การเตรียมและการใช้งาน Agar LIA (Lysine Iron)



LIA agar (Lysine Iron) เป็นการทดสอบทางชีวเคมีที่ใช้ในการระบุแบคทีเรียของตระกูล Enterobacteriaceae สื่อนี้สร้างโดย Edwards และ Fife ตามสูตรของ Falkow.

แต่เดิมการทดสอบนี้เป็นน้ำซุปที่มีเพปโทน, สารสกัดจากยีสต์, กลูโคส, L-lysine, สีม่วง bromocresol และน้ำกลั่น Edwards และ Fife ได้เพิ่ม agar-agar, ferric ammonium citrate และ sodium thiosulfate.

การทดสอบโดยทั่วไปประกอบด้วยการแสดงให้เห็นว่าเอนไซม์ lysine decarboxylase สามารถทำปฏิกิริยากับกลุ่ม carboxyl ของกรดอะมิโน L-lysine การปนเปื้อนของกรดอะมิโนยังสามารถเกิดขึ้นได้เนื่องจากมีเอนไซม์ lysine deaminase.

นอกจากนี้องค์ประกอบของสื่อช่วยให้สามารถแสดงความสามารถของแบคทีเรียบางชนิดในการผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์ ในที่สุดก็เป็นไปได้ที่จะสังเกตการสร้างหรือไม่ของก๊าซที่อยู่ตรงกลาง.

ดัชนี

  • 1 มูลนิธิ
    • 1.1 Peptones และสารสกัดจากยีสต์
    • 1.2 กลูโคส
    • 1.3 L-lysine
    • 1.4 ตัวบ่งชี้ค่าความเป็นกรด (สีม่วง bromocresol)
    • 1.5 แอมโมเนียมเฟอริกซิเตรตและโซเดียมไธโอซัลเฟต
  • 2 การตีความการทดสอบ
    • 2.1 Decarboxylation ของไลซีน
    • 2.2 การปนเปื้อนไลซีน
    • 2.3 การผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์ (H2S)
  • 3 บันทึกผลลัพธ์
  • 4 การเตรียมการ
  • 5 ใช้
  • 6 อ้างอิง

มูลนิธิ

สารสกัดจาก Peptones และยีสต์

เช่นเดียวกับสื่อการเพาะเลี้ยงส่วนใหญ่ไลซีนไลซีนประกอบด้วยส่วนประกอบที่เป็นแหล่งของสารอาหารที่จำเป็นต่อการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย ส่วนประกอบเหล่านี้แสดงด้วย peptones และสารสกัดจากยีสต์.

กลูโคส

นอกจากนี้วุ้นนี้ยังประกอบด้วยกลูโคสที่หมักได้ เป็นที่ทราบกันดีว่าแบคทีเรียทั้งหมดในตระกูล Enterobacteriaceae หมักกลูโคส.

ขั้นตอนนี้มีความสำคัญเนื่องจากจะต้องรับผิดชอบในการทำให้กรดเป็นสื่อซึ่งเป็นเงื่อนไขที่จำเป็นสำหรับเอนไซม์ lysine decarboxylase หากมีการทำปฏิกิริยากับสารตั้งต้น.

ในแบคทีเรียบางชนิดการผลิตก๊าซเนื่องจากการหมักกลูโคสสามารถสังเกตได้.

ก๊าซเป็นหลักฐานเมื่อมีการกระจัดของวุ้นในหลอดออกจากพื้นที่ว่างด้านล่างของหลอดหรือโดยการแตกกลางในสองส่วนหรือมากกว่า.

L-ไลซีน

เมื่อไลซีนถูกกำจัดออกแล้วจะมี diamine (cadaverine) และคาร์บอนไดออกไซด์เกิดขึ้น.

Decarboxylation เกิดขึ้นต่อหน้า coenzyme pyridoxal phosphate ปฏิกิริยานี้ไม่สามารถย้อนกลับได้.

ตัวบ่งชี้ PH (สีม่วง bromocresol)

การเปลี่ยนแปลงทั้งหมดของค่า pH ที่เกิดขึ้นในตัวกลางโดยปฏิกิริยาที่แตกต่างกันจะถูกตรวจพบโดยตัวบ่งชี้ค่า pH bromocresol สีม่วง.

