รากฐานน้ำซุป EC การเตรียมและการใช้

น้ำซุปอีซี หรือน้ำซุป Escherichia coli มันเป็นสื่อวัฒนธรรมของเหลวที่เลือกสรร สื่อนี้แนะนำโดยวิธีมาตรฐานสำหรับการนับจำนวนทั้งหมดและ fecal coliforms โดยใช้เทคนิคของจำนวนที่เป็นไปได้มากที่สุด (NMP) ในตัวอย่างน้ำและอาหารซึ่งสารสำคัญที่เกี่ยวข้องคือ Escherichia coli.

น้ำซุป EC ประกอบด้วย triptein, แลคโตส, เกลือน้ำดี, ไดโพแทสเซียมฟอสเฟต, โมโนโพแทสเซียมฟอสเฟต, โซเดียมคลอไรด์และน้ำ สูตรได้รับการออกแบบอย่างมีกลยุทธ์เพื่อรองรับการเติบโตของโคลิฟอร์มทั้งหมดและอุจจาระและป้องกันการพัฒนาของจุลินทรีย์อื่น ๆ.

พวกแบคทีเรีย Escherichia coli เป็นโคลิฟอร์มอุจจาระหลักที่มีอยู่ในปัจจุบันเป็นสารปนเปื้อนในแหล่งน้ำและอาหารทำให้เกิดผลกระทบทางเดินอาหารที่สำคัญ.

ควรสังเกตว่ามีหลายสายพันธุ์ Escherchia coli; ในหมู่พวกเขาเราสามารถพูดถึง enterohemorrhagic (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteropathogenic (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) และ enteroaggregative (EAEC).

วิธีนี้มีความสามารถในการอนุญาตให้มีการพัฒนาของพวกเขาทั้งหมด แต่ไม่สามารถแยกความแตกต่างระหว่างพวกเขา ในการทำเช่นนี้จะต้องทำการทดสอบเพิ่มเติม.

การศึกษาทางจุลชีววิทยาของน้ำและอาหารโดยจำนวนที่เป็นไปได้มากที่สุด (NMP) สำหรับการค้นหาทั้งหมดและอุจจาระลำไส้ใหญ่เป็นโปรโตคอลที่สอดคล้องกับหลายขั้นตอน; ขั้นตอนการสันนิษฐานขั้นตอนการยืนยันและขั้นตอนการทำให้สมบูรณ์ น้ำซุป EC ถูกนำมาใช้ในขั้นตอนการยืนยัน.

ดัชนี

• 1 มูลนิธิ
  • 1.1 EC Broth
  • 1.2 EC broth ที่ปรับปรุงด้วย novobiocin
• 2 การเตรียมการ
  • 2.1 น้ำซุป EC
  • 2.2 น้ำซุป EC แก้ไขด้วย novobiocin
• 3 ใช้
  • 3.1 การวิเคราะห์โคลิฟอร์มทั้งหมดและอุจจาระ
• 4 การควบคุมคุณภาพ
• 5 ข้อเสนอแนะ
• 6 อ้างอิง

มูลนิธิ

EC Broth

สื่อของ EC ขึ้นอยู่กับการให้องค์ประกอบทางโภชนาการที่จำเป็นสำหรับการพัฒนาที่ดีที่สุดของโคลิฟอร์มทั้งหมดและอุจจาระซึ่งรวมถึงแบคทีเรีย Escherichia coli.

องค์ประกอบทางโภชนาการเหล่านี้จัดทำโดย triptein ซึ่งเป็นแหล่งของเปปไทด์และกรดอะมิโนที่ยอดเยี่ยม นอกจากนี้ยังมีแลคโตสคาร์โบไฮเดรตที่หมักได้ซึ่งให้พลังงานและช่วยให้แสดงว่าแบคทีเรียผลิตก๊าซหรือไม่.

ในทางกลับกันสื่อนี้มีเกลือน้ำดีที่มีคุณสมบัติเป็นตัวเลือกเนื่องจากมันยับยั้งการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์แกรมบวกที่อาจมีอยู่ในตัวอย่าง.

