มูลนิธิ Vogel-Johnson Agar การเตรียมและการใช้งาน

Vogel-Johnson agar เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อที่คัดเลือกได้และแตกต่างซึ่งมีสูตรพิเศษสำหรับการแยกสาร เชื้อ Staphylococcus aureus. สื่อนี้ถูกสร้างขึ้นโดย Vogel และ Johnson ในปี 1960 จากการดัดแปลง glycine tellurite agar ที่ผสมในปี 1955 โดย Zebovitz, Evans และ Niven.

การดัดแปลงประกอบด้วยการเพิ่มความเข้มข้นของแมนนิทอลที่มีอยู่ในตัวกลางและในการรวมตัวบ่งชี้ pH สูตรปัจจุบันประกอบด้วย triptein, สารสกัดจากยีสต์, แมนนิทอล, ไดโพแทสเซียมฟอสเฟต, ลิเธียมคลอไรด์, glycine, ฟีนอลสีแดง, วุ้น, สารละลายโพแทสเซียมเทลลูทีน 1% และน้ำ.

ควรสังเกตว่ามีวิธีการอื่นที่คล้ายกับ Vogel-Johnson agar ซึ่งเป็นวิธีคัดแยก S. aureus, เช่นวุ้นเค็มแมนนิทอลวุ้นและแบร์ดปาร์กเกอร์วุ้น ในแง่นี้อาจกล่าวได้ว่ารากฐานของ Vogel-Johnson agar นั้นเป็นส่วนผสมระหว่างความเค็มของ mannitol agar และ Baird Parker agar.

ในอาณานิคมแรกของ S. aureus พวกมันมีความโดดเด่นด้วยการหมักแมนนิทอลและเปลี่ยนค่า pH เป็นสีเหลือง ในทางกลับกันในครั้งที่สอง S. aureus มันมีเอกลักษณ์เฉพาะด้วยการลดเทลลูไรท์เป็นเทลลูเรียมและสร้างอาณานิคมสีเทาถึงดำ สังเกตคุณสมบัติทั้งสองได้ในวุ้น Vogel-Johnson.

สื่อนี้ก็มีประโยชน์สำหรับการตรวจจับเช่นกัน เชื้อ Staphylococcus aureus ในตัวอย่างอาหารการควบคุมสุขอนามัยของผลิตภัณฑ์อุตสาหกรรมและในตัวอย่างทางคลินิก.

ดัชนี

• 1 มูลนิธิ
  • 1.1 ผลงานของสารอาหาร
  • 1.2 พลังงานที่เลือก
  • 1.3 กำลังต่างกัน
  • 1.4 ยอดออสโมติกและสารเพิ่มความแข็ง
• 2 การเตรียมการ
  • 2.1 1% w / v สารละลายโพแทสเซียมเทลลูไรท์
  • 2.2 Vogel-Johnson agar base medium
• 3 ใช้
• 4 การควบคุมคุณภาพ
• 5 อ้างอิง

มูลนิธิ

ผลงานของสารอาหาร

สื่อ Vogel-Johnson ประกอบด้วยสารสกัด triptein และยีสต์; สารทั้งสองให้กรดอะมิโนสายโซ่ยาวซึ่งทำหน้าที่เป็นแหล่งคาร์บอนและไนโตรเจนที่จำเป็นต่อการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย แบคทีเรียที่มีความสามารถในการเจริญเติบโตในอาหารนี้จะรับสารอาหารจากสารเหล่านี้.

เลือกพลังงาน

Vogel-Johnson agar สามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย Gram-positive และแม้แต่แบคทีเรีย Gram-positive บางตัวซึ่งสนับสนุนการพัฒนาของ Staphylococci coagulase-positive สารยับยั้งคือโพแทสเซียมเทลลูไรต์ลิเธียมคลอไรด์และไกลซีน.

