วุ้น TCBS พื้นฐานการเตรียมและการใช้งาน

TCBS วุ้น เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อแข็งที่คัดเลือกและแตกต่างสูงใช้สำหรับการแยกและเพาะเชื้อแบคทีเรีย Vibrio โดยเฉพาะ Vibrio cholerae, V. vulnificus และ V. parahaemolyticus เป็นเชื้อโรคที่สำคัญของพืชชนิดนี้.

TCBS ย่อหมายถึงไธโอซัลเฟตซิเตรทน้ำดีซูโครส วุ้นนี้เป็นที่รู้จักกันในนามสื่อคัดเลือกสำหรับ Vibrios สูตรดั้งเดิมถูกสร้างโดย Nakanishi และดัดแปลงในภายหลังโดย Kobayashi.

มันประกอบด้วยสารสกัดจากยีสต์, เปปโตนเนื้อ, triptein, โซเดียมซิเตรต, โซเดียมไธโอซัลเฟต, น้ำดีวัว, ซูโครส, โซเดียมคลอไรด์, ซิตริกเฟรริก, bromothymol สีฟ้า, ไทมอลสีฟ้าและวุ้น.

องค์ประกอบนี้ช่วยให้การพัฒนาที่เพียงพอของสายพันธุ์ Vibrio จากน้ำอุจจาระและตัวอย่างอาหาร; ยกเว้น Vibrio hollisae, ที่ไม่เติบโตในสื่อนี้ นอกจากนี้สื่อ TCBS ยังสามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียอื่น ๆ โดยเฉพาะอย่างยิ่งโคลิฟอร์ม.

เนื่องจากปัญหาระบบทางเดินอาหารและลำไส้ที่รุนแรงซึ่งพืชสกุล Vibrio บางสายพันธุ์เกิดขึ้นการวินิจฉัยของพวกเขามีความสำคัญมาก มนุษย์ส่วนใหญ่ติดเชื้อจากการบริโภคอาหารทะเลดิบหรืออาหารทะเลที่ปรุงสุกหรือน้ำที่ปนเปื้อน แต่ยังผ่านการติดเชื้อที่บาดแผล.

ด้วยเหตุนี้ห้องปฏิบัติการทางคลินิกควรรวมวุ้น TCBS ในการศึกษาวัฒนธรรมอุจจาระของตัวอย่างอุจจาระเหลวโดยเฉพาะอย่างยิ่งกับลักษณะของน้ำข้าว โดยเฉพาะอย่างยิ่งหากผู้ป่วยรายงานว่ามีการสัมผัสกับน้ำทะเลหรือกินอาหารทะเลหรือปลา.

ดัชนี

• 1 มูลนิธิ
• 2 การเตรียมการ
• 3 ใช้
• 4 เมล็ด
• 5 ข้อ จำกัด
• 6 การควบคุมคุณภาพ
• 7 อ้างอิง

มูลนิธิ

สารสกัดจากยีสต์เพปโทนเนื้อสัตว์และทริปไทน์เป็นแหล่งอาหารของอาหารนี้ อย่างไรก็ตาม TCBS agar เป็นอาหารที่ไม่เอื้ออำนวยสำหรับแบคทีเรียส่วนใหญ่.

มีการคัดเลือกสูงโดยการเติมโซเดียมซิเตรตและน้ำดีวัว ทั้งสองตัวเป็นสารยับยั้งที่ให้ค่าความเป็นกรดด่างแก่สื่อ จำกัด การเจริญเติบโตของพืชที่มาพร้อมกับและสนับสนุนการเจริญเติบโตของ V. cholerae, ท่ามกลางสายพันธุ์อื่น ๆ ควรสังเกตว่า Vibrio cholerae ไวต่ออาการเสียดท้องมาก.

สำหรับส่วนของโซเดียมคลอไรด์จะทำให้สมดุลอยู่ในระดับปานกลางถึงปานกลาง นอกจากนี้เนื่องจากความเข้มข้นสูงมันยังทำหน้าที่เป็นตัวยับยั้งยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย halophilic.

