หุ้น:
Agar Sabouraud Foundation การเตรียมและการใช้งาน
Sabouraud agar, ยังเป็นที่รู้จักกันในนาม Sabouraud dextrose agar เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีความเข้มข้นโดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับการแยกและการพัฒนาของเชื้อราเช่นยีสต์ราและ dermatophytes.
ดังนั้นวิธีนี้จึงไม่สามารถขาดได้ในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยาเพื่อตรวจสอบการปรากฏตัวของเชื้อราที่ทำให้เกิดโรคหรือโรคฉวยโอกาสทั้งจากตัวอย่างทางคลินิกหรือไม่ใช่ทางคลินิก ในทำนองเดียวกันมันยังเหมาะสำหรับการเติบโตของแบคทีเรียใยเช่น Streptomyces และ Nocardia การใช้งานกว้างมากสามารถใช้ในมนุษย์สัตว์พืชและเห็ดราวิทยาอุตสาหกรรม.
สื่อนี้ถูกสร้างขึ้นในปีพ. ศ. 2439 โดยแพทย์ผิวหนังชื่อดัง Raimond Sabouraud ซึ่งได้กลายเป็นผู้เชี่ยวชาญระดับโลกในด้านความผิดปกติของหนังศีรษะซึ่งส่วนใหญ่เกิดจาก dermatophytes.
การสร้างมันมีความสำคัญมากจนถูกนำมาใช้ตั้งแต่นั้นมาและมันยังคงดำเนินต่อไปจนถึงทุกวันนี้.
แม้ว่ามันจะเป็นพิเศษสำหรับเชื้อราในแบคทีเรียขนาดกลางนี้สามารถเจริญเติบโตดังนั้นสำหรับตัวอย่างที่มีพืชผสมต้องมีการรวมของยาปฏิชีวนะในการเตรียมการของพวกเขาและทำให้ยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียที่อาจมีอยู่.
ทางเลือกของยาปฏิชีวนะควรทำด้วยความระมัดระวังและคำนึงถึงชนิดของเชื้อราที่คุณต้องการกู้คืนเนื่องจากบางชนิดถูกยับยั้งในการปรากฏตัวของสารบางอย่าง.
ดัชนี
- 1 มูลนิธิ
- 1.1 การผสมกันระหว่าง Sabouraud dextrose agar กับยาปฏิชีวนะมากที่สุด
- 2 การเตรียมการ
- 2.1 Dextrose Sabouraud Agar
- 2.2 Sabouraud Dextrose Agar (การดัดแปลงของ Emmons)
- 2.3 Sabouraud dextrose agar (ดัดแปลงจาก Emmons) ด้วย chloramphenicol
- 2.4 Dextrose Sabouraud Emmons agar กับ cycloheximide
- 2.5 Dextrose Sabouraud Agar (Emmons) กับ chloramphenicol และ cycloheximide
- 2.6 ยาปฏิชีวนะอื่น ๆ ที่สามารถเพิ่มได้
- 3 ข้อควรพิจารณาพิเศษ
- 4 การควบคุมคุณภาพ
- 5 ใช้
- 5.1 การอบรมขั้นต้น
- 5.2 Sporulation
- 5.3 การอนุรักษ์
- 5.4 จุลภาค
- 5.5 ในเห็ดรามนุษย์
- 5.6 มัยวิทยาสัตว์
- 5.7 พิษวิทยาสิ่งแวดล้อม
- 5.8 มัยวิทยาอุตสาหกรรม
- 5.9 พืชมัยวิทยา
- 6 อ้างอิง
มูลนิธิ
Sabouraud dextrose agar เป็นอาหารที่อยู่ในตำรับดั้งเดิมที่เลือกอย่างอ่อนเนื่องจากค่า pH ที่เป็นกรดอยู่ที่ 5.6 ± 0.2 อย่างไรก็ตามแบคทีเรียยังคงสามารถพัฒนาได้ส่วนใหญ่จะอยู่ในระยะฟักตัวนาน.
