Agar M.R.S Foundation การเตรียมและการใช้งาน



วุ้น M.R.S. เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อแบบคัดเลือกที่ใช้ในการแยกและนับแบคทีเรียกรดแลคติกโดยเฉพาะอย่างยิ่งสกุล Lactobacillus วุ้นนี้ถูกสร้างขึ้นในปี 1960 โดย Man, Rogosa และ Sharpe ที่มีชื่อเดียวกัน แต่เนื่องจากความซับซ้อนของมันจึงมีการใช้ตัวย่อของ M.R.S.

ประกอบด้วยโปรตีนเปปโตน, สารสกัดจากเนื้อสัตว์, สารสกัดจากยีสต์, กลูโคสโมโนเบรทซอร์บิทอน, ไดโพแทสเซียมฟอสเฟต, โซเดียมอะซิเตท, แอมโมเนียมซิเตรต, ซัลเฟตแมกนีเซียม, แมงกานีสซัลเฟตและวุ้น.

องค์ประกอบนี้ช่วยให้การพัฒนาที่เหมาะสมของแบคทีเรียกรดแลคติกจากตัวอย่างทางคลินิกเช่นอุจจาระ, การหลั่งในช่องคลอด, ตัวอย่างในช่องปากและน้ำนมแม่, รวมถึงอาหารนมและเนื้อสัตว์.

มันไม่ได้ใช้เป็นประจำในห้องปฏิบัติการทางคลินิกเพราะแบคทีเรียกรดแลคติคไม่ค่อยมีส่วนร่วมในกระบวนการทางพยาธิวิทยา อย่างไรก็ตามการใช้ M.R.S agar นั้นพบได้บ่อยในด้านจุลชีววิทยาอาหาร.

ในทางตรงกันข้ามสื่อนี้ถูกใช้โดยศูนย์วิจัยบางแห่งที่มีวัตถุประสงค์คือการศึกษาแบคทีเรียกรดแลคติก.

ดัชนี

  • 1 มูลนิธิ
  • 2 การเตรียมการ
  • 3 ใช้
    • 3.1 ลักษณะของอาณานิคม
    • 3.2 การแยกแบคทีเรียกรดแลคติก
    • 3.3 การนับแบคทีเรียกรดแลคติก
    • 3.4 ระดับการวิจัย
  • 4 การควบคุมคุณภาพ
  • 5 อ้างอิง

มูลนิธิ

มนุษย์วุ้น Rogosa และ Sharpe มีองค์ประกอบที่ค่อนข้างซับซ้อน โดยการแยกฟังก์ชั่นที่แต่ละส่วนประกอบเข้าด้วยกันจะสามารถอธิบายรากฐานได้.

โปรตีนเปปโตน, สารสกัดจากเนื้อสัตว์, สารสกัดจากยีสต์และกลูโคสเป็นสารอาหารที่ให้แหล่งของคาร์บอน, ไนโตรเจน, วิตามินและแร่ธาตุที่จำเป็นต่อการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย นอกจากนี้กลูโคสยังเป็นแหล่งพลังงานสากลที่ใช้ในสื่อวัฒนธรรมส่วนใหญ่.

ในทางตรงกันข้ามเพื่อสนับสนุนการเจริญเติบโตของแบคทีเรียกรดแลคติกจำเป็นต้องมีปัจจัยร่วมที่จำเป็นในการเผาผลาญ Lactobacillus และแบคทีเรียที่เกี่ยวข้อง สารประกอบเหล่านี้คือเกลือโซเดียมแมกนีเซียมและแมงกานีส.

ในทำนองเดียวกันซอร์บิทอนโมโนเลตหรือโพลีซอร์เบต 80 เป็นแหล่งของกรดไขมันที่สำคัญเมื่อถูกดูดซึมเป็นสารอาหาร.

นอกจากนี้ซอร์บิทอนโมโนเลตและแอมโมเนียมซิเตรตทำหน้าที่ยับยั้งการพัฒนาของพืชโดยเฉพาะแบคทีเรียแกรมลบซึ่งให้ลักษณะเฉพาะของวุ้นนี้.

ในที่สุด agar-agar เป็นสิ่งที่ให้ความมั่นคงที่มั่นคงกับสื่อ.

มีสายพันธุ์อื่นของ Man Rogosa Sharpe agar; หนึ่งในนั้นคือหนึ่งที่เสริมด้วย cysteine ​​(M.R.S.c) มีประโยชน์มากสำหรับการแยก bifidobacteria ในหมู่จุลินทรีย์อื่น ๆ ในทางตรงข้ามมีสื่อ MRS ที่เสริมด้วย neomycin, paromomycin, กรด nalidixic และลิเธียมคลอไรด์โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับการตรวจนับบิฟิโดแบคทีเรียในผลิตภัณฑ์นม.

