็งแกร่ง.

การชี้แจงนี้เป็นสิ่งที่จำเป็นเนื่องจาก Lodder (1970) ยืนยันว่ายีสต์เกือบทั้งหมดสามารถจัดวางมุมเอียงของยูเรียอะการ์ของคริสเตนเซนให้เป็นสีชมพูอ่อน นี่เป็นเพราะพวกเขาสามารถไฮโดรไลซ์ยูเรียในปริมาณที่น้อยที่สุดและเพื่อการก่อตัวของเอมีนโดย oxidative decarboxylation ของกรดอะมิโนบนพื้นผิว สิ่งนี้ไม่ควรถูกตีความว่าเป็นบวก.

น้ำซุปหรือยูเรียวุ้นจาก Christensen

Christensen urea broth หรือ agar นั้นมีบัฟเฟอร์น้อยกว่าสามารถตรวจจับแอมโมเนียมในปริมาณเล็กน้อยได้ นอกจากนี้สื่อนี้ยังอุดมไปด้วยเพปโทนและกลูโคส สารประกอบเหล่านี้ทำให้เกิดจุลินทรีย์ที่ผลิตยูเรียอื่น ๆ ที่ไม่เติบโตในน้ำซุป Stuart เพื่อพัฒนา.

เช่นเดียวกันการทดสอบยูเรียของ Christensen ให้ผลลัพธ์ที่รวดเร็วกว่าโดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับ Proteus สามารถให้ผลบวกอย่างมากในเวลาน้อยที่สุดเพียง 30 นาทีและเวลาสูงสุด 6 ชั่วโมง.

ส่วนที่เหลือของจุลินทรีย์ที่ผลิตยูเรียจะเปลี่ยนสีของตัวกลางเล็กน้อยหลังจาก 6 ชั่วโมงและหลังจาก 24, 48, 72 ชั่วโมงหรือนานกว่านั้นอย่างรุนแรงและแม้กระทั่งบางสายพันธุ์ก็สามารถให้ปฏิกิริยาที่อ่อนแอหลังจาก 5 หรือ 6 วัน.

การตีความสื่อทั้งสอง (สจวร์ตและคริสเตนเซน)

แต่เดิมสื่อนั้นมีสีส้มเหลืองและปฏิกิริยาตอบสนองเชิงบวกจะเปลี่ยนสีของสื่อเป็นสีชมพูบานเย็น ความเข้มของสีเป็นสัดส่วนโดยตรงกับปริมาณแอมโมเนียมที่ผลิต.

ปฏิกิริยาเชิงลบจะปล่อยให้สีอยู่ในระดับปานกลางยกเว้นยีสต์ซึ่งสามารถให้สีชมพูอ่อนกับ Christensen urea agar.

การจัดเตรียม

Stuart ยูเรียซุป

ชั่งน้ำหนักกรัมที่จำเป็นตามข้อบ่งชี้ของอาคารพาณิชย์ ละลายในน้ำกลั่นที่ผ่านการฆ่าเชื้อโดยเฉพาะ อย่าใช้ความร้อนในการละลายเพราะยูเรียมีความไวต่อความร้อน.

วิธีการกรองเมมเบรนใช้ในการฆ่าเชื้อ สำหรับเรื่องนี้จะใช้ตัวกรองมิลลิพอร์ที่มีรูพรุน 0.45 μในเส้นผ่าศูนย์กลาง อย่าใช้หม้อนึ่งความดัน เมื่อสารละลายถูกกรองจะถูกกระจายในหลอดที่ปลอดเชื้อ เพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้จะต้องมีการถ่ายโอนระหว่าง 1.5 มล. เป็นปริมาณขั้นต่ำเป็น 3 มล. เป็นจำนวนสูงสุดต่อหลอด.

เก็บในตู้เย็นและอุณหภูมิก่อนการใช้งาน.

หากวิธีการกรองไม่พร้อมใช้งานควรใช้สื่อทันทีเพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่น่าเชื่อถือ.

อีกวิธีในการเตรียมน้ำซุปยูเรียสจวตคือ:

บ้านเชิงพาณิชย์บางแห่งขายฐานครึ่งหนึ่งสำหรับการทดสอบยูเรียไม่รวมถึงยูเรีย.

จำนวนเงินที่ระบุโดยบ้านเชิงพาณิชย์จะถูกชั่งน้ำหนัก มันจะละลายในน้ำกลั่นและฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที ปล่อยให้มันพักผ่อนเล็กน้อยและเมื่อสื่ออุ่นเพิ่มสารละลายยูเรีย 100 มล. ที่เตรียมไว้ที่ 20% และฆ่าเชื้อโดยการกรอง.

มันถูกแจกจ่ายในหลอดที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว.

น้ำซุปหรือยูเรียวุ้นจาก Christensen

-การเตรียมสารละลายยูเรีย

ยูเรียที่มีน้ำหนัก 29 กรัมและละลายในน้ำกลั่น 100 มล. ใช้วิธีการกรองเพื่อฆ่าเชื้อ อย่านึ่งโดยอัตโนมัติ.