สื่อประกอบด้วยเคซีนเปปโตนและเนื้อเยื่อสัตว์ของตับอ่อนซึ่งให้แหล่งคาร์บอนและไนโตรเจนสำหรับการพัฒนาของจุลินทรีย์.
นอกจากนี้ยังมีกลูโคสที่มีความเข้มข้นสูงซึ่งทำหน้าที่เป็นแหล่งพลังงานสนับสนุนการเจริญเติบโตของเชื้อราในแบคทีเรีย ทั้งหมดผสมกับ agar-agar ซึ่งเป็นส่วนประกอบที่ให้ความมั่นคงที่เหมาะสม.
ในทางตรงกันข้าม Sabouraud dextrose agar อาจเลือกใช้หากมีการเพิ่มยาปฏิชีวนะ.
ด้วยยาปฏิชีวนะมันมีประโยชน์อย่างยิ่งในตัวอย่างแผลแผลเปิดหรือตัวอย่างที่สงสัยว่ามีการปนเปื้อนของแบคทีเรียขนาดใหญ่.
การใช้งานร่วมกันมากที่สุดของ Sabouraud dextrose agar กับยาปฏิชีวนะ
-วุ้น Sabouraud กับ chloramphenicol: เหมาะสำหรับการกู้คืนยีสต์และเชื้อราใย.
-Sabouraud วุ้นกับ gentamicin และ chloramphenicol: ในอาหารเลี้ยงเชื้อและยีสต์เกือบทุกสายพันธุ์นี้และยับยั้งเชื้อแบคทีเรียจำนวนมากรวมทั้ง Enterobacteria, Pseudomonas และ Staphylococcus.
-Sabouraud agar ด้วย cycloheximide: มันเป็นประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับตัวอย่างจากผิวหนังหรือทางเดินหายใจตราบใดที่สงสัยว่าเป็นเชื้อรา dimorphic.
Cycloheximide ควรใช้ด้วยความระมัดระวัง แม้ว่ามันจะถูกใช้เพื่อยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อราที่ไม่ทำให้เกิดโรคหรือสิ่งแวดล้อมและยีสต์ที่อาจมีการปนเปื้อนในตัวอย่างก็ยังยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อราบางอย่างเช่น Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp และ เชื้อราฉวยโอกาสอื่น ๆ.
-Sabouraud agar ด้วย chloramphenicol plus cycloheximide: ส่วนใหญ่ใช้เพื่อแยก dermatophytes dimorphic และเชื้อรา มันมีข้อเสียที่จะยับยั้งเชื้อราบางชนิดเช่น Candida ไม่มี albicans, Aspergillus, Zygomycetes หรือ C. neoformans.
-Sabouraud วุ้นด้วย chloramphenicol, streptomycin, penicillin G และ cycloheximide: มันเหมาะสำหรับตัวอย่างที่ปนเปื้อนอย่างมากกับแบคทีเรียและเชื้อรา saprophytic แต่มีข้อเสียที่ยับยั้งการเจริญเติบโตของ Actinomyces และ Nocardias, นอกจากเห็ดฉวยโอกาสดังกล่าวข้างต้น.
การจัดเตรียม
หากคุณมีส่วนผสมแยกจากกันคุณสามารถเตรียมมันด้วยวิธีต่อไปนี้:
เดกซ์โทรสวุ้น Sabouraud
เสียใจ:
- 40 กรัมเดกซ์โทรส
- เปปโตน 10 กรัม
- 15 กรัมของวุ้นวุ้น
- วัดน้ำกลั่น 1,000 มล
ส่วนผสมทั้งหมดผสมกันค่าความเป็นกรด - ด่างจะปรับเป็น 5.6 ละลายตัวละลายโดยการต้มกระจายสื่อ 20 มิลลิลิตรในหลอดขนาด 25 x 150 มม. โดยไม่มีหน้าแปลนและบนผ้าฝ้ายโดยเฉพาะอย่างยิ่ง.
