มูลนิธิ Agar Thayer Martin เตรียมและใช้งาน

เธเออร์มาร์ตินวุ้น มันเป็นสื่อของแข็งที่มีคุณค่าทางโภชนาการสูงและคัดเลือกเพื่อการแยก meningitidis Neisseria และ Neisseria gonorrhoeae; ทั้งที่รู้จักกันในชื่อ Neisseria ที่ทำให้เกิดโรคหรือมีความสำคัญทางคลินิก.

หนึ่งในคุณสมบัติพิเศษที่สำคัญที่สุดของ Thayer Martin agar คือเนื้อหาของอาหารเสริมที่สูง คุณสมบัตินี้ขาดไม่ได้เนื่องจาก Neisserias เป็นจุลินทรีย์ที่มีความต้องการอย่างมากจากมุมมองทางโภชนาการดังนั้นจึงไม่เติบโตในสื่อทั่วไป.

ในทางตรงกันข้ามเนื่องจากจุลินทรีย์เหล่านี้มักพบในพื้นที่ที่ไม่ผ่านการฆ่าเชื้อการเติมสารยับยั้งที่ขัดขวางการเจริญเติบโตของพืชเป็นสิ่งจำเป็นโดยไม่ส่งผลกระทบต่อการพัฒนาของพืชสกุล Neisseria.

วุ้นนี้ประกอบด้วย GC เบสวุ้น, เฮโมโกลบิน, อาหารเสริมเพิ่มเติมและสารที่ซับซ้อนของสารยับยั้ง (ยาปฏิชีวนะและ antifungals) บ้านพาณิชย์ขายอาหารเสริมแยกต่างหาก.

ตัวอย่างที่จะปลูกในสื่อนี้จะขึ้นอยู่กับจุลินทรีย์ที่ต้องการ ไปยัง Neisseria gonorrhoeae ตัวอย่างในอุดมคติคือสารคัดหลั่งในช่องคลอดและท่อปัสสาวะ ในขณะที่สำหรับ Neisseria meningitidis ตัวอย่างที่ใช้มากที่สุดคือซีเอสเอฟ, คอหอยและสารคัดหลั่งจากโพรงจมูก.

ดัชนี

• 1 มูลนิธิ
  • 1.1 GC ฐานวุ้น
  • 1.2 เฮโมโกลบิน
  • 1.3 การเสริมคุณค่า
  • 1.4 สารยับยั้ง
• 2 การเตรียมการ
  • 2.1 Original Thayer Martin Agar
  • 2.2 Agar Thayer Martin ได้แก้ไข
• 3 ใช้
• 4 การควบคุมคุณภาพ
• 5 ข้อ จำกัด
• 6 อ้างอิง

มูลนิธิ

Neisserias เป็นจุลินทรีย์ที่จัดว่าน่ารำคาญดังนั้นการแยกตัวของพวกมันจึงเป็นเรื่องยาก ด้วยเหตุผลนี้ Thayer Martínจึงเป็นสื่อที่ซับซ้อนและส่วนประกอบแต่ละอย่างของมันจะเติมเต็มฟังก์ชั่นที่อธิบายไว้ด้านล่าง:

วุ้นแกน GC

GC agar มีโปรตีนเปปโตน, แป้งข้าวโพด, โซเดียมคลอไรด์, ไดโพแทสเซียมฟอสเฟต, โมโนโพแทสเซียมฟอสเฟตและวุ้น - วุ้น ส่วนประกอบของมันให้สารอาหารพื้นฐานสำหรับการพัฒนาของจุลินทรีย์ต่อต้านกรดไขมันพิษช่วยรักษาสมดุลของออสโมติกกำหนดค่าความเป็นกรดด่างและให้ความคงตัวต่อสิ่งแวดล้อม.

เฮโมโกลบิน

เฮโมโกลบินให้ปัจจัย V และ X (nicotinamide adenine dinucleotide NAD และ hemin ตามลำดับ) ดังนั้นในสภาพแวดล้อมนี้ Haemophilus ขยายพันธุ์ด้วยเช่นกัน เฮโมโกลบินสามารถรับได้ในเชิงพาณิชย์ในรูปแบบการคายน้ำหรือเลือดวัวที่ได้รับการปรับสภาพใหม่สามารถเพิ่มลงในอาหารได้.

เสริมคุณค่า

ในทางตรงกันข้ามเสริมการเสริมสมรรถนะจะต้องถูกเพิ่มลงในสื่อ Thayer-Martin เนื่องจากสารอาหารที่มีอยู่ในวุ้นพื้นฐานไม่เพียงพอสำหรับความต้องการของสกุล Neisseria.