ซูโครสเป็นน้ำตาลที่หมักได้พร้อมกับตัวชี้วัดค่า pH สีน้ำเงินของ bromothymol และสีน้ำเงิน thymol ให้ลักษณะที่แตกต่างกันไปที่กลาง ด้วยเหตุนี้ด้วยวิธีนี้จึงเป็นไปได้ที่จะแยกแยะความแตกต่างของสายพันธุ์ที่หมักน้ำตาลซูโครสจากสายพันธุ์ที่ไม่ผ่านการหมัก.

โคโลนีของซูโครสการหมักสายพันธุ์จะพัฒนาเป็นสีเหลืองและจะเปลี่ยนสื่อจากสีเขียวเป็นสีเหลืองเนื่องจากการผลิตกรด ผู้ที่ไม่หมักจะเติบโตโปร่งแสงและสื่อยังคงเป็นสีดั้งเดิม (สีเขียว).

เช่นเดียวกันสื่อนี้ประกอบด้วยโซเดียมไธโอซัลเฟตเป็นแหล่งของซัลเฟอร์และเฟอร์ริกซิเตรตในฐานะตัวแทนที่เปิดเผย ทั้งสองแสดงแบคทีเรียที่มีความสามารถในการผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์ (ก๊าซไม่มีสี) The H₂S ถูกสร้างขึ้นจากไธโอซัลเฟตและต่อมาเมื่อทำปฏิกิริยากับเฟอร์ริกซิเตรทรูปแบบตะกอนสีดำที่มองเห็นได้.

ในที่สุดวุ้นเป็นสิ่งที่ให้ความมั่นคงที่มั่นคงกับสื่อ.

การจัดเตรียม

มีน้ำหนัก 89 กรัมของตัวกลางที่ถูกทำให้แห้งและละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร ช่วยสลายตัวด้วยความร้อนและความปั่นป่วนบ่อย สามารถต้มได้ประมาณ 2 นาที.

สื่อนี้ไม่ได้รับการนึ่งโดยอัตโนมัติ หลังจากการละลายมันจะถูกเสิร์ฟโดยตรงบนแผ่นผ่านการฆ่าเชื้อ เมื่อแข็งตัวพวกเขาจะถูกจัดเรียงในทางกลับกันในผู้ผลิตแผ่นโลหะและเก็บไว้ในตู้เย็น (2-8 ° C) จนกว่าพวกเขาจะใช้.

สื่อที่เตรียมไว้ควรอยู่ที่ pH 8.6 ± 0.2.

สีของสื่อที่ถูกคายน้ำคือสีเบจอ่อนหรือสีเขียวอมเบจและสีของสื่อกลางคือสีเขียวของป่าหรือสีเขียวอมน้ำเงิน.

มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะออกจากจานแบ่งเบาบรรเทาก่อนที่จะหว่านตัวอย่าง.

ใช้

ตัวอย่างที่พบบ่อยที่สุดสำหรับการแยก Vibrios คืออุจจาระท้องร่วง.

ตัวอย่างอุจจาระถ้าพวกเขาไม่สามารถ seed ได้ทันทีบนสื่อที่เลือกจะต้องถูกขนส่งในช่วงกลางของแครีแบลร์.

เพื่อเพิ่มความไวของวัฒนธรรมอุจจาระสามารถส่งผ่านน้ำเปปโตนที่ pH 8.4 เป็นสื่อเสริมคุณค่าสำหรับ 8 ชั่วโมงสูงสุดจากนั้นจะถูก subcultured กับสื่อ TCBS.

มันจะต้องเป็นพาหะในใจว่า Vibrios บางสายพันธุ์อาจทำให้เกิดภาวะโลหิตเป็นพิษในผู้ป่วยที่มีภูมิคุ้มกันบกพร่องดังนั้นพวกเขาจึงสามารถแยกได้จากวัฒนธรรมเลือด ในทำนองเดียวกันตัวอย่างของน้ำและอาหารจากทะเลสามารถวิเคราะห์ได้เมื่อมีการระบาดของโรคอหิวาตกโรค.

