Papa dextrose Foundation การเตรียมและการใช้

Papa dextrose agar เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีคุณค่าและไม่ได้คุณค่าทางโภชนาการ มันสามารถเจริญเติบโตของแบคทีเรียและเชื้อราชนิด แต่การใช้งานจะถูกระบุโดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับการแยกเชื้อราและยีสต์ เป็นที่รู้จักกันว่าเป็นสื่อกลาง PDA โดยนิพจน์ภาษาอังกฤษ Potato Dextrose Agar.

มันมีประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับการแยกเชื้อราไฟโตพาโทจีนิกนั่นคือพวกที่ส่งผลกระทบต่อพืช ในการปลูกตัวอย่างจากพืชที่ติดเชื้อสื่ออื่น ๆ เช่น Sabouraud agar หรือ malta agar สามารถนำมาใช้ได้อย่างไรก็ตามสำหรับการใช้เป็นประจำควรใช้วุ้นดีท็อกซ์จากมันฝรั่งเนื่องจากมีการสร้างสปอร์มาก.

นอกจากนี้ยังใช้สำหรับการนับอาณานิคมของเชื้อราในตัวอย่างเครื่องสำอางยาและอาหารนม ในทำนองเดียวกันมันเป็นมงคลที่จะปลูกตัวอย่างของการขูดผิวหนังเพื่อค้นหา dermatophytes ซึ่งเติบโตได้ดีมากในสื่อนี้พัฒนาเม็ดสีลักษณะของพวกเขา.

มันฝรั่งเดกซ์โทรสขนาดกลางนั้นง่ายและง่ายต่อการเตรียมในห้องปฏิบัติการ มันมีเป็นชื่อที่แสดงถึงการแช่มันฝรั่งเดกซ์โทรสและวุ้นวุ้น นอกจากนี้ยังสามารถเพิ่มสารยับยั้งเพื่อป้องกันการเจริญเติบโตของแบคทีเรียและเพิ่มการคัดเลือกสำหรับสายพันธุ์ของเชื้อรา.

ดัชนี

• 1 มูลนิธิ
• 2 การเตรียมการ
  • 2.1 - การจัดทำ papa dextrose agar แบบทำเอง (ไม่ใช่เชิงพาณิชย์)
  • 2.2 - การเตรียมเชิงพาณิชย์ของ papa dextrose agar
• 3 ใช้
  • 3.1 กระบวนการในการปลูกพืชตัวอย่างบนวุ้นเดกซ์โทรส
  • 3.2 ขั้นตอนการปลูกตัวอย่างผิวหนังผมหรือเกล็ดเล็บบน papa dextrose agar
  • 3.3 ขั้นตอนการชี้บ่ง
  • 3.4 การนับอาณานิคม
  • 3.5 การบำรุงรักษาสายพันธุ์เชื้อรา
• 4 การควบคุมคุณภาพ
• 5 อ้างอิง

มูลนิธิ

Papa dextrose agar เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อที่ให้สารอาหารที่จำเป็นต่อการพัฒนาของเชื้อราและยีสต์.

การผสมผสานของการแช่มันฝรั่งกับกลูโคสเป็นแหล่งพลังงานที่สมบูรณ์แบบสำหรับการเจริญเติบโตของเชื้อราที่น่าพอใจ ในขณะที่วุ้นเป็นสิ่งที่ให้ความสอดคล้องกับสภาพแวดล้อม.

สื่อเพียงอย่างเดียวไม่ยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียดังนั้นจึงเป็นอาหารที่ไม่ผ่านการคัดเลือก ในการเลือกสรรคุณต้องเพิ่มสารยับยั้งเช่นกรดทาร์ทาริกหรือยาปฏิชีวนะ.

การจัดเตรียม

-การปรุงแบบโฮมเมด (ไม่ใช่เชิงพาณิชย์) ของวุ้นเดกซ์โทรสมันฝรั่ง

จานสัตว์เลี้ยง

มันถูกจัดทำในวิธีต่อไปนี้:

ก่อนอื่นมันฝรั่งถูกล้างอย่างดีขจัดสิ่งสกปรกที่มี พวกเขาถูกตัดเป็นชิ้นบาง ๆ กับทุกอย่างและเปลือก ชั่งน้ำหนักมันฝรั่ง 200 กรัมและนำไปต้มในน้ำกลั่นหนึ่งลิตรครึ่งชั่วโมง.