พลังงานที่แตกต่าง

สารที่ทำให้สื่อที่แตกต่างนี้คือแมนนิทอลและโพแทสเซียมเทลลูไรท์ Mannitol เป็นคาร์โบไฮเดรตและเมื่อมีการหมักกรดจะผลิตกรดที่เปลี่ยนสื่อจากสีแดงเป็นสีเหลืองซึ่งเกิดขึ้นเนื่องจากการมีตัวบ่งชี้ค่า pH ของฟีนอลสีแดง.

ในขณะที่เทลลูไรท์ที่ไม่มีสีเมื่อลดลงเป็นเทลลูไรด์ฟรีที่เป็นโลหะจะใช้สีเทาเข้มถึงสีดำ.

เชื้อ Staphylococcus aureus หมักแมนนิทอลและลดเทลลูไรท์เป็นเทลลูเรียม นั่นเป็นสาเหตุที่อาณานิคมทั่วไปของ S. aureus ในสื่อนี้พวกเขาเป็นสีเทาหรือสีดำล้อมรอบด้วยสื่อสีเหลือง.

แบคทีเรียที่เจริญเติบโตในอาหารเลี้ยงเชื้อนี้และไม่ลดการไหลเวียนของน้ำาตาลหรือมานนิทอลจะก่อตัวเป็นอาณานิคมโปร่งใสที่ล้อมรอบด้วยสื่อสีแดงยิ่งรุนแรงกว่าสีเดิมเนื่องจากด่างของสื่อโดยการใช้ peptones.

ในทางกลับกันแบคทีเรียที่ลดลลูไรท์ แต่ไม่หมักแมนนิทอลจะเติบโตเป็นอาณานิคมสีเทาหรือสีดำล้อมรอบด้วยสีแดงเข้ม.

ถ้าสื่อเตรียมโดยไม่ต้องเติมโพแทสเซียมเทลลูไรท์, โคโลนีของ S. aureus พวกมันจะพัฒนาเป็นอาณานิคมสีเหลืองล้อมรอบด้วยสื่อสีเหลืองเช่นในวุ้นแมนนิทอลเค็ม.

สมดุลออสโมติกและตัวแทนการแข็งตัว

Dipotassium phosphate รักษาสมดุลของออสโมติกของสื่อและปรับค่า pH ให้เป็นกลาง 7.2 ในขณะที่วุ้นให้ความมั่นคงที่มั่นคงกับสื่อวัฒนธรรม.

การจัดเตรียม

1% โพแทสเซียมเทลลูไรท์สารละลาย w / v

วิธีการแก้ปัญหานี้ไม่รวมอยู่ในสื่อที่แห้งเนื่องจากไม่สามารถฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดัน ด้วยเหตุผลนี้จึงได้จัดทำแยกต่างหากและเพิ่มลงในสื่อที่ผ่านการฆ่าเชื้อ.

บ้านเชิงพาณิชย์บางแห่งขายสารละลายโพแทสเซียมเทลลูไรท์ 1% พร้อมใช้ หากคุณต้องการเตรียมตัวในห้องปฏิบัติการให้ดำเนินการดังนี้:

ชั่งน้ำหนักโพแทสเซียมเทลลิตี้ไรท์ 1.0 กรัมและวัดน้ำกลั่น 100 มิลลิลิตร ละลายเทอร์ทูไรต์โพแทสเซียมในส่วนของน้ำแล้วเติมน้ำจนครบ 100 มล. ทำหมันสารละลายด้วยวิธีการกรอง.

Vogel-Johnson agar base medium

มีน้ำหนัก 60 กรัมของตัวกลางที่ถูกทำให้แห้งและละลายในน้ำกลั่น 1 ลิตร ส่วนผสมถูกทำให้ร้อนให้เดือดเพื่อช่วยในการละลายอย่างสมบูรณ์ ในระหว่างขั้นตอนการละลายสื่อจะถูกกวนบ่อย ๆ.

ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดัน 15 ปอนด์และ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที ลบออกจากหม้อนึ่งความดันและอนุญาตให้ยืนจนกว่าสื่อถึงอุณหภูมิประมาณ 45 ถึง 50 ° C เพิ่มโพแทสเซียมเทลไรต์ที่เตรียมไว้ก่อนหน้านี้ 20 มล. เป็น 1%.

ผสมและเทลงในจานเพาะเชื้อที่ปลอดเชื้อ อนุญาตให้แข็งตัวและสั่งซื้อคว่ำใน Plaquers สำหรับเก็บในตู้เย็นในภายหลังจนกว่าจะใช้.

ค่า pH สุดท้ายของสื่อที่เตรียมควรอยู่ที่ 7.2 ± 0.2.

ก่อนปลูกตัวอย่างให้รอจนกระทั่งแผ่นใช้อุณหภูมิโดยรอบ.

สีของสื่อที่เตรียมไว้คือสีแดง.

ใช้

แม้ว่ามันจะสามารถใช้สำหรับการแยก S. aureus ในตัวอย่างทุกประเภทส่วนใหญ่จะใช้สำหรับการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของผลิตภัณฑ์ยาเครื่องสำอางและอาหาร.

ขอแนะนำให้หัวฉีดมีความหนาแน่นสูง การเพาะเมล็ดสามารถทำได้โดยการปอกด้วยทองคำขาวด้ามจับหรือพื้นผิวด้วยไม้พาย Drigalski.

เพลตถูกบ่มที่ 35-37 ° C เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมงในแอโรบิก.

การควบคุมคุณภาพ

ในการดำเนินการควบคุมคุณภาพของสื่อ Vogel-Johnson สามารถใช้สายพันธุ์ควบคุมต่อไปนี้:

เชื้อ Staphylococcus aureus ATCC 25923, เชื้อ Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 หรือ โพรทูส mirabilis ATCC 43071.

ผลลัพธ์ที่คาดหวังมีดังนี้: สำหรับสายพันธุ์ของ S. aureus การเจริญเติบโตที่น่าพอใจกับอาณานิคมสีดำล้อมรอบด้วยสื่อสีเหลือง ไปยัง S. epidermidis การเจริญเติบโตปกติกับอาณานิคมโปร่งแสงหรือสีดำล้อมรอบด้วยสื่อสีแดง.

เช่นเดียวกันสำหรับ อี. โคไล คาดว่าจะมีการยับยั้งทั้งหมดและสำหรับ โพรทูส mirabilis การยับยั้งบางส่วนหรือทั้งหมด; ถ้ามันโตขึ้นมันจะทำเท่าที่จำเป็นและอาณานิคมจะเป็นสีดำล้อมรอบด้วยสีแดงขนาดกลาง.

การอ้างอิง

1. BD Laboratories VJ (Vogel และ Johnson Agar) 2549 จำหน่ายที่: bd.com
2. ห้องปฏิบัติการ Britania Vogel- Johnson Agar 2558 มีจำหน่ายที่: britanialab.com
3. ห้องปฏิบัติการ Britania โพแทสเซียมเทลไรต์ 2558. จำหน่ายที่: britania.com
4. ห้องปฏิบัติการ Himedia Vogel- Johnson Agar Medium 2018 มีจำหน่ายที่: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. ฐาน Vogel- Johnson Agar คู่มือจุลชีววิทยาของเมอร์ค ฉบับที่ 12, pp 502-503 มีให้ใน: ผู้ใช้ / ทีม / ดาวน์โหลด
6. ผู้มีส่วนร่วมของWikipédia "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédiaเพื่อชีวิตสารานุกรม,   disponível em: wikipedia.org.
7. เวเนซุเอลา Covenin มาตรฐาน 1292-89 (1989) อาหาร การแยกและการนับ เชื้อ Staphylococcus aureus. ที่มีอยู่ใน:sencamer.gob.ve