Agar TSI Foundation การเตรียมและการใช้งาน



TSI agar หรือวุ้นน้ำตาลทริปเปิ้ลทรีเป็นสื่อการเลี้ยงที่มั่นคงซึ่งทำหน้าที่เป็นการทดสอบทางชีวเคมีเพื่อเป็นแนวทางในการบ่งชี้เบื้องต้นของแบคทีเรียแกรมลบแกรม มันขึ้นอยู่กับหลักฐานการหมักของน้ำตาลที่มีอยู่และการผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์และก๊าซ.

องค์ประกอบและรากฐานของมันนั้นคล้ายคลึงกับการทดสอบของ Kligler มากโดยความแตกต่างที่ว่าหลังมีเพียงกลูโคสและแลคโตสเท่านั้น ธาตุเหล็กสามชนิดจะมีคาร์โบไฮเดรตที่สามารถหมักได้สามตัว: กลูโคสแลคโตสและซูโครสแทน.

นอกจากนี้สื่อ TSI ยังมีอนุพันธ์โปรตีนสี่ชนิดที่ทำให้มันเป็นสารอาหารที่มีคุณค่าทางโภชนาการอย่างมาก: สารสกัดจากยีสต์, สารสกัดจากเนื้อสัตว์, เปปโตนและโปรตีนเปปโตน นอกจากนี้ยังมีธาตุเหล็กแอมโมเนียมซัลเฟตโซเดียมไธโอซัลเฟตโซเดียมคลอไรด์ฟีนอลแดงและวุ้น.

การที่จุลินทรีย์ไม่สามารถหมักกลูโคสที่มีอยู่ในอาหารได้ทันทีจะแยกออกจากการเป็นของครอบครัว Enterobacteriaceae ดังนั้นการทดสอบนี้มีความสำคัญต่อการตัดสินใจว่าควรใช้เส้นทางการระบุชนิดใดเพื่อกำหนดชนิดและชนิด.

แต่ละห้องปฏิบัติการตัดสินใจว่าจะทำงานร่วมกับ TSI agar หรือ Kligler agar agar หรือไม่.

ดัชนี

  • 1 มูลนิธิ
    • 1.1 โซเดียมคลอไรด์และวุ้น
    • 1.2 ตัวบ่งชี้ค่า pH (ฟีนอลสีแดง)
    • 1.3 อนุพันธ์ของโปรตีน (สารสกัดจากยีสต์, สารสกัดจากเนื้อสัตว์, เปปโตนและโปรตีนเปปโตน)
    • 1.4 การหมักคาร์โบไฮเดรต (กลูโคสแลคโตสและซูโครส)
    • 1.5 การผลิตก๊าซ
    • 1.6 โซเดียมไธโอซัลเฟตและแอมโมเนียมซัลเฟตเหล็ก (การผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์)
  • 2 การเตรียมการ
  • 3 ใช้
  • 4 เมล็ด
  • 5 ข้อ จำกัด
  • 6 อ้างอิง

มูลนิธิ

สารประกอบแต่ละชนิดจะทำหน้าที่ภายในตัวกลาง.

โซเดียมคลอไรด์และวุ้น

โซเดียมคลอไรด์จำเป็นต้องรักษาสมดุลออสโมติกของตัวกลาง ในขณะที่วุ้นให้ความมั่นคงที่มั่นคง.

ตัวบ่งชี้ PH (ฟีนอลสีแดง)

ค่า pH ของตัวกลางที่เตรียมไว้มีค่าเท่ากับ 7.3 และตัวบ่งชี้ค่า pH (สีแดงฟีนอล) จะเปลี่ยนเป็นสีเหลืองต่ำกว่า 6.8 ซึ่งหมายความว่ากรดจำนวนเล็กน้อยที่เกิดจากการหมักน้ำตาลจะเปลี่ยนสื่อจากสีแดงส้มเป็นสีเหลือง.

หากการหมักไม่เกิดขึ้นจะมีการทำให้เป็นด่างของสื่อโดยการใช้ peptones เปลี่ยนจากสีแดงส้มเป็นสีแดงเข้ม.

อนุพันธ์ของโปรตีน (สารสกัดจากยีสต์, สารสกัดจากเนื้อสัตว์, เปปโตนและโปรตีนเปปโตน)

เมื่อแบคทีเรียเผาผลาญโปรตีนที่มีอยู่ในวุ้น TSI จะผลิตเอมีนที่ทำให้เกิดอัลคาไลด์ตัวกลาง (ส่วนใหญ่อยู่ในระดับที่เอียง) เนื่องจากปฏิกิริยาต้องการออกซิเจน เอมีนเปลี่ยนกรอบเป็นสีแดงเข้ม.

แต่สิ่งนี้จะขึ้นอยู่กับความสามารถของแบคทีเรียในการหมักคาร์โบไฮเดรตหรือไม่.