อาหารเสริมเสริมที่ใช้กันมากที่สุดเรียกว่า isovitalex มันประกอบด้วยกลูตามีน adenine, NAD, cocarboxylase, guanine, ferric nitrate, กรดเบนโซอิก p-amino, วิตามินบี 12, วิตามินบีและกลูโคส สารประกอบทั้งหมดเหล่านี้จำเป็นสำหรับการพัฒนาที่เหมาะสมของ Neisseria ที่ทำให้เกิดโรค.

ยับยั้ง

เนื่องจากเป็นอาหารที่มีคุณค่าทางโภชนาการสูงจึงต้องใช้สารยับยั้งเพื่อป้องกันการเจริญเติบโตของเชื้อจุลินทรีย์ของพืชในพื้นที่ตามปกติและชอบการแยกชนิดของ Neisseria.

สารยับยั้งซับซ้อนนั้นประกอบไปด้วย vancomycin, colistin และ nystatin Vancomycin ยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียแกรมบวกโคลิสตินป้องกันการพัฒนาแบคทีเรียแกรมลบเช่น Pseudomonas และ saprophytic Neisseria และ nystatin ทำหน้าที่เป็นยีสต์ Candida albicans.

อย่างไรก็ตามจากนั้น Thayer Martin agar ก็ถูกแก้ไข การเปลี่ยนแปลงประกอบด้วยการเพิ่ม trimethoprim การเพิ่มปริมาณของวุ้นและการเพิ่มของกลูโคสพิเศษ การเปลี่ยนแปลงเหล่านี้ช่วยปรับปรุงการฟื้นตัวของสายพันธุ์ของ Neisseria gonorrhoeae.

มันควรจะตั้งข้อสังเกตว่า trimethoprim ยับยั้งการเจริญเติบโตของโพรทูสสกุลและการก่อตัวของการจับกลุ่ม ในแง่นี้ยาปฏิชีวนะเป็นสิ่งที่ให้ธรรมชาติในการคัดเลือกแก่นักเธเออร์มาร์ตินระดับกลาง.

การจัดเตรียม

มาร์ตินเธเออร์ดั้งเดิม

-GC Agar

ชั่งน้ำหนัก 8.2 กรัมของอาหาร GC ที่ถูกอบแห้งและแขวนใน 100 มล. ผสมและต้มเป็นเวลา 1 นาทีด้วยความตื่นเต้นบ่อยครั้งที่จะละลายในสิ่งทั้งปวง ฆ่าเชื้อส่วนผสมในหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที.

-ฮีโมโกลบิน 2%

แขวนฮีโมโกลบินที่ปราศจากน้ำ 2 กรัมในน้ำกลั่นร้อนขนาด 2 หรือ 3 มิลลิลิตร เติมน้ำทีละเล็กละน้อยเพื่อให้ได้ปริมาตร 100 มล. สารแขวนลอยจะต้องเป็นเนื้อเดียวกันก่อนทำหมัน.

ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันเป็นเวลา 15 นาที.

-เสริมคุณค่า

สร้างถนนเชิงพาณิชย์ขึ้นใหม่พร้อมกับอาคารที่ให้บริการโดยอาคารพาณิชย์เดียวกัน ผสมให้เข้ากัน จำนวนเจือจางที่จะใช้จะถูกระบุไว้ในคำแนะนำชุด.

-อาหารเสริมการยับยั้ง V.C.N (vancomycin, colistin, nystatin)

สร้างขวดขึ้นใหม่พร้อมกับตัวเจือจางที่จัดหาโดยอาคารพาณิชย์ ผสมให้เข้ากัน จำนวนเจือจางที่จะใช้จะถูกระบุไว้ในคำแนะนำชุด.

-เตรียมพร้อม

สำหรับทุก ๆ 100 มิลลิลิตรของ GC agar ดำเนินการดังนี้:

เมื่อ GC agar ออกจากหม้อนึ่งความร้อนปล่อยให้เย็นที่อุณหภูมิประมาณ 50 ° C และเพิ่มฮีโมโกลบินที่เตรียมไว้ 2 มิลลิลิตร, อาหารเสริมเพิ่มคุณค่า 2 มิลลิลิตร (isobitalex หรือ britalex), และ 2 มิลลิลิตรของอาหารเสริมยับยั้ง ผสมและเสิร์ฟในจานเลี้ยงเชื้อ.

อนุญาตให้แข็งและเก็บในตู้เย็นจนกว่าจะใช้.