ขนาดหลอดอื่น ๆ ยังสามารถใช้ได้ขึ้นอยู่กับความพร้อม.
พวกมันถูกทำให้เป็นเวลา 10 นาทีที่บรรยากาศกดดัน (121 ° C) อย่าเกินเวลาการนึ่งอัตโนมัติ เมื่อปล่อยให้หม้อนึ่งความดันท่อจะเอียงด้วยการสนับสนุนจนกว่าพวกเขาจะแข็งตัวในยอดเขาขลุ่ย.
อีกวิธีคือการละลายส่วนผสมโดยการให้ความร้อนจนเดือด ในหม้อนึ่งเดียวกันเป็นเวลา 10 นาทีแล้วแจกจ่าย 20 มล. ในจานเลี้ยงเชื้อ.
ถ้ามีวุ้นวุ้นเดกซ์โทรสเดกซ์โทรสซึ่งมีส่วนผสมทั้งหมดอยู่แล้วเราจะดำเนินการชั่งน้ำหนักตามที่ระบุในโรงพาณิชยสำหรับน้ำหนึ่งลิตร ขั้นตอนที่เหลือเหมือนกับขั้นตอนที่อธิบายไว้ข้างต้น.
Dextrose agar Sabouraud (ดัดแปลงจาก Emmons)
เสียใจ:
- 20 กรัมเดกซ์โทรส
- เปปโตน 10 กรัม
- 17 กรัมของวุ้นวุ้น
- วัดน้ำกลั่น 1,000 มล
ส่วนผสมทั้งหมดผสมกันค่า pH จะปรับเป็น 6.9 ดำเนินการในลักษณะเดียวกับกรณีก่อนหน้า.
มีบ้านเชิงพาณิชย์ที่ให้บริการสื่อที่มีส่วนผสมทั้งหมด ในกรณีนี้ให้ชั่งน้ำหนักและเตรียมการตามที่อธิบายไว้ในส่วนแทรก.
Sabouraud dextrose agar (ดัดแปลงจาก Emmons) ด้วย chloramphenicol
วิธีการแก้ปัญหาหุ้น Chloramphenicol
- ฐานคลอแรมเฟนิคอลน้ำหนัก 500 มก
- วัดเอทานอล 95% 100 มล
- ผสม
The Sabouraud dextrose agar (Emmons) จัดทำขึ้นตามที่อธิบายไว้ข้างต้นและนอกจากนี้สำหรับอาหารแต่ละลิตรให้เติมคลอแรมฟีนิคอล 10 มิลลิลิตรก่อนที่จะทำการนึ่งอัตโนมัติ.
เดกซ์โทรสวุ้น Sabouraud Emmons ด้วยไซโคลเฮกซิไมด์
วิธีแก้ปัญหาหุ้นไซโคลเฮกซิไมด์
- ไซโคลเฮกซิไมด์น้ำหนัก 5 กรัม
- วัดอะซิโตน 100 มล
- ผสม
อาหารเลี้ยงเชื้อ Sabouraud dextrose agar (Emmons) จัดทำขึ้นตามที่อธิบายไว้แล้วและนอกจากนี้สำหรับอาหารแต่ละลิตรจะเติมไซโคลเฮกซิไมด์ 10 มิลลิลิตรลงในสต็อกก่อนที่จะทำการนึ่งอัตโนมัติ.
Sabouraud dextrose agar (Emmons) กับ chloramphenicol และ cycloheximide
Sabouraud dextrose agar (Emmons) จัดทำขึ้นตามที่อธิบายไว้ข้างต้นและเติมสารละลายคลอแรมเฟนิคอล 10 มล. ต่อลิตรและสารละลายไซโคลเฮกซิไมด์ 10 มล. ก่อนการนึ่งฆ่าเชื้ออัตโนมัติ.
ยาปฏิชีวนะอื่น ๆ ที่สามารถเพิ่มได้
20,000 ถึง 60,000 หน่วยเพนิซิลินต่อลิตรของสื่อ.