การหมักคาร์โบไฮเดรต (กลูโคสแลคโตสและซูโครส)

การศึกษาการหมักน้ำตาลสามารถให้ภาพหลายภาพและแต่ละภาพตีความแตกต่างกัน การตีความของการทดสอบแบ่งจุลินทรีย์ออกเป็น 3 ประเภทคือถังหมักที่ไม่มีน้ำตาลกลูโคสถังหมักที่ไม่ใช่แลคโตสและถังหมักแลคโตส / ซูโครส.

ควรสังเกตว่าปริมาณของกลูโคสในอาหารมี จำกัด ในขณะที่ความเข้มข้นของแลคโตสและซูโครสสูงกว่า 10 เท่า.

แบคทีเรียของตระกูล Enterobacteriaceae และจุลินทรีย์อื่น ๆ ในการหมักกลูโคสจะเริ่มทำการหมักน้ำตาลนี้เพราะเป็นคาร์โบไฮเดรตที่ง่ายที่สุดสำหรับพลังงาน.

ในทางกลับกันแลคโตสและซูโครสเป็นคาร์โบไฮเดรตเชิงซ้อนที่ต้องสลายตัวและเปลี่ยนเป็นกลูโคสเพื่อให้เข้าสู่วงจร Embden-Meyerhof.

-จุลินทรีย์ที่ไม่ผ่านกระบวนการหมัก

เมื่อจุลินทรีย์ที่ฉีดวัคซีนไม่สามารถหมักน้ำตาลกลูโคสได้มากนักจะสามารถหมักคาร์โบไฮเดรตอื่น ๆ ได้ ดังนั้นกรดจึงไม่ได้ถูกสร้างขึ้นที่นี่ แต่มีการก่อตัวของเอมีนในมุมที่เกิดจากการใช้ peptones.

ในกรณีนี้มุมเอียงจะเปลี่ยนเป็นสีแดงที่แรงขึ้นและด้านล่างของหลอดจะไม่เปลี่ยนแปลงหรือยังสามารถทำให้เป็นด่างได้.

การตีความ: K / K หมายถึงพื้นหลังที่เป็นด่าง / อัลคาไลน์หรือเป็นกลาง

ในภาพที่เป็นจุดเริ่มต้นของบทความดูภาพของหลอด D.

ผลลัพธ์นี้บ่งชี้ว่าจุลินทรีย์นั้นไม่ได้อยู่ในตระกูล Enterobacteriaceae.

-จุลินทรีย์ที่ไม่ผ่านการหมักของแลคโตส / ซูโครส

หากแบคทีเรียสามารถหมักน้ำตาลกลูโคสได้ แต่ไม่ใช่แลคโตสหรือซูโครสจะเกิดสิ่งต่อไปนี้:

แบคทีเรียจะบริโภคกลูโคสทั้งหมดที่มีอยู่หลังจากเวลาผ่านไปประมาณ 6 ถึง 8 ชั่วโมงสามารถเป็นกรดได้ทั้งในมุมเอียงและทาโก้ นั่นคือวุ้นจะกลายเป็นสีเหลืองอย่างสมบูรณ์ แต่เมื่อกลูโคสหมดลงและไม่สามารถใช้แลคโตสและซูโครสแบคทีเรียจะเริ่มเผาผลาญโปรตีน.

ปฏิกิริยานี้ต้องการออกซิเจนดังนั้นการสลายตัวของ peptones จึงเกิดขึ้นบนพื้นผิว (ยกนูน) เอมีนทำให้ตัวเรือนเป็นด่างโดยการเปลี่ยนสีเหลืองเป็นสีแดง ปฏิกิริยานี้เป็นหลักฐานที่ 18 ถึง 24 ชั่วโมงของการบ่ม.

การตีความ: K / A หมายถึงมุมอัลคาไลน์และกรดทาโก้.

ในภาพที่เป็นจุดเริ่มต้นของบทความดูภาพของหลอด B.

-แลคโตส / ซูโครสหมักจุลินทรีย์

เห็นได้ชัดว่าจุลินทรีย์ที่มีความสามารถในการหมักแลคโตสและซูโครสสามารถหมักกลูโคสได้ หลังจากปริมาณกลูโคสที่น้อยที่สุดที่มีอยู่ในตัวกลางหมดไปแล้วไพรูเมทที่เกิดขึ้นจะเริ่มเผาผลาญเพื่อสร้างกรดผ่านวัฏจักรแอโรบิกของ Krebs และในช่วงเวลา 8 ถึง 12 ชั่วโมงทุกสื่อจะเป็นสีเหลือง.

หากแบคทีเรียสามารถแยกแลคโตสหรือซูโครสได้กรดจะยังคงถูกผลิตต่อไปและหลังจากผ่านไป 18 ถึง 24 ชั่วโมงหลอดทั้งหมดจะงอยปากและทาโก้ - จะยังคงเป็นสีเหลือง.