สีของสื่อที่เตรียมไว้คือสีแดงเชอร์รี่ ค่า pH สุดท้ายของสื่อคือ 7.2 ± 0.2

เธเออร์ดัดแปลงมาร์ตินวุ้น

ชั่งน้ำหนัก 8.2 กรัมของอาหาร GC ที่ถูกอบแห้งและแขวนใน 100 มล. เพิ่มวุ้น 1 กรัมและเพิ่ม 0.3 กรัมของน้ำตาลกลูโคส ผสมและต้มเป็นเวลา 1 นาทีด้วยความตื่นเต้นบ่อยครั้งที่จะละลายในสิ่งทั้งปวง ฆ่าเชื้อส่วนผสมในหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที.

เตรียมเฮโมโกลบินและอาหารเสริมเสริมตามที่อธิบายไว้ข้างต้น.

อาหารเสริมยับยั้งที่ใช้คือ V.C.N.T (vancomycin, colistin, nystatin, trimethoprim).

-เตรียมพร้อม

ดำเนินการต่อตามที่อธิบายไว้สำหรับ Thayer Martin ดั้งเดิม.

ใช้

เธเออร์มาร์ตินเธเออร์ควรจะอารมณ์เสียก่อนที่จะหว่านตัวอย่าง ตัวอย่างที่ใช้กันทั่วไปคือสารหลั่งคอหอย, สารคัดจมูก, ช่องคลอด, ท่อปัสสาวะ, และ / หรือการหลั่งทางทวารหนักและ CSF.

ใช้ตัวอย่างที่สดใหม่และทำให้หัวเชื้อแข็งแรงบนวุ้น ตัวอย่างจะถูกหว่านโดยตรงโดยการปล่อยวัสดุแล้วริ้วรอยโดยการพร่องบนพื้นผิว.

จานถูกบ่มที่อุณหภูมิ 35-37 ° C เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมงในขวด microaerophilic (5% CO₂) ในตอนท้ายของระยะฟักตัวแผ่นเปลือกโลกจะถูกตรวจสอบสำหรับอาณานิคมขนาดเล็กสีเทาและบางครั้งก็มีลักษณะคล้ายเมือก.

ทำการทดสอบทางชีวเคมีกรัมและยืนยันไปยังอาณานิคมที่น่าสงสัย.

การควบคุมคุณภาพ

เพื่อทำการควบคุมคุณภาพของวุ้น Thayer Martin สามารถใช้จุลินทรีย์สายพันธุ์ต่อไปนี้.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 และ Neisseria meningitidis ATCC 13090; คาดว่าจะมีการพัฒนาที่น่าพอใจ.

สายพันธุ์ต่อไปนี้ควรรวม: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, โพรทูส mirabilis ATCC 43071 และ Candida albicans ATCC 10231 ในทุกคนคาดว่าจะมีการยับยั้งทั้งหมดหรือบางส่วนในสื่อนี้.

ข้อ จำกัด

-มันจะต้องเป็นพาหะในใจว่าแบคทีเรียที่มีความต้านทานต่อสารยับยั้งที่ใช้สามารถเติบโตได้ในสื่อ.

-มีสายพันธุ์ของ Neisseria gonorrhoeae ซึ่งอาจไวต่อความเข้มข้นของ vancomycin ที่ใช้ ด้วยเหตุนี้จึงแนะนำให้ใช้ช็อคโกแลตวุ้นเสริมด้วย isovitalex ในแบบคู่ขนาน แต่ไม่มีสารยับยั้ง.

-มียีสต์สายพันธุ์ที่ทนต่อนิสตาตินที่สามารถเจริญเติบโตได้ในอาหารเลี้ยงเชื้อและรบกวนการแยกตัวของ Neisseria ที่ทำให้เกิดโรค.

การอ้างอิง

1. ห้องปฏิบัติการวินิจฉัยของ Valtek Agar Thayer-Martin.2016 มีจำหน่ายใน: com
2. ห้องปฏิบัติการ Britania เธเออร์มาร์ตินดัดแปลงกลาง 2010 จำหน่ายที่: britanialab.com
3. ผู้มีส่วนร่วมใน Wikipedia เธเออร์ - มาร์ตินวุ้น Wikipedia, สารานุกรมเสรี 26 ตุลาคม 2560, 16:33 UTC ดูได้ที่: wikipedia.org4 เข้าถึง 28 กุมภาพันธ์ 2019.
4. ห้องปฏิบัติการ Britania GC วุ้น 2010 จำหน่ายที่: britanialab.com.
5. Laboratories BBL ™การเพิ่มปริมาณปานกลางสำหรับจุลินทรีย์พิถีพิถัน 2542. มีให้ใน: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด บรรณาธิการ Panamericana S.A. อาร์เจนตินา.