Streptomycin 30 มก. ต่อลิตรขนาดกลาง.
ทั้งสองควรรวมเข้าด้วยกันหลังจากที่นึ่งด้วยความเย็นปานกลาง (50-55 ° C).
นีโอมัยซิน 0.04 กรัมต่อลิตร.
0.04 กรัมของ gentamicin ต่อลิตรของสื่อ.
ข้อพิจารณาพิเศษ
เพื่อความปลอดภัยเราแนะนำให้ปลูก Sabouraud dextrose agar ในหลอดรูปลิ่ม (เอียงในยอดเขาขลุ่ย) มากกว่าในจาน Petri เพื่อหลีกเลี่ยงการแพร่กระจายและการสูดดมสปอร์.
สิ่งสำคัญคือหลอดที่มีวุ้น Sabouraud ปกคลุมด้วยผ้าฝ้ายและไม่มีฝาเกลียวเนื่องจากแสดงให้เห็นว่าสภาพเซมาเนียแอโรบิกยับยั้งการก่อตัวของสปอร์ในบางสายพันธุ์เช่น Coccidioides immitis. นอกจากนี้เชื้อราส่วนใหญ่ยังเป็นแอโรบิก.
หากใช้ฝาเกลียวอย่าปิดให้แน่น.
การควบคุมคุณภาพ
สื่อที่เตรียมไว้จะต้องมีการควบคุมคุณภาพเพื่อตรวจสอบการทำงานที่เหมาะสม ด้วยเหตุนี้จึงมีการควบคุมสายพันธุ์บางอย่าง.
สำหรับ Sabouraud dextrose agar ที่มี chloramphenicol ATCC สามารถใช้สายพันธุ์ได้ Candida albicans, ซึ่งต้องมีการเติบโตที่ดีเยี่ยม อีกจานถูกฉีดยาด้วยสายพันธุ์ ของเชื้อ Escherichia coli, จะต้องยับยั้งอย่างสมบูรณ์.
จานเพาะเชื้อจะถูกบ่มในที่ไม่ควรเจริญเติบโตของจุลินทรีย์.
Sabouraud เดกซ์โทรสวุ้นด้วย chloramphenicol และไซโคลเฮกซิไมด์สามารถใช้สายพันธุ์ของ Trichophyton mentagrophytes, ต้องพัฒนาให้ดี อีกจานถูกฉีดยาด้วยความเครียด Aspergillus flavus, ซึ่งจะต้องมีการเติบโตเล็กน้อยหรือไม่มีการเติบโต นอกจากนี้จานที่ไม่มีการเติมเชื้อจะถูกบ่มเพื่อแสดงให้เห็นถึงความปลอดเชื้อ.
สำหรับ Sabouraud เดกซ์โทรสวุ้นที่มีไซโคลเฮกซิไมด์, สายพันธุ์ของ Candida albicans, Trichophyton rubrum หรือ Microsporum canis, ซึ่งน่าจะแสดงการเติบโตที่ดี.
ในทำนองเดียวกันสายพันธุ์ของ Aspergillus flavus, แสดงการเติบโตเพียงเล็กน้อยหรือไม่มีการเติบโต ในที่สุดก็ฟักจานที่ไม่มีการกระตุ้นเพื่อควบคุมการฆ่าเชื้อ.
การใช้งาน
ประถมศึกษา
Classic Sabouraud dextrose agar มี 4 กรัมของ dextrose และเป็นสารสกัดหลักที่ดีเยี่ยมเนื่องจากมันแสดงลักษณะทางสัณฐานวิทยาของเชื้อราแต่ละชนิด.
นอกจากนี้ยังเป็นเลิศในการสาธิตการผลิตเม็ดสี อย่างไรก็ตามมันไม่ได้เป็นวิธีที่เหมาะสมที่สุดในการสังเกตการสร้างสปอร์.
นอกจากนี้ยังไม่แนะนำให้ปลูก Blastomyces dermatitidis, ซึ่งถูกยับยั้งโดยความเข้มข้นสูงของกลูโคสในปัจจุบัน.
