มูลนิธิเลือดวุ้นการใช้และการเตรียม

วุ้นเลือด มันเป็นสื่อที่เป็นของแข็งที่ได้รับการตกแต่งแล้ว แต่ไม่ได้เลือกสรร มันถูกใช้สำหรับการกู้คืนและการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์หลากหลายชนิดจากตัวอย่างทางคลินิกหรือวัฒนธรรมย่อย.

ควรรวมวุ้นเลือดแบบดั้งเดิมสำหรับการเก็บตัวอย่างทางคลินิกส่วนใหญ่ที่ได้รับในห้องปฏิบัติการ ยกเว้นอุจจาระตัวอย่างที่ไม่มีประโยชน์เว้นแต่ได้เตรียมไว้สำหรับการดัดแปลงบางอย่าง.

สื่อการเพาะเลี้ยงนี้โดยทั่วไปประกอบด้วยวุ้นฐานที่ได้ทำให้รำ่รวยและเลือด 5% ฐานของวุ้นสามารถแตกต่างกันไปตามความต้องการ แต่ส่วนใหญ่จะประกอบด้วย peptones, กรดอะมิโน, วิตามิน, สารสกัดจากเนื้อสัตว์, โซเดียมคลอไรด์, วุ้น, หมู่คนอื่น ๆ.

สำหรับเลือดนั้นมักจะต้องมีการติดต่อกับไบโอเรียมเพื่อรับเลือดจากสัตว์เช่นแกะกระต่ายหรือม้า อย่างไรก็ตามสิ่งนี้ไม่สามารถทำได้เสมอไปและบางครั้งก็ใช้เลือดคน.

อาหารเลี้ยงเชื้อเลือดสามารถเตรียมในห้องปฏิบัติการหรือสามารถซื้อพร้อมสำหรับ บริษัท ที่ทุ่มเทให้กับมัน การเตรียมสื่อนี้เป็นหนึ่งในสิ่งที่ละเอียดอ่อนที่สุดและความประมาทใด ๆ.

นั่นคือเหตุผลที่ควรใช้ข้อควรระวังที่เป็นไปได้ทั้งหมดและในที่สุดการควบคุมคุณภาพควรทำที่อุณหภูมิ 37 ° C 1 ทุก 100 ที่เตรียมไว้.

ดัชนี

• 1 มูลนิธิ
• 2 ใช้
  • 2.1 ทางเลือกของกรุ๊ปเลือด
  • 2.2 ทางเลือกของประเภทวุ้นฐาน
  • 2.3 การใช้วุ้นเลือดตามสื่อพื้นฐานที่ใช้ในการเตรียมการ
• 3 การเตรียมการ
  • 3.1 ชั่งน้ำหนักและละลาย
  • 3.2 ฆ่าเชื้อ
  • 3.3 การรวมตัวของเลือด
  • 3.4 เทลงในจาน Petri
• 4 อ้างอิง

มูลนิธิ

มันได้รับการกล่าวถึงแล้วว่า agar เลือดมีลักษณะของการเป็นสื่อที่ได้รับการเสริมคุณค่าความแตกต่างและไม่เลือกสรร ชั้นใต้ดินของแต่ละคุณสมบัติเหล่านี้อธิบายไว้ด้านล่าง.

Blood agar เป็นอาหารเสริมเพราะมันมีส่วนประกอบของเลือด 5 -10% อยู่บนฐานของ agar สารประกอบทั้งสองนี้มีสารอาหารมากมายและคุณสมบัตินี้ช่วยให้แบคทีเรียที่เพาะเลี้ยงส่วนใหญ่เจริญเติบโตได้.

การเติบโตนั้นเกิดขึ้นโดยไม่มีข้อ จำกัด ด้วยเหตุนี้มันจึงไม่สามารถเลือกได้ อย่างไรก็ตามหากมีการเพิ่มสารลงในสื่อนี้ที่ป้องกันการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์บางชนิดและช่วยในการเจริญเติบโตของสารอื่น เป็นกรณีนี้หากมีการเพิ่มยาปฏิชีวนะหรือ antifungals บางประเภท.