-วุ้นฐานยูเรีย

ละลายวุ้น 24 กรัมในน้ำกลั่น 950 มิลลิลิตร ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที ให้ยืนจนกว่าจะถึงอุณหภูมิ 50 ° C และเพิ่มยูเรียที่เตรียมไว้ก่อนหน้านี้ปลอดเชื้อ.

เท 4 ถึง 5 มล. ในหลอดที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วเอียงจนแข็งตัว ควรมีขลุ่ยที่มีความยาวสูงสุด.

สื่อนี้ยังสามารถเตรียมในรูปของเหลว.

การใช้งาน

การทดสอบยูเรียนั้นมีประสิทธิภาพอย่างมากในการจำแนกโปรเตอุสสกุลจากสกุลอื่นของตระกูล Enterobacteriaceae เนื่องจากปฏิกิริยาที่รวดเร็วของโพรทูส.

หากใช้องค์ประกอบของ Christensen การทดสอบจะช่วยแยกความแตกต่างระหว่างสปีชีส์ของพืชสกุลเดียวกัน ตัวอย่างเช่น, S. haemolyticus และ S. warneri sบน Staphylococcus coagulase เชิงลบและ betahemolytic, แต่พวกเขาต่างกัน S. haemolyticus มันเป็นยูเรียเชิงลบและ S. warneri มันเป็นยูเรียในเชิงบวก.

ในทางตรงกันข้าม McNulty ประสบความสำเร็จในการใช้ 2% Christensen urea broth เพื่อศึกษาการปรากฏตัวของ เชื้อ Helicobacter pylori ในตัวอย่างของการตัดชิ้นเนื้อที่นำมาจากเยื่อบุกระเพาะอาหาร (ภาคใต้).

การปรากฏตัวของ H. pylori มันเป็นหลักฐานด้วยการทดสอบยูเรียบวก ระยะเวลาในการสังเกตผลเป็นสัดส่วนโดยตรงกับปริมาณของจุลินทรีย์ที่มีอยู่.

ที่สามารถเห็นได้มันเป็นวิธีที่ง่ายสำหรับการวินิจฉัย เชื้อ Helicobacter pylori ในการตรวจชิ้นเนื้อกระเพาะอาหาร.

ในที่สุดการทดสอบนี้ก็มีประโยชน์ในการจำแนกสายพันธุ์ของ Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus และ Mycobacteria.

การทดสอบยูเรีย

ทั้งสองวิธีนี้ต้องการหัวเชื้อจุลินทรีย์ที่แข็งแกร่งเพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่ดีที่สุด อาณานิคมของแบคทีเรียจะถูกนำมาจากวุ้นในเลือดและยีสต์ Sabouraud agar โดยมีข้อยกเว้นบางประการ หัวเชื้อถูกผสมกับของเหลว.

สำหรับน้ำซุปจวร์ตยูเรียบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมงโดยรู้ว่ามีเพียงคนเดียวที่กำลังมองหาสายพันธุ์ของโปรเตอุสเมื่อสายพันธุ์เป็นแบคทีเรีย สำหรับยีสต์สามารถบ่มที่ 37 ° C หรือที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมงของการบ่ม.

ในกรณีของ Christensen urea broth ให้บ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง หากการทดสอบเป็นลบจะสามารถบ่มเพาะได้นานถึง 6 วัน หากการทดสอบเป็นบวกก่อน 6 ชั่วโมงก็แสดงว่ามันเป็นสายพันธุ์ของโพรทูส.

ในกรณีของคริสเตนเซ็นยูเรียวุ้นนั้นได้ทำการฉีดเชื้อนูนโดยไม่ต้องเจาะ น้ำซุปจะถูกบ่มและตีความในลักษณะเดียวกัน.

การควบคุมคุณภาพ

สายพันธุ์ควบคุมสามารถใช้ในการทดสอบสื่อเช่น โพรทูส mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae  ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 และ Salmonella typhimurium.  สองรายการแรกจะต้องให้ผลลัพธ์ที่เป็นบวกและผลลัพธ์เชิงลบที่สองล่าสุด.

การอ้างอิง

1. Pérez C, Goitía K. , Mata S, Hartung C, Colella M, Reyes H. et al. ใช้ Stuart urea broth สำหรับการทดสอบ urease เป็นการทดสอบในการวินิจฉัยยีสต์ รายได้ Soc. Ven. Microbiol ปี 2002 22 (2): 136-140 มีจำหน่ายที่: Scielo.org.
2. Mac Faddin J. (2003) การทดสอบทางชีวเคมีสำหรับการจำแนกแบคทีเรียที่มีความสำคัญทางคลินิก วันที่ 3 Panamericana บรรณาธิการ บัวโนสไอเรส อาร์เจนตินา.
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด บรรณาธิการ Panamericana S.A. อาร์เจนตินา.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา วันที่ 5 บรรณาธิการ Panamericana S.A. อาร์เจนตินา.
5. ห้องปฏิบัติการ Britania Christensen Medio (Urea agar base) 2015 มีจำหน่ายที่: britanialab.com