หลังจากเวลาถูกกรองหรือเครียดการเตรียมทั้งหมดผ่านผ้ากอซ.

ของเหลวที่ได้จะถูกเติมด้วยน้ำกลั่นจนกว่าจะถึงหนึ่งลิตร ในการแช่จะเติม agar-agar 20 กรัมและ dextrose 20 กรัมผสมให้เข้ากันและนึ่งที่อุณหภูมิ 121 ° C ที่ 15 ปอนด์ของความดันเป็นเวลา 15 นาที.

อนุญาตให้เย็นถึง 50 ° C และเสิร์ฟในจานเลี้ยงเชื้อปลอดเชื้อ แผ่นที่เตรียมจะถูกเก็บไว้ในตู้เย็น.

ร่อน

นอกจากนี้คุณยังสามารถเตรียม papa dextrose agar wedges.

ในกรณีนี้ก่อนที่จะทำการฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันขนาดกลางที่ 12 ถึง 15 มล. จะถูกวางในหลอดจากนั้นพวกเขาจะถูกนึ่งโดยอัตโนมัติและปล่อยให้อยู่บนการสนับสนุนพิเศษจนกว่าจะแข็งตัว ประหยัดในตู้เย็น.

สื่อยังคงอยู่ที่ค่า pH 5.6 ± 0.2 อย่างไรก็ตามห้องปฏิบัติการบางแห่งเพิ่มกรดทาร์ทาริก 10% เพื่อลดค่า pH ลงเหลือ 3.1 ± 0.1 เพื่อยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย.

ในแง่เดียวกันนี้ห้องปฏิบัติการอื่น ๆ ต้องการเพิ่มยาปฏิชีวนะเพื่อให้มันเลือกสรรสำหรับการเพาะปลูกของเชื้อราและป้องกันการพัฒนาของแบคทีเรีย.

-การเตรียมเชิงพาณิชย์ของมันฝรั่งเดกซ์โทรสวุ้น

น้ำหนัก 39 กรัมของตัวกลางที่ถูกทำให้แห้งในท้องตลาดและละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร พักไว้ 5 นาที.

ส่วนผสมจะถูกทำให้ร้อนโดยการกวนบ่อย ๆ จนกว่าจะละลายทั้งหมด ต่อจากนั้นฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที.

สามารถเตรียมแผ่นหรือเวดจ์ได้ ดำเนินการต่อตามที่อธิบายไว้ข้างต้น.

ค่า pH ยังคงอยู่ที่ 5.6 ± 0.2 หากต้องการค่าความเป็นกรด - ด่างเท่ากับ 3.1 จะต้องเติมกรดทาร์ทาริกที่ปราศจากเชื้อ 20% 14 มิลลิลิตรก่อนเสิร์ฟบนจาน.

สีของสื่อที่ไม่ได้เตรียมไว้นั้นเป็นสีเบจและสีที่เตรียมไว้นั้นเป็นสีเหลืองอ่อนที่มีลักษณะขุ่นมัวหรือมีสีเหลือบเล็กน้อย.

การใช้งาน

กระบวนการสำหรับปลูกพืชตัวอย่างในมันฝรั่งเดกซ์โทรสวุ้น

-สำหรับใบมีจุด

ใบถูกตัดเป็นชิ้น ๆ.

ในแก้วขนาด 50cc พร้อมแอลกอฮอล์ 50% วางชิ้นส่วนของใบ (ชิ้นสีและมีสุขภาพดี) เพื่อฆ่าเชื้อพื้นผิวเป็นเวลา 20 ถึง 30 วินาที ดึงแอลกอฮอล์และเพิ่มโซเดียมไฮโปคลอไรต์ 20% เป็นเวลา 40 ถึง 50 วินาทีหากเป็นใบบางและเพิ่มเวลาเป็น 80 วินาทีหากเปลือกเห่าและบันทึก.

ดึงโซเดียมไฮโปคลอไรต์และจับคลิปที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วนำไปวางบนพื้นผิวของสื่อ (สูงสุด 10 ชิ้น) วางวันที่และฟักจาก 20 ถึง 30 ° c.