ในทำนองเดียวกัน blood agar เป็นตัวกลางที่แตกต่างกันเนื่องจากมันสามารถแยกแยะแบคทีเรียได้ 3 ชนิดคือ beta-hemolytic, alpha-hemolytic และ gamma-hemolytic.

Beta-hemolytics เป็นกลุ่มที่มีความสามารถในการ lyse หรือทำลายเซลล์เม็ดเลือดแดงอย่างสมบูรณ์ก่อให้เกิดรัศมีที่ชัดเจนรอบ ๆ อาณานิคมจึงผลิตßหรือβ hemolysis - ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกและจุลินทรีย์เรียกว่าß-hemolytic.

ตัวอย่างของแบคทีเรียß-hemolytic Streptococcus pyogenes และ Streptococcus agalactiae.

alpha-hemolytics นั้นเป็นตัวที่ทำหน้าที่แตกของเม็ดเลือดแดงบางส่วนซึ่งฮีโมโกลบินจะถูกออกซิไดซ์ไปยัง methemoglobin ทำให้เกิดสีเขียวขึ้นรอบ ๆ อาณานิคม ปรากฏการณ์นี้เรียกว่า hemolysis αหรือα-hemolysis และแบคทีเรียถูกจำแนกเป็นα-hemolytic.

ตัวอย่างของแบคทีเรียα-hemolytic Streptococcus pneumoniae และ เชื่อแป็คที่เรียรูปทรงกลม ของกลุ่ม viridans.

ในที่สุดก็มีแบคทีเรียที่เรียกว่า gamma-hemolytic หรือ non-hemolytic สิ่งเหล่านี้เจริญเติบโตบนวุ้นโดยไม่ก่อให้เกิดการเปลี่ยนแปลงในผลที่เรียกว่า hem -hemolysis และจุลินทรีย์นั้นมีγ -hemolytic.

ตัวอย่างแบคทีเรีย hem -hemolytic: Streptococcus ของกลุ่ม D บางสายพันธุ์Streptococcus bovis และ Enterococcus faecalis).

การใช้งาน

อาหารเลี้ยงเชื้อในกระแสเลือดเป็นอาหารที่นิยมใช้กันมากในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยา.

ในบรรดาเชื้อจุลินทรีย์ที่มีความสามารถในการเจริญเติบโตบนอาหารเลี้ยงเชื้อในกระแสเลือด ได้แก่ : เข้มงวด, facultative, microaerophilic, แอนนาโรบิค, แบคทีเรียแกรมบวกหรือแกรมลบ, แบคทีเรียที่เติบโตเร็วหรือเติบโตช้า.

แบคทีเรียบางชนิดที่มีความต้องการหรือน่ารำคาญจากมุมมองทางโภชนาการเช่นเดียวกับเชื้อราและยีสต์ก็เติบโตเช่นกัน ในทำนองเดียวกันมันจะมีประโยชน์ในการเพาะเลี้ยงย่อยหรือเปิดใช้งานสายพันธุ์ที่มีการเผาผลาญอ่อนแอมาก.

อย่างไรก็ตามทางเลือกของกรุ๊ปเลือดและวุ้นฐานจะแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับจุลินทรีย์ที่น่าจะเป็นที่สงสัยว่าจะฟื้นตัวและการใช้งานของคราบจุลินทรีย์ (วัฒนธรรมหรือ antibiogram).

ทางเลือกของกรุ๊ปเลือด

เลือดอาจเป็นลูกแกะกระต่ายม้าหรือมนุษย์.

ข้อแนะนำมากที่สุดคือเลือดของลูกแกะโดยมีข้อยกเว้นบางประการ ตัวอย่างเช่นเพื่อแยก Haemophilus species ที่เลือดที่แนะนำคือม้าหรือกระต่ายเนื่องจากเลือดของลูกแกะมีเอ็นไซม์ที่ยับยั้งปัจจัย V.

สิ่งที่แนะนำน้อยที่สุดคือมนุษย์ แต่มันถูกใช้มากที่สุดอาจเป็นเพราะมันง่ายที่สุดที่จะได้มา. 