ในทำนองเดียวกันไดโพแทสเซียมฟอสเฟตและโมโนโพแทสเซียมฟอสเฟตทำหน้าที่เป็นระบบปรับสมดุลค่า pH ระบบนี้มีความจำเป็นเพราะแลคโตสที่มีอยู่ในน้ำซุปมีแนวโน้มที่จะทำให้เป็นสื่อกลางเมื่อมันถูกหมักด้วยจุลินทรีย์ แต่สิ่งนี้จะชดเชยด้วยเกลือฟอสเฟต.

ดังนั้นองค์ประกอบเหล่านี้มีความสำคัญเนื่องจากความเป็นกรดที่ไม่สามารถควบคุมได้ส่งผลกระทบต่อการพัฒนาของจุลินทรีย์ที่ต้องการ.

สำหรับส่วนของมันโซเดียมคลอไรด์จะคงตัวในระดับปานกลางในขณะที่น้ำเป็นตัวทำละลายของตัวละลายที่มีอยู่และให้ความคงตัวของของเหลวในตัวกลาง.

น้ำซุป EC แก้ไขด้วย novobiocin

Okrend และ Rose สร้างความหลากหลายของ EC broth หรือที่เรียกว่า EC broth ที่ถูกดัดแปลงด้วย novobiocin การปรับเปลี่ยนประกอบด้วยการลดความเข้มข้นของเกลือน้ำดีและการเติมโนโบบีซิน 20 มก. / ดล.

การดัดแปลงนี้สนับสนุนการฟื้นตัวของสายพันธุ์ Escherichia coli enterohemorrhagic (O157: H7).

serotype ของแบคทีเรียนี้ทำให้เกิดอาการลำไส้ใหญ่บวมอย่างรุนแรงซึ่งอาจทำให้เกิดกลุ่มอาการของโรค hemolytic uremic syndrome (HUS); ซึ่งสามารถสร้างภาวะไตวายเฉียบพลันซึ่งมีอัตราการตายสูงที่สามารถเข้าถึงผู้สูงอายุได้มากถึง 50%.

เนื่องจากการเจ็บป่วยและการเสียชีวิตที่เกิดจากแบคทีเรียนี้ทุกปีเนื่องจากการบริโภคอาหารที่ปนเปื้อนกระทรวงเกษตรของสหรัฐอเมริกา (USDA) แนะนำให้ใช้วิธีนี้อย่างกว้างขวาง.

การจัดเตรียม

EC Broth

น้ำหนัก 37.4 กรัมของตัวกลางที่ถูกทำให้แห้งและละลายในน้ำกลั่น 1 ลิตร ควรผสมให้พัก 5 นาที ต่อจากนั้นในแหล่งความร้อนละลายละลายบ่อย.

เมื่อละลายแล้วจะถูกกระจายในหลอดทดลองก่อนหน้านี้มีเงื่อนไขด้วยหลอดเดอแรมภายใน ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที.

ค่า pH ของตัวกลางควรเป็น 6.9 ± 0.2 สีของตัวกลางที่ถูกอบแห้งจะเป็นสีเบจและเตรียมไว้เป็นสีเหลืองอำพัน.

ไวน์จะถูกเก็บไว้ในตู้เย็นจนกว่าพวกเขาจะใช้ ในช่วงเวลาของการใช้น้ำซุปจะต้องอยู่ที่อุณหภูมิห้อง.

ในทางกลับกันน้ำซุป EC สามารถเตรียมได้ที่ความเข้มข้นสองเท่า.

น้ำซุป EC แก้ไขด้วย novobiocin

น้ำหนัก 36.7 กรัมของตัวกลางที่ถูกทำให้แห้งและละลายในน้ำ 1 ลิตร ส่วนที่เหลือของการเตรียมการเหมือนกับที่อธิบายไว้ข้างต้น.

ใช้

การวิเคราะห์โคลิฟอร์มทั้งหมดและอุจจาระ

น้ำซุป EC เหมาะสำหรับขั้นตอนการยืนยันการศึกษาโคลิฟอร์มด้วยวิธี NMP ทั้งในตัวอย่างน้ำเช่นเดียวกับในผลิตภัณฑ์ยาและอาหาร.