ปลูก

หัวเชื้อของตัวอย่างภายใต้การศึกษาจะต้องโดดเด่นการเพาะจะกระทำโดยวิธีการตีด้วยความอ่อนเพลีย เพลตถูกบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมงในแอโรบิก.

อาณานิคมที่สันนิษฐานของ Vibrio cholerae พวกเขามีขนาดกลางเรียบทึบแสงมีขอบบางและสีเหลืองเพราะพวกเขาหมักซูโครส.

ในทำนองเดียวกันสายพันธุ์ของ V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii และบางส่วน V. vulnificus. Vibrios สายพันธุ์อื่น ๆ มีความสำคัญทางการแพทย์เช่น V. parahaemolyticus ไม่หมักซูโครสพัฒนาเป็นอาณานิคมสีเขียวมะกอก.

ในทางกลับกันเราต้องจำไว้ว่าสายพันธุ์ Aeromonas และ Plesiomonas ที่เป็น oxidase (+) สามารถเจริญเติบโตได้ในอาหารเลี้ยงเชื้อนี้การพัฒนาอาณานิคมสีเหลืองที่อาจทำให้แพทย์สับสน ในขณะที่บางสายพันธุ์ของ Pseudomonas ยัง oxidase (+) เติบโตเป็นอาณานิคมสีเขียวเช่นกัน V. parahaemolyticus.

การ จำกัด

การทดสอบออกซิเดสที่เป็นผลบวกต่อสกุล Vibrio ไม่ควรทำจากอาณานิคมที่ได้จากวุ้น TCBS เนื่องจากผลลัพธ์ที่ได้จะเป็นผลลบที่ผิดพลาด สารประกอบในตัวกลางรบกวนอย่างยิ่งในการทดสอบนี้ ดังนั้นจึงควรทำจากเชื้อที่ย่อยบน agar เลือด.

การควบคุมคุณภาพ

เพื่อพิสูจน์ว่าสื่ออยู่ในสภาพดีแนะนำให้ปลูกหรือรู้จักสายพันธุ์ควบคุมและสังเกตว่าการเจริญเติบโตตรงตามลักษณะที่คาดหวังหรือไม่.

สำหรับสิ่งนี้สายพันธุ์ของ:

-Vibrio cholerae - การเจริญเติบโตที่น่าพอใจ (อาณานิคมสีเหลือง, ชายแดนโปร่งแสง).

-Vibrio parahaemolyticus - การเจริญเติบโตที่น่าพอใจ (อาณานิคมที่มีจุดศูนย์กลางสีเขียวและเส้นขอบโปร่งแสง).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - การเติบโตที่น่าพอใจ (อาณานิคมสีเหลืองที่มีรัศมีสีเดียวกันรอบ ๆ อาณานิคม).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - การยับยั้งทั้งหมดหรือบางส่วน (อาณานิคมสีเหลืองขนาดเล็กหรือโปร่งแสง).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- ยับยั้งบางส่วนหรือทั้งหมด (อาณานิคมสีฟ้า).

-Escherichia coli ATCC 25922 - ถูกยับยั้งโดยสิ้นเชิง.

-โพรทูส mirabilis ATCC 43071 - การยับยั้งทั้งหมดหรือบางส่วน (อาณานิคมเล็ก ๆ ตรงกึ่งกลางขอบโปร่งแสงสีเขียว).

การฟักตัวของอาหารเลี้ยงเชื้อที่ไม่มีการปนเปื้อนไม่ควรมีการเปลี่ยนแปลง.

การอ้างอิง

1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS วุ้น 2552 มีจำหน่ายที่: f-soria.es
2. ห้องปฏิบัติการ BD BD TCBS Agar 2003 มีให้ที่: bd.com
3. ห้องปฏิบัติการ Britania TCBS ขนาดกลาง 2558 มีจำหน่ายที่: britanialab.com
4. Acumedia Laboratories TCBS Agar 2559 มีจำหน่ายที่: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด บรรณาธิการ Panamericana S.A. อาร์เจนตินา.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา วันที่ 5 บรรณาธิการ Panamericana S.A. อาร์เจนตินา.