เลือดจะต้องได้รับการปรับเทียบที่ได้มาโดยไม่มีสารเติมแต่งใด ๆ และจากสัตว์ที่มีสุขภาพดี สำหรับการใช้เลือดของมนุษย์ต้องคำนึงถึงปัจจัยหลายประการ:

หากเลือดมาจากบุคคลที่ติดเชื้อแบคทีเรียพวกเขาจะมีแอนติบอดีจำเพาะ ภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้การเจริญเติบโตของแบคทีเรียบางชนิดมีแนวโน้มที่จะถูกยับยั้ง.

หากได้มาจากธนาคารเลือดมันจะมีซิเตรตและเป็นไปได้ว่าแบคทีเรียบางตัวไม่พัฒนาในที่ที่มี ในทางตรงกันข้ามถ้าเลือดมาจากผู้ป่วยที่ทานยาปฏิชีวนะการยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียที่ไวต่อยาสามารถยับยั้งได้.

และถ้าเลือดมาจากคนที่เป็นโรคเบาหวานกลูโคสส่วนเกินจะรบกวนการพัฒนารูปแบบการแตกของเม็ดเลือดแดงที่เหมาะสม.

ทางเลือกของประเภทวุ้นฐาน

วุ้นพื้นฐานที่ใช้ในการเตรียมวุ้นเลือดนั้นกว้างมาก ในหมู่พวกเขา: สารอาหารวุ้นหัวใจสมองแช่วุ้นวุ้น trypticase ถั่วเหลืองวุ้นMüeller Hinton วุ้น, Thayer มาร์ตินวุ้นวุ้นโคลัมเบียวุ้น Brucella วุ้นวุ้น Campylobacter ฯลฯ.

การใช้วุ้นเลือดตามสื่อพื้นฐานที่ใช้สำหรับการเตรียมการของมัน

สารอาหารวุ้น

ฐานนี้เป็นที่ใช้น้อยเพราะมันจะเติบโตส่วนใหญ่แบคทีเรียที่ไม่ต้องการเช่นแบคทีเรียบาซิลลัส, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, ท่ามกลางคนอื่น ๆ ไม่แนะนำให้แยกเชื้อ Streptococcus.

วุ้นหัวใจ Infusion วุ้น (BHI)

มันเป็นหนึ่งในที่สุดใช้เป็นพื้นฐานของ agar เลือดเนื่องจากมีสารอาหารที่จำเป็นสำหรับการเจริญเติบโตของแบคทีเรียส่วนใหญ่รวมถึง Streptococcus sp และแบคทีเรียที่ต้องการอื่น ๆ แม้ว่ามันจะไม่เหมาะสมที่จะสังเกตรูปแบบของภาวะเม็ดเลือดแดงแตก.

มักใช้ลูกแกะเลือดกับฐานนี้.

นอกจากนี้ยังสามารถเตรียมพันธุ์วุ้นในเลือดได้เมื่อมีการเพิ่มสารประกอบอื่นเพื่อแยกจุลินทรีย์บางชนิด ตัวอย่างเช่นวุ้นหัวใจแช่สมองเสริมด้วยเลือดกระต่ายซีสตีนและกลูโคสทำหน้าที่แยก Francisella tularensis.

ในขณะที่มีซีสทีนเทลลูไรท์มีประโยชน์ในการแยก Corynebacterium diphteriae. คุณสามารถใช้เลือดมนุษย์หรือลูกแกะ.

ด้วยเบต้าแรกการแตกของเม็ดเลือดแดงแตกจะมีลักษณะเป็นรัศมีแคบขณะที่สองรัศมีจะกว้างขึ้นมาก.

ในทำนองเดียวกันฐานนี้ร่วมกับ bacitracin, แป้งข้าวโพด, เลือดม้าและผลิตภัณฑ์เสริมอาหารเสริมอื่น ๆ (IsoVitaleX), ใช้สำหรับการแยกประเภท Haemophilus sp จากตัวอย่างระบบทางเดินหายใจ.

นอกจากนี้หากคุณเพิ่มการรวมกันของยาปฏิชีวนะ chloramphenicol - gentamicin หรือ penicillin - streptomycin ด้วยเลือดม้ามันเหมาะสำหรับการแยกเชื้อราที่ทำให้เกิดโรคที่ต้องการแม้จะให้ผลผลิตสูงกว่าวุ้นกลูโคส Sabouraud มันมีประโยชน์อย่างยิ่งในการแยก ฮีสโตพลาสม่าแคปซูล.