-สำหรับผลไม้และหัว

หากผลไม้เป็นเนื้อให้เปิดผลไม้ที่ได้รับผลกระทบจากเชื้อราและใช้มีดผ่าตัดที่ผ่านการฆ่าเชื้อทั้งส่วนที่เป็นโรคและส่วนที่มีสุขภาพดีและวางไว้บนพื้นผิวของวุ้น.

หากผลไม้เป็นส้มเช่นมะนาวหรือส้มคุณควรเปิดและหว่านเมล็ดพืช.

เมื่อพื้นผิวของผลไม้ได้รับผลกระทบและสังเกตเห็นสปอร์ได้ดีที่สุดคือใช้วิธีขูดบนจาน สิ่งนี้ประกอบด้วยการสัมผัสสปอร์ด้วยไม้พายในรูปของ "L" ที่ผ่านการฆ่าเชื้อและทำให้เย็นลงแล้วทำการคดเคี้ยวไปมาเพาะ 2 ถึง 3 ครั้งบนวุ้น.

-สำหรับธัญพืช

พวกมันถูกฆ่าเชื้อตามที่อธิบายไว้ในใบไม้แล้ววางบนวุ้น.

-สำหรับกิ่งและก้าน

การขูดเปลือกจะดำเนินการแล้วชิ้นส่วนของสุขภาพและโรคจะถูกถ่ายและหว่านโดยตรงบนวุ้น.

จานเพาะเชื้อจะถูกบ่มใน aerobiosis ที่อุณหภูมิ 20-30 ° C เป็นเวลา 72 ชั่วโมง.

กระบวนการสำหรับการปลูกตัวอย่างผิวหนังผมหรือเกล็ดเล็บบนวุ้นปาปาเดกซ์โทรส

ตัวอย่างจะต้องดำเนินการโดยใช้มีดผ่าตัดมีดหมายเลข 11 ทั้งเพื่อตัดขนที่ได้รับผลกระทบสะเก็ดผิวหนังหรือเล็บในการค้นหาของ dermatophytes ก่อนการเก็บตัวอย่างควรฆ่าเชื้อในพื้นที่ด้วยแอลกอฮอล์ 70%.

-ตัวอย่างผิว

ในแผลที่เป็นสะเก็ดควรทำการขูดบริเวณขอบแผลเนื่องจากมีแนวโน้มที่จะพบเชื้อรามากขึ้น.

ในแผลฟกช้ำตัวอย่างจะถูกถ่ายด้วยก้านสำลีแห้งหรือเปียก หว่านทันทีบนมันฝรั่งเดกซ์โทรส agar หรือวุ้นซาโบแร็ค หลีกเลี่ยงวิธีการขนส่ง.

อีกวิธีหนึ่งในการสุ่มตัวอย่างคือการใช้เทคนิคพรมสี่เหลี่ยมของ Mariat และ Adan Campos ในกรณีนี้พื้นที่ที่ได้รับผลกระทบจะถูกลูบ 5 ครั้งด้วยขนสัตว์ที่ผ่านการฆ่าเชื้อเพื่อการเพาะปลูกต่อไป.

ตัวอย่างสามารถวางโดยตรงในสื่อวัฒนธรรม.

-ตัวอย่างผม

ส่วนที่ได้รับผลกระทบอาจถูกตัดหรือฉีกขาดโดยรากทั้งนี้ขึ้นอยู่กับพยาธิสภาพ วางตัวอย่างในสื่อวัฒนธรรม.

-ตัวอย่างเล็บมือ

คุณสามารถขูดหรือตัดเล็บเฉพาะส่วนที่ได้รับผลกระทบ มันจะขึ้นอยู่กับประเภทของการบาดเจ็บ.

ตัดตัวอย่างเป็นชิ้นขนาด 1 มม. ก่อนหยอดเมล็ดเพื่อเพิ่มโอกาสในการสัมผัสกับเชื้อราด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อ.

ขั้นตอนการระบุตัวตน

โคโลนีที่ได้รับในจานจะถูกแยกในหลอดที่บรรจุวุ้นเดกซ์โทรสวุ้นเพื่อทำการศึกษาด้วยตนเองของโคโลนี (ลักษณะ, สี, ความมั่นคง, ระดับของการพัฒนา).