ในทางกลับกันต้องคำนึงถึงการพิจารณาบางอย่างเพื่อการเพาะปลูก.
เชื้อราบางชนิดพัฒนาได้ดีกว่าที่อุณหภูมิห้องเช่นแม่พิมพ์ส่วนอื่น ๆ พัฒนาได้สำเร็จที่ 37 ° C เช่นยีสต์บางชนิดและบางชนิดสามารถพัฒนาได้ทั้งที่อุณหภูมิ (รา dimorphic).
ด้วยเหตุนี้บางครั้งจึงจำเป็นต้องใช้แผ่นวุ้น Sabouraud หลายแผ่นสำหรับตัวอย่างเดียวกันเนื่องจากพวกมันมักจะปลูกแบบซ้ำกันเพื่อฟักไข่หนึ่งแผ่นที่อุณหภูมิห้องและอีกแผ่นที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส.
ตัวอย่างเช่น, Sporothrix schenckii มันถูกหว่านในสองแผ่น; หนึ่งถูกบ่มที่อุณหภูมิห้องเพื่อให้ได้ระยะแม่พิมพ์และอื่น ๆ ถูกบ่มที่ 37 ° C เพื่อให้ได้ระยะเหมือนยีสต์ แต่ในระยะหลังจำเป็นต้องเพิ่ม 5% ของเลือดไปยังสื่อ.
ในกรณีอื่น ๆ เช่นใน mycetomas ตัวอย่างของ Sabouraud agar สองแผ่นถูกหว่านหนึ่ง chloramphenicol และ cycloheximide อีกด้วย ครั้งแรกจะช่วยให้การเจริญเติบโตของตัวแทนสาเหตุของ mycetoma จากต้นกำเนิดของเชื้อรา (Eumicetoma) และตัวแทนสาเหตุที่สองของ mycetomas ที่มาจากแบคทีเรียเช่น actinomycetomas.
สร้างสปอร์
เดกซ์โทรส Sabouraud agar ที่ดัดแปลงโดย Emmons มีเดกซ์โทรส 2 กรัมและไม่เพียง แต่ใช้สำหรับการแยกเท่านั้น แต่ยังใช้สำหรับการสร้างสปอร์และการอนุรักษ์เชื้อรา.
ในสื่อนี้ถ้าคุณสามารถกู้คืนสายพันธุ์ของ Blastomyces dermatitidis.
การอนุรักษ์
เพื่อรักษาวัฒนธรรมของเชื้อราสามารถเก็บไว้ในตู้เย็น (2-8 ° C) เวลาในการเก็บอาจแตกต่างกันระหว่าง 2 ถึง 8 สัปดาห์ หลังจากเวลานี้พวกเขาจะต้อง subcultured เพื่อทำซ้ำกระบวนการ.
เชื้อราบางชนิดได้รับการดูแลอย่างดีที่สุดที่อุณหภูมิห้องเช่น Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum และ Microsporum audounii.
การบำรุงรักษาสายพันธุ์สามารถยืดเยื้อเพื่อหลีกเลี่ยงการมีรูปร่างผิดปกติถ้าเดกซ์โทรสถูกเอาออกจากวุ้นอย่างสมบูรณ์และถ้าปริมาณของวุ้นในตัวกลางลดลงเพื่อหลีกเลี่ยงความแห้ง.
microcultures
สำหรับการระบุเชื้อราบางชนิดนั้นมีความจำเป็นที่จะต้องใช้จุลชีพโดยใช้ Sabouraud agar หรือวิธีการพิเศษอื่น ๆ เพื่อสังเกตโครงสร้างของการสืบพันธุ์แบบไม่อาศัยเพศและการมีเพศสัมพันธ์.
ในเห็ดรามนุษย์
ส่วนใหญ่จะใช้สำหรับการวินิจฉัยโรคของเชื้อราโดยเฉพาะที่มีผลต่อผิวหนังและสิ่งที่แนบมา (ผมและเล็บ).