การจัดเตรียม

มีน้ำหนักปานกลาง 68.25 กรัมของอาหารแห้งและละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร ให้ยืนเป็นเวลา 5 นาที หากต้องการละลายทั้งหมดให้นำแหล่งความร้อนมากวนบ่อย ๆ แล้วปล่อยให้เดือดประมาณ 1 ถึง 2 นาที ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที.

เมื่อปล่อยให้หม้อนึ่งความดันให้ยืนสองสามนาทีและกระจายยังคงร้อนในจานเพาะเชื้อที่ผ่านการฆ่าเชื้อ.

อนุญาตให้แข็งและกลับแผ่นสั่งใน plaquers และเก็บในตู้เย็นจนกว่าจะใช้ อนุญาตให้แผ่นที่จะใช้อุณหภูมิห้องก่อนที่จะใช้พวกเขา.

ค่า pH ของตัวกลางควรเป็น 6.4 ± 0.2 บ้านเชิงพาณิชย์บางแห่งแนะนำค่า pH ระหว่าง 5.5 ถึง 5.9.

สื่อที่ถูกคายน้ำคือสีเบจและสีอำพันที่เตรียมไว้.

ทั้งอาหารที่แห้งและแผ่นที่เตรียมไว้ควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2 ถึง 8 °ซ.

การใช้งาน

แผ่นเปลือกโลก M.R.S. พวกเขาสามารถหว่านบนพื้นผิว (อ่อนเพลียหรือไม้พายของ Drigalski) นอกจากนี้ยังสามารถหว่านลึก จานควรจะถูกบ่มที่ 37 ° C ใน microaerophilic (4% O2 และ 5-10% ของ บริษัท2) เป็นเวลา 24 ถึง 72 ชั่วโมง.

เลือกวิธีการเพาะตามวัตถุประสงค์ที่ติดตาม (แยกหรือนับ).

ลักษณะของอาณานิคม

อาณานิคมที่สันนิษฐานของแลคโตบาซิลลัสจะเติบโตเป็นสีขาวและมีลักษณะเป็นเมือกหรือครีมบนวุ้นนี้ จากนั้นพวกเขาจะต้องระบุ.

การแยกแบคทีเรียกรดแลคติก

เพื่อจุดประสงค์นี้ใช้การปลูกโดยพื้นผิว ตัวอย่างที่จะปลูกต้องมีขั้นตอนก่อนหน้า. 

ในกรณีของตัวอย่างน้ำนมแนะนำให้ปั่นเหวี่ยงตัวอย่าง 1 มิลลิลิตรที่ 14,000 rmp เป็นเวลา 10 นาทีเพื่อกำจัดชั้นไขมันออก 900 μlถูกทิ้งและในอีก 100 μlที่เหลือตะกอนจะถูกแขวนและเทลงบน M.R.S จากนั้นมันจะต้องกระจายอย่างสม่ำเสมอด้วยไม้พายของ Drigalski.

ในกรณีของตัวอย่างอุจจาระอุจจาระน้ำหนักหนึ่ง (1) กรัมและถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันในน้ำที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วซึ่งมีความเข้มข้นเท่ากับ 0.1 มล. ผสมกับการเจือจาง 1/10 จากนั้นทำการเจือจางต่อเนื่องจนกว่าจะได้รับการเจือจาง 10 ครั้งสุดท้าย-4.

ในที่สุดจะมีการเจือจาง 100 μlของ 10-2, 10-3 และ 10-4 และเจือจางแต่ละเมล็ดบน MRS วุ้นกระจายอย่างสม่ำเสมอด้วยไม้พาย Drigalski.

การนับจำนวนแบคทีเรียกรดแลคติก

ในกรณีนี้การเพาะจะกระทำโดยความลึก.

สำหรับตัวอย่างนมแม่ใช้เวลา 1 มิลลิลิตรและวางในหลอดพลาสติกทรงกรวยปลอดเชื้อ MRS agar จะถูกเพิ่มที่อุณหภูมิประมาณ 40 ° C ถึงปริมาตรสุดท้ายที่ 25 mL เพื่อให้ได้ส่วนผสมที่เป็นเนื้อเดียวกัน ต่อจากนั้นจะถูกเทลงในจานเลี้ยงเชื้อที่ผ่านการฆ่าเชื้อในลักษณะที่เป็นชุดและอนุญาตให้ยืนได้จนกว่าจะทำปฏิกิริยากับพอลิเมอร์.

เจือจางถูกสร้างขึ้นมาสำหรับตัวอย่างอุจจาระตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ใช้ 1 มล. ของการเจือจางแต่ละครั้งและวางในหลอดพลาสติกทรงกรวยปลอดเชื้อ Molten MRS agar ถูกเพิ่มเข้าไปในปริมาตร 25 มล.

ส่วนผสมของการเจือจางแต่ละครั้งจะถูกเทลงในจาน Petri ที่ผ่านการฆ่าเชื้ออย่างสม่ำเสมอ ในที่สุดก็ปล่อยให้มันยืนอยู่จนพอลิเมอร์.