ควรสังเกตว่าการใช้กลูโคสนั้นทำได้สองวิธี: หนึ่งในรูปแบบแอโรบิกในมุมของท่อและอื่น ๆ แบบไม่ใช้ออกซิเจนที่ด้านล่างของหลอด.

การแปลความหมาย: A / A หมายถึงมุมเอียงของกรด / ล่างของกรด มันสามารถแสดงก๊าซได้หรือไม่.

ในภาพที่เป็นจุดเริ่มต้นของบทความดูภาพของหลอด A.

การผลิตก๊าซ

จุลินทรีย์บางชนิดมีความสามารถในการผลิตก๊าซในระหว่างการหมักน้ำตาล ก๊าซจะถูกพิสูจน์ในหลอดโดยแรงดันที่มันมีอยู่ภายในวุ้น ความดันทำให้เกิดฟองหรือการกระจัดของวุ้น บางครั้งการก่อตัวของก๊าซสามารถแตกหักกลาง.

มันเป็นสิ่งสำคัญที่ในเวลาของการเพาะเมล็ดกลาง TSI, การเจาะทำอย่างสะอาดโดยศูนย์กลางของวุ้นจนกระทั่งมันถึงด้านล่าง หากการเจาะทะลุไปที่ผนังของหลอดก็อาจทำให้เกิดผลบวกปลอมในการผลิตก๊าซเนื่องจากมันจะหนีผ่านช่องทางที่เกิดขึ้นผิดพลาด.

การผลิตก๊าซรวมถึงปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นในมุมวุ้นต้องการออกซิเจนดังนั้นจึงขอแนะนำให้คลุมด้วยปลั๊กฝ้ายและถ้าใช้ฝาเบ็กไลต์ก็ไม่ควรปรับอย่างเต็มที่.

รายงานการผลิตก๊าซเป็นบวก (+) หรือลบ (-).

ไธโอซัลเฟตโซเดียมและแอมโมเนียมซัลเฟตเหล็ก (การผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์)

แบคทีเรียที่มีความสามารถในการผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์ (ก๊าซไม่มีสี) ใช้ซัลเฟอร์ของโซเดียมไธโอซัลเฟตที่มีอยู่ในสื่อ เมื่อ H ถูกสร้างขึ้น2S ทำปฏิกิริยากับเหล็กแอมโมเนียมซัลเฟตผลิตเหล็กซัลไฟด์ (ตะกอนสีดำมองเห็นได้ชัดเจน).

การผลิต H2S ถูกรายงานว่าเป็นบวก (+) หรือลบ (-).

ในภาพที่เป็นจุดเริ่มต้นของบทความดูภาพของหลอด C.

การจัดเตรียม

มีน้ำหนัก 62.5 กรัมของวุ้นน้ำตาลทรายน้ำตาลแห้ง (TSI) วุ้นและละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร.

ความร้อนจนกระทั่งวุ้นละลายหมดแล้ว ต้มประมาณ 1 นาทีกวนบ่อย ๆ แจกจ่าย 4 มิลลิลิตรของสื่อในหลอดทดลอง 13/100 พร้อมฝาปิดฝ้าย.

ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที ลบออกจากหม้อนึ่งความดันและอนุญาตให้พักผ่อนในวิธีที่เอียง ต้องใช้ความระมัดระวังว่าทั้งฐานและฝามีระยะห่างเท่ากัน.

เก็บในตู้เย็น 2-8 องศาเซลเซียส อนุญาตให้มีอารมณ์ก่อนปลูกสายพันธุ์แบคทีเรีย.

สีของตัวกลางที่ถูกคายน้ำคือสีเบจอ่อนและตัวกลางที่เตรียมไว้คือสีส้มแดง

ค่า pH สุดท้ายของสื่อที่เตรียมไว้คือ 7.3 ± 0.2.

การใช้งาน

การทดสอบ TSI ใช้กันอย่างแพร่หลายในระดับห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยา การทดสอบนี้เป็นสิ่งจำเป็นเพื่อเป็นแนวทางในการทดสอบประเภทที่ต้องนำไปใช้เพื่อระบุชนิดและสกุล การดำเนินการที่ดีและการตีความสามารถบันทึกวัสดุและงานได้.

หากผลที่ได้คือ TSI K / K และการทดสอบไซโตโครมออกซิเดสเป็นบวกก็เป็นที่รู้กันว่าควรใช้การทดสอบเพื่อระบุเชื้อแบคทีเรียแกรมลบที่ไม่ผ่านกระบวนการหมักเช่น Pseudomonas, Alcaligen, Achromobacter, Burkholderia ถ้ามันเป็น oxidase เชิงลบมันจะมุ่งเน้นไปที่สกุล Acinetobacter, Stenotrophomonas ฯลฯ.