ถั่วเหลืองที่ไวต่อการสัมผัส

ฐานนี้เหมาะที่สุดสำหรับการสังเกตรูปแบบของภาวะเม็ดเลือดแดงแตกที่ดีขึ้นและประสิทธิภาพของการทดสอบวินิจฉัยเช่นแท็กซ่าของ optoquine และ bacitracin มันเป็นวุ้นเลือดคลาสสิกที่ใช้เป็นประจำ.

ด้วยฐานนี้คุณสามารถเตรียมวุ้นพิเศษสำหรับเลือดได้ Corynebacterium diphteriae, ด้วยเทลเลียมซีสตีน และ เลือดแกะ.

ในทำนองเดียวกันการรวมกันของวุ้นนี้กับเลือดแกะรวมกับคานามัยซิน - แวนคอมไซซินนั้นเหมาะอย่างยิ่งสำหรับการเจริญเติบโตของแอนนาโรบีโดยเฉพาะ Bacteroides sp.

Agar Müeller Hinton

ฐานนี้เสริมด้วยเลือดจะใช้ในการดำเนินการ antibiogram ของความต้องการของจุลินทรีย์เช่น Streptococcus sp.

นอกจากนี้ยังมีประโยชน์ในการแยกแบคทีเรียเช่น Legionella pneumophila.

Agar Thayer Martin

สื่อนี้เหมาะอย่างยิ่งสำหรับเป็นฐานของ agar blood เมื่อสงสัยว่า Neisseria สกุลโดยเฉพาะ Neisseria meningitidis, ในขณะที่ N. gonorrhoeae ไม่เจริญบนวุ้นเลือด.

นอกจากนี้ยังทำหน้าที่ในการทดสอบความไวต่อการ Neisseria meningitidis.

วุ้นโคลัมเบีย

ฐานนี้เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการเพาะตัวอย่างเนื้อเยื่อชิ้นเนื้อในกระเพาะอาหารเพื่อค้นหา เชื้อ Helicobacter pylori.

สื่อเตรียมโดยการเพิ่มเลือดแกะ 7% พร้อมยาปฏิชีวนะ (vancomycin, trimethoprim, amphotericin B และ cefsulodin) เพื่อ จำกัด การเติบโตของแบคทีเรียชนิดอื่นที่อาจมีอยู่.

ฐานเดียวกันนี้เสริมด้วยเลือดมนุษย์หรือลูกแกะ, กรด nalidixic และ colistin มีประโยชน์สำหรับการแยก Gardnerella vaginalis. นอกจากนี้ยังเหมาะสำหรับการประเมินความไวต่อยาต้านจุลชีพต่อยาปฏิชีวนะของจุลินทรีย์ชนิดเดียวกัน.

นอกจากนี้ยังใช้สำหรับการเตรียม agar blood สำหรับการเพาะเลี้ยง anaerobes เพิ่ม aminoglycosides และ vancomycin.

ฐานนี้ช่วยให้เราสังเกตรูปแบบการแตกของเม็ดเลือดแดงได้อย่างเหมาะสม.

Brucella Agar

สื่อนี้ใช้เป็นพื้นฐานของอาหารเลี้ยงเชื้อร่วมกับการเติมวิตามินเคในอุดมคติสำหรับการเพาะเลี้ยงแบคทีเรียที่ไม่ใช้ออกซิเจน ในกรณีนี้แนะนำให้ใช้เลือดแกะ.

Campylobacter agar

Campylobacter Agar ที่เสริมด้วยเลือดแกะ 5% และยาปฏิชีวนะ 5 ตัว (เซฟาโลติน, amphotericin B, trimethoprim, polymyxin B และ vancomycin) เป็นสื่อกลางในการแยก Campylobacter jejuni ในตัวอย่างอุจจาระ.

การจัดเตรียม

บ้านเชิงพาณิชย์แต่ละหลังจะนำคำแนะนำในการเตรียมสื่อวัฒนธรรมลิตร สามารถทำการคำนวณที่สอดคล้องกันเพื่อเตรียมปริมาณที่ต้องการตามวุ้นพื้นฐานที่เลือก.