ในระดับการวิจัย

ทุกวันการศึกษาแบคทีเรียกรดแลคติกจะน่าสนใจยิ่งขึ้น โดยเฉพาะอย่างยิ่งนักวิจัยพยายามที่จะรู้จักสายพันธุ์ใหม่และศักยภาพของพวกเขาในการเริ่มต้นการหมักเพื่อสร้างมาตรฐานในการผลิตผลิตภัณฑ์ที่ทำจากนม.

ในแง่นี้ Alvarado และคณะ (2007) ใช้วุ้น M.R.S. เพื่อทำการศึกษาที่พวกเขาแยกระบุและจำแนกแบคทีเรียกรดแลคติกที่มีอยู่ในชีสรมควันของช่างฝีมือ.

ในชีสพวกเขาพบว่ามีแบคทีเรียของ Lactococcus และ Lactobacillus จำพวกและสรุปได้ว่าการผสมของสายพันธุ์ที่แยกได้นั้นเหมาะสมที่จะเป็นสายพันธุ์เริ่มต้นในการผลิตชีสจากนมพาสเจอร์ไรส์.

ในอีกทางหนึ่งSánchez et al. (2017) ใช้ M.R.S agar เพื่อตรวจสอบการปรากฏตัวของแบคทีเรียกรดแลคติกในทางเดินอาหารของลูกสุกรเพื่อใช้เป็นโปรไบโอติกดั้งเดิมที่ช่วยเพิ่มผลผลิตของลูกสุกรที่มีสุขภาพดี.

ด้วยสื่อนี้พวกเขาสามารถแยกสี่ชนิด: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae และ Pediococcus pentosaceus.

ในทำนองเดียวกันBáez et al. (2019) ใช้งาน M.R.S. agar เพื่อประเมินแบคทีเรียกรดแลคติก (BAL) และบิฟิโดแบคทีเรียที่มีศักยภาพโปรไบโอติกในน้ำนมแม่และอุจจาระของทารก.

พวกเขาสามารถแยก 11 BAL และ 3 ได้ Bifidobacteria sp ในน้ำนมแม่และ 8 BAL และ 2 Bifidobacteria sp. ในอุจจาระ ทั้งหมดตรงตามพารามิเตอร์บางอย่างที่รับรองว่าเป็นแบคทีเรียด้วยกิจกรรมโปรไบโอติก.

ผู้เขียนสรุปว่าทั้งนมแม่และอุจจาระของทารกที่กินนมแม่อย่างเดียวนั้นทำหน้าที่เป็นแหล่งธรรมชาติของแบคทีเรียโปรไบโอติก.

การควบคุมคุณภาพ

เพื่อประเมินคุณภาพของ M.R.S สายพันธุ์ควบคุมสามารถใช้เช่น:

แลคโตบาซิลลัสเฟอรัม ATCC 9338, แลคโตบาซิลลัส Casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, แลคโตบาซิลลัส plantarum MKTA 8014, แลคโตบาซิลลัสแลคทิส MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli และ Bacillus cereus.

ผลลัพธ์ที่คาดหวังคือการเติบโตที่น่าพอใจสำหรับแบคทีเรีย 6 ตัวแรกในขณะที่ อี. โคไล และ บาซิลลัสซีเรียล จะต้องยับยั้งอย่างครบถ้วน.

การอ้างอิง

  1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. การแยก, การจำแนกและการจำแนกลักษณะของแบคทีเรียกรดแลคติกจากแอนเดียนทำด้วยมือรมควันเวเนซุเอลาชีส มันใช้เป็นการเพาะปลูกเริ่มต้น ประสิทธิภาพ (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308 มีจำหน่ายที่: scielo.org.
  2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro การแยกแบคทีเรียกรดแลคติกจากทางเดินอาหารของลูกสุกร การสอบสวนรายได้ สัตว์แพทย์ เปรู 2017 28 (3): 730-736 มีจำหน่ายที่: scielo.org.
  3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. การประเมินผลของแบคทีเรียกรดแลคติกและ Bifidobacteria ที่มีศักยภาพโปรไบโอติกในน้ำนมแม่และอุจจาระของทารกในเขตเทศบาลเมือง Acevedo, Miranda 2017 bioassays มหาวิทยาลัยคาราบาโบ, เวเนซุเอลา.
  4. ห้องปฏิบัติการอังกฤษ M.R.S วุ้น 2558 มีจำหน่ายที่: britanialab.com
  5. ผู้มีส่วนร่วมใน Wikipedia MRS วุ้น Wikipedia, สารานุกรมเสรี UTC 10, 2018, 19:44 UTC สามารถใช้ได้ที่: wikipedia.org เข้าถึง 17 กุมภาพันธ์ 2019.
  6. Roy D. Media สำหรับการแยกและการแจงนับไบฟิโดแบคทีเรียในผลิตภัณฑ์นม. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.