ในทางตรงกันข้ามถ้าได้รับ TSI A / A หรือ K / A และการทดสอบไซโตโครมออกซิเดสเป็นลบไนเตรตยิ่งลดลงเป็นไนไตรต์เราจะมีความมั่นใจว่านี่เป็นจุลินทรีย์ที่อยู่ในตระกูล Enterobacteriaceae ในกรณีนี้เส้นทางการชี้บ่งจะมุ่งเน้นไปที่การทดสอบเฉพาะสำหรับกลุ่มแบคทีเรียนี้.

ในทางกลับกันหากได้รับภาพ K / A หรือ A / A และการทดสอบไซโตโครมออกซิเดสเป็นบวกการทดสอบเพิ่มเติมที่จะติดตั้งจะถูกนำไปที่การระบุสายพันธุ์การหมักที่ไม่ได้อยู่ในตระกูล Enterobacteriaceae เช่น Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio และ Pasteurella.

TSI ที่มีไฮโดรเจนซัลไฟด์เป็นลบออกซิเดสจะเป็นแนวทางในการจำแนกชนิดของสกุล Enterobacteriaceae ต่อไปนี้: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella หรือ Salmonella.

TSI ที่มีไฮโดรเจนซัลไฟด์น้อยหรือปานกลางในมุมอัลคาไลน์ที่มีก้นอัลคาไลน์และ oxidase ที่เป็นบวกจะเป็นแนวทางในการใช้การทดสอบเพื่อระบุแบคทีเรียแกรมลบแกรมลบที่ไม่หมัก2เอสเช่น Shewanella putrefaciens.

ในที่สุด TSI สามารถใช้สำหรับการตรวจสอบการผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์ในแบคทีเรียแกรมบวกโดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อสงสัย Erysipelothrix rhusiopathiae.

ปลูก

สื่อของ TSI นั้นจะต้องได้รับการฉีดเชื้อด้วยโคโลนีบริสุทธิ์ซึ่งแยกได้ในวัฒนธรรมหลักหรือวัฒนธรรมที่คัดเลือก หากนำอาณานิคมมาจากสื่อคัดสรรที่มีเมล็ดพืชที่มีกลุ่มตัวอย่างผสมด้วยพืชควรใช้ความระมัดระวังในการดึงเฉพาะพื้นผิวเนื่องจากในส่วนล่างของอาณานิคมอาจมีสายพันธุ์ที่ทำงานได้ยับยั้งในสื่อนั้น.

ดังนั้นการวนซ้ำไม่ควรทำให้เย็นลงในตัวกลางที่เลือกเพื่อนำอาณานิคมและทำให้เชื้อเป็นสื่อ TSI.

การปลูกจะต้องทำด้วยห่วงหรือเข็มตรง การเจาะจะทำโดยดูแลว่าผ่านจุดศูนย์กลางตรงกลางจนถึงด้านล่างจากนั้นการปลูกจะทำการฉีดวัคซีนให้พื้นผิวด้วยวิธีซิกแซก อย่าทำสอง punctures.

ฟักที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18-24 ชั่วโมง ตีความในเวลานี้ทั้งก่อนและหลัง.

ข้อ จำกัด

การทดสอบ TSI ควรอ่านได้ระหว่าง 18 ถึง 24 ชั่วโมงของการฟักตัว การอ่านก่อนเวลานี้จะให้ผลบวกที่ผิดพลาดของการหมัก A / A ในขณะที่การอ่านหลังจากเวลานี้สามารถก่อให้เกิดภาพลบที่ผิดพลาดของผู้ที่ไม่ใช่ผู้หมักเนื่องจากการบริโภคของเสียงแหลมที่ทำให้ด่างสื่อ.

การอ้างอิง

  1. Mac Faddin J. (2003) การทดสอบทางชีวเคมีสำหรับการจำแนกแบคทีเรียที่มีความสำคัญทางคลินิก วันที่ 3 Panamericana บรรณาธิการ บัวโนสไอเรส อาร์เจนตินา.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด บรรณาธิการ Panamericana S.A. อาร์เจนตินา.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา วันที่ 5 บรรณาธิการ Panamericana S.A. อาร์เจนตินา.
  4. "TSI agar" Wikipedia, สารานุกรมฟรี. 10 ก.ค. 2018, 08:09 UTC 10 ก.พ. 2019, 03:33 มีให้ที่: en.wikipedia.org
  5. ห้องปฏิบัติการ Britania TSI Agar (วุ้นน้ำตาลสามชั้น) 2558 มีจำหน่ายที่: britanialab.com
  6. BD Laboratories วุ้นน้ำตาลสามระดับ (TSI Agar) 2546 มีให้ที่: bd.com