ชั่งน้ำหนักและละลาย

วุ้นพื้นฐานจะถูกทำให้แห้ง (ผง) ดังนั้นจึงต้องละลายในน้ำกลั่นที่ปรับเป็น pH 7.3.

จำนวนที่ระบุโดยวุ้นฐานที่เลือกจะถูกชั่งน้ำหนักและละลายในปริมาณที่สอดคล้องกันของน้ำใน fiola จากนั้นให้ความร้อนจนถึงความร้อนปานกลางและผสมกับการเคลื่อนไหวหมุนจนกว่าผงทั้งหมดจะละลาย.

ฆ่าเชื้อ

เมื่อละลายแล้วให้ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 20 นาที.

เลือดรวมกัน

เมื่อปล่อยให้หม้อนึ่งความร้อนปล่อยให้ Fiola เย็นลงจนกว่าอุณหภูมิจะแกว่งระหว่าง 40 ถึง 50 ° C; เป็นอุณหภูมิที่ผิวหนังของมนุษย์รองรับและในเวลาเดียวกันนั้นวุ้นยังไม่แข็งตัว.

สำหรับเรื่องนี้ Fiola จะถูกสัมผัสด้วยมือและหากความร้อนนั้นทนได้อุณหภูมิที่เหมาะสมที่สุดในการเพิ่มปริมาณของเลือดที่ถูกกระตุ้น (50 มล. ต่อลิตรของวุ้น) ผสมเบา ๆ เพื่อทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน.

ทางเดินของมวลรวมของเลือดมีความสำคัญเพราะถ้ามันทำเมื่อสื่อร้อนมากเซลล์เม็ดเลือดแดงจะแตกและสื่อจะไม่ทำหน้าที่ในการสังเกตภาวะเม็ดเลือดแดงแตก.

หากมีการเพิ่มความเย็นเกินไปก้อนจะเกิดขึ้นและพื้นผิวของสื่อจะไม่ราบรื่นเพื่อทำให้ขลุ่ยนั้นเหมาะสม.

เทลงในจานเพาะเชื้อ

เสิร์ฟในจานเพาะเชื้อที่ปลอดเชื้อทันทีหลังจากทำให้เป็นเนื้อเดียวกันในเลือด เทลงในจานเพาะเชื้อประมาณ 20 มิลลิลิตร ขั้นตอนนี้จะดำเนินการในเครื่องดูดควันไหลแบบราบเรียบ.

เมื่อเสิร์ฟวุ้นเลือดในจานเพาะเชื้อไม่ควรมีฟองอากาศอยู่บนพื้นผิวของจาน หากเกิดเหตุการณ์นี้เปลวไฟของเครื่องเผาไหม้แผดเผาจะถูกส่งผ่านไปอย่างรวดเร็วบนจานเพื่อกำจัดพวกเขา.

แผ่นได้รับอนุญาตให้แข็งและเก็บไว้ในตู้เย็น (2-8 ° C) กลับด้านจนกว่าจะใช้ ก่อนที่จะใช้แผ่นวุ้นเลือดควรจะมีอุณหภูมิ (ปล่อยให้พวกเขานำอุณหภูมิห้อง) ไปหว่าน.

แผ่นที่เตรียมไว้ใช้เวลาประมาณ 1 สัปดาห์.

การอ้างอิง

1. Bayona M. เงื่อนไขทางจุลชีววิทยาสำหรับการเพาะปลูกของ เชื้อ Helicobacter pylori. Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994) จุลชีววิทยาคลินิกภาคปฏิบัติ มหาวิทยาลัยกาดิซรุ่นที่ 2 บริการสิ่งพิมพ์ UCA.
3. "วุ้นเลือด" Wikipedia, สารานุกรมฟรี. 10 ธ.ค. 2018, 14:55 UTC 27 ธันวาคม 2018, 01: 49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด อาร์เจนตินา Panamericana S.A บทบรรณาธิการ.
5. ศูนย์วินิจฉัยสัตวแพทย์ CEDIVET กัวเตมาลา วางจำหน่ายแล้วที่: trensa.com.
6.  Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา (ฉบับที่ 5) อาร์เจนตินา, Panamericana บรรณาธิการ.