ตัวอย่างอาจเป็นสารคัดหลั่งสารหลั่งผิวหนังเส้นผมเล็บเสมหะน้ำไขสันหลังหรือปัสสาวะ เชื้อโรคที่แยกได้ทั่วไปคือ dermatophytes, เชื้อราที่ทำให้เกิดการติดเชื้อของเชื้อราใต้ผิวหนังและระบบ.
วิทยาสัตว์วิทยา
สัตว์มักได้รับผลกระทบจากการติดเชื้อราดังนั้นวุ้น Sabouraud จึงมีประโยชน์ในสัตว์เช่นเดียวกับในเห็ดรามนุษย์.
ตัวอย่างเช่น dermatophytes มักจะส่งผลกระทบต่อสัตว์ ดังกล่าวเป็นกรณีของ Microsporum canis var distortum, ที่ติดเชื้อสุนัขแมวม้าหมูและลิงบ่อยครั้ง ด้วย, ไมโครยิปซัม ติดเชื้อสุนัขแมวและวัวควาย.
นกเช่นไก่ไก่โต้งและไก่ได้รับผลกระทบจาก Microsporum gallinae.
เห็ดอื่น ๆ เช่น Zymonema farciminosum, พวกเขายังเป็นสาเหตุของโรคในสัตว์ส่วนใหญ่ในม้าล่อและลาผลิตอักเสบที่สำคัญในเส้นเลือดเหลือง.
Sporothrix schenkii และ Histoplasma capsulatum ส่งผลกระทบต่อสัตว์เลี้ยงและมนุษย์.
มัยวิทยาสิ่งแวดล้อม
เชื้อราที่ทำให้เกิดโรคหรือโรคฉวยโอกาสจำนวนมากสามารถกระจุกตัวในเวลาใดก็ได้ในสภาพแวดล้อมที่กำหนดโดยเฉพาะในห้องผ่าตัดและห้องไอซียู (ICU) ของโรงพยาบาลและโรงพยาบาล ดังนั้นจึงจำเป็นต้องควบคุมมัน.
ช่องโหว่อื่น ๆ ได้แก่ ห้องสมุดและอาคารเก่าซึ่งอาจได้รับผลกระทบจากความเข้มข้นของเชื้อราสิ่งแวดล้อม.
ในการศึกษาด้านสิ่งแวดล้อม Sabouraud dextrose agar ใช้สำหรับการแยกเชื้อรา.
มัยวิทยาอุตสาหกรรม
Sabouraud dextrose agar ไม่ควรพลาดสำหรับการศึกษาสารปนเปื้อนของเชื้อราในการผลิตเครื่องสำอางอาหารเครื่องดื่มหนังสิ่งทอและอื่น ๆ.
เห็ดราพืช
พืชยังประสบกับโรคที่เกิดจากเชื้อราซึ่งมีผลกระทบต่อส่วนต่าง ๆ ของพืชซึ่งสามารถหยุดการเก็บเกี่ยวได้ทำให้เกิดความสูญเสียทางการเกษตรอย่างมาก.
การอ้างอิง
- Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ mycoses และการศึกษาความไวต่อยาต้านเชื้อรา คำแนะนำของสังคมสเปนเกี่ยวกับโรคติดเชื้อและจุลชีววิทยาคลินิก มีจำหน่ายที่: coesant-seimc.org
- ห้องปฏิบัติการ ValteK (2009) Sabouraud เดกซ์โทรสวุ้นกับ cycloheximide วางจำหน่ายแล้วที่: andinamedica.com.
- Navarro O. (2013) มัยวิทยาสัตวแพทย์ มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์แห่งชาติ. นิการากัว.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด อาร์เจนตินา Panamericana S.A บทบรรณาธิการ
- Casas-Rincon G. เห็ดราทั่วไป 2537 ได้ 2 เอ็ด Universidad เซ็นทรัลเดอเวเนซูเอลาฉบับห้องสมุด เวเนซุเอลาการากัส.