การศึกษาด้วยกล้องจุลทรรศน์ (การสังเกตโครงสร้างและการก่อตัวของมัน) สามารถทำได้โดยวิธีจุลภาคหรือการสังเกตโดยตรงภายใต้กล้องจุลทรรศน์ระหว่างแผ่นลามินาและแผ่นใบ.

การนับอาณานิคม

สื่อนี้ยังสามารถใช้ในการกำหนดภาระของเชื้อราและยีสต์ที่มีอยู่ในตัวอย่างพืชอาหารเครื่องสำอางหรือยา เพื่อจุดประสงค์นี้ใช้ papa dextrose agar ที่เสริมด้วยยาปฏิชีวนะเช่น: (chloramphenicol, chlorotetracycline หรือทั้งสองอย่าง).

เทตัวอย่าง 1 มิลลิลิตรซึ่งเจือจางลงในจานเพาะเชื้อที่ว่างเปล่าแล้วละลายมันฝรั่งเดกโตโรสเสียบวุ้นและปล่อยให้เย็นถึง 45 องศาเซลเซียส เทจาน Petri แล้วหมุนจนเป็นเนื้อเดียวกัน พักไว้จนกว่าจะแข็งตัว.

ฟักใน aerobiosis ที่ 20-25 ° C (แม่พิมพ์) หรือที่ 30-32 ° C (ยีสต์) เป็นเวลา 5 ถึง 7 วันหรือมากกว่านั้นขึ้นอยู่กับชนิดของเชื้อราที่ต้องการและชนิดของตัวอย่าง สองแผ่นสามารถใช้ในการฟักไข่ในช่วงอุณหภูมิทั้งสอง.

การบำรุงรักษาสายพันธุ์ของเชื้อรา

Papa dextrose agar สามารถใช้รักษาสายพันธุ์เชื้อราที่มีชีวิตได้เป็นเวลาหลายปี.

เมื่อต้องการทำเช่นนี้เชื้อราที่ปลูกในเวดจ์ปาป้าเดกซ์โทรสอาการ์และเมื่อเชื้อราเติบโตแล้วจะถูกปกคลุมด้วยน้ำมันแร่ น้ำมันจะต้องผ่านการฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันเป็นเวลา 45 นาทีและมีความหนืดประมาณ 300 ถึง 330 Saybolt น้ำมันควรเกินปลายเอียงประมาณ 1 ถึง 2 ซม.

การควบคุมคุณภาพ

จากแต่ละชุดที่เตรียมหนึ่งหรือสองแผ่นควรนำมาและบ่มที่ 25 ° C เป็นเวลา 48 ชั่วโมงหรือที่ 20 ° C เป็นเวลา 96 ชั่วโมง การควบคุมความปลอดเชื้อที่ดีคือสิ่งที่ไม่มีการพัฒนาของอาณานิคม.

รู้จักกันหรือได้รับการรับรองสายพันธุ์ควบคุมเช่น:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 ในทุกกรณีคาดว่าการเติบโตที่ดี.

การอ้างอิง

1. ห้องปฏิบัติการ Britania Papa glucosado agar 2558 มีจำหน่ายที่: britanialab.com
2. Neogen Laboratories มันฝรั่งเดกซ์โทรสวุ้น มีจำหน่ายที่: foodsafety.neogen.com
3. ห้องปฏิบัติการ Insumolab มันฝรั่งเดกซ์โทรสวุ้น มีจำหน่ายที่: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด บรรณาธิการ Panamericana S.A. อาร์เจนตินา.
5. Casas-Rincon G. เห็ดราทั่วไป 2537 ได้ 2 เอ็ด Universidad เซ็นทรัลเดอเวเนซูเอลาฉบับห้องสมุด เวเนซุเอลาการากัส.
6. Aceituno M. การประเมินคุณภาพทางจุลชีววิทยาในอายแชโดว์, ชนิดผงขนาดกะทัดรัดของห้องปฏิบัติการผลิตแห่งชาติ, ตามวิธีอ้างอิงของ Pharmacopeia Usp Reference 2005. วิทยานิพนธ์เพื่อให้มีคุณสมบัติเป็นชื่อของนักเคมีเภสัชกรรม. มหาวิทยาลัยซานคาร์ลอสเดอกัวเตมาลา.
7. Cuétara M. การประมวลผลตัวอย่างพื้นผิว นิตยสารมัยวิทยา Iberoamerican 2007 PP 1-12