น้ำซุปขี้เกียจและการผลิตก๊าซที่ได้รับในระยะสันนิษฐานควรกลับมาดำเนินการในน้ำดีสีเขียวสดใส 2% และน้ำซุป EC.

สำหรับ coliforms ทั้งหมดน้ำซุป EC จะถูกบ่มใน aerobiosis เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมงที่ 37 ° C และสำหรับอุจจาระ coliforms จะถูกบ่มใน aerobiosis 24 ถึง 48 ชั่วโมงที่ 44 ° C.

ในทั้งสองกรณีมันถูกตีความด้วยวิธีต่อไปนี้: ท่อขุ่นที่มีการผลิตก๊าซจะถือว่าเป็นบวก หากไม่มีการผลิตก๊าซใน 24 ชั่วโมงการบ่มจะดำเนินต่อไปนานถึง 48 ชั่วโมง.

น้ำซุปที่เป็นบวกของ EC จะผ่านไปยังขั้นตอนการยืนยันที่สมบูรณ์ซึ่งประกอบด้วยการป้อนข้อมูลในสื่อที่เลือกเช่น Ag Conar agar, EMB agar หรือ Endo agar.

หากน้ำซุปที่ใช้นั้นถูกดัดแปลงด้วย EC ด้วย novobiocin แนะนำให้ทำการใส่หลอดบวกใน Mac Conkey agar with sorbitol.

การควบคุมคุณภาพ

การควบคุมคุณภาพจะต้องดำเนินการกับสื่อที่เตรียมไว้แต่ละชุด ก่อนอื่นต้องประเมินความปราศจากเชื้อของตัวกลาง ในแง่นี้หนึ่งหรือสองน้ำซุปจะถูกบ่มโดยไม่ต้องฉีดวัคซีนใน aerobiosis เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่ 37 องศาเซลเซียส ผลลัพธ์ที่คาดว่าจะเป็นน้ำซุปที่โปร่งใสโดยไม่เปลี่ยนแปลงความขุ่นหรือสี.

ประการที่สองควรประเมินการเติบโตของสายพันธุ์ที่รู้จักซึ่งสามารถใช้แบคทีเรียต่อไปนี้: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

ในทุกกรณีคาดว่าจะมีการพัฒนาของจุลินทรีย์ที่น่าพอใจโดยสังเกตน้ำซุปขุ่นที่มีการผลิตก๊าซสำหรับ อี. โคไล และไม่มีก๊าซสำหรับเชื้อซัลโมเนลล่า.

สายพันธุ์อื่น ๆ ที่สามารถรวมอยู่ในการควบคุมคือ: เชื้อ Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212 สายพันธุ์เหล่านี้จะต้องถูกยับยั้งโดยสิ้นเชิง.

คำแนะนำ

-การวางท่อเดอแรมเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการศึกษาโคลิฟอร์ม.

-แจกจ่ายสื่อในหลอดทดลองก่อนที่จะทำหมันก่อน.

-ห้ามใช้ถ้าสื่อมีการเตรียมมากกว่า 3 เดือน.

-ห้ามใช้หากมีการเปลี่ยนแปลงในลักษณะปกติของสื่อ.

การอ้างอิง

1. ห้องปฏิบัติการ Britania EC Medium 2558 มีจำหน่ายที่: britanialab.com
2. อี. โคไล enterohemorrhagic ศูนย์ความมั่นคงด้านอาหารและสาธารณสุข 2010 มีจำหน่ายที่: cfsph.iastate.edu
3. บริษัท Neogen EC ขนาดกลาง มีจำหน่ายที่: foodsafety.neogen.com
4. Neogen Medium EC ดัดแปลงโดยใช้ novobiocin มีจำหน่ายที่: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. การตรวจจับ, การแยกและลักษณะของ Escherichia coli ผู้ผลิตชีวะชิงะจากเนื้อดินสดจากร้านขายเนื้อในConcepciónจังหวัดTucumán. Rev Microgol โดย Arg; 2010, 42 (4): 284-287 วางจำหน่ายแล้วที่: www.scielo.org.