ในแง่นี้เมื่อมีความเป็นกรดสื่อจะเปลี่ยนเป็นสีเหลืองและเมื่อมีความเป็นด่างสื่อจะกลับไปเป็นสีม่วงหรือสีม่วงดั้งเดิม.

เมื่อการปนเปื้อนของไลซีนเกิดขึ้นโดยการปรากฏตัวของเอนไซม์ไลซีน deaminase สีแดงบนพื้นผิวแบบทั่วไปในจำพวกโพรทูสโพรทูเซียและบางชนิดของ Morganella.

นี่คือความจริงที่ว่าในระหว่างกระบวนการของการเกิดการปนเปื้อนของกรด alpha-keto-carbonic เกิดขึ้นซึ่งทำปฏิกิริยากับแอมโมเนียมซิเตรตในที่ที่มีออกซิเจน.

แอมโมเนียมเฟอริกซิเตรตและโซเดียมไธโอซัลเฟต

ในทางตรงกันข้ามแบคทีเรียที่ผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์จะเห็นได้จากการมีโซเดียมไธโอซัลเฟต (แหล่งที่มาของกำมะถัน) และเฟอริกแอมโมเนียมซิเตรตซึ่งเป็นผู้พัฒนาของ H2S.

แบคทีเรียที่มีเอนไซม์ไธโอซัลเฟตรีดัลเทสมีความสามารถในการทำหน้าที่โดยการลดโซเดียมไธโอซัลเฟตในปัจจุบันก่อตัวซัลไฟต์และไฮโดรเจนซัลไฟด์ (H2S).

ด้านหลังเป็นก๊าซที่ไม่มีสี แต่เมื่อมันทำปฏิกิริยากับเกลือของเหล็กจะเกิดเป็นโลหะเฟอร์รัสซัลไฟด์ซึ่งเป็นสารประกอบที่ไม่ละลายน้ำ (ตกตะกอนสีดำ).

อย่างไรก็ตามความจุของการก่อ H2S กับสื่อนี้ไม่น่าเชื่อถือมากเพราะแบคทีเรียไลซีน decarboxylase เชิงลบบางอย่างสามารถผลิตเอช2S จะไม่ก่อให้เกิดการตกตะกอนสีดำเพราะความเป็นกรดของตัวกลางรบกวน ดังนั้นจึงแนะนำให้ตรวจสอบด้วยวิธีการอื่นที่มีธาตุเหล็ก.

การตีความการทดสอบ

Decarboxylation ของไลซีน

ควรอ่านหลอดหลังจากสิ้นสุด 24 ชั่วโมงของการบ่มมิฉะนั้นอาจมีความเสี่ยงในการตีความปฏิกิริยาที่ผิดพลาดรายงานการลบ.

ต้องจำไว้ว่าปฏิกิริยาแรกที่เกิดขึ้นจะเป็นการหมักกลูโคสดังนั้นท่อทั้งหมดหลังจาก 10 ถึง 12 ชั่วโมงจะเปลี่ยนเป็นสีเหลือง.

หากในตอนท้ายของระยะฟักตัว (24 ชั่วโมง) พื้นหลังสีเหลืองที่มีพื้นผิวสีม่วงหรือสีม่วงถูกตรวจพบปฏิกิริยาจะเป็นลบ สีม่วงของพื้นผิวสอดคล้องกับด่างของสื่อโดยการใช้ peptones.

ปฏิกิริยาเชิงบวกคือปฏิกิริยาที่ด้านล่างและพื้นผิวของหลอดเป็นสีม่วงอย่างสมบูรณ์นั่นคือมันจะกลับไปเป็นสีเดิม.

ดังนั้นใครเป็นผู้กำหนดความเป็นบวกของการทดสอบคือฐานหรือด้านล่างของสื่อ หากคุณมีข้อสงสัยเกี่ยวกับสีคุณสามารถเปรียบเทียบกับหลอด LIA ที่ไม่มีการฉีดยา.

การปนเปื้อนไลซีน

หลอดที่แสดงการเสื่อมของไลซีนจะมีพื้นผิวสีน้ำตาลแดงและพื้นหลังสีเหลือง (กรด) หรือท่อสีน้ำตาลแดงทั้งหมด.

ปฏิกิริยานี้ถูกตีความว่าเป็นผลลบต่อ decarboxylation ของไลซีน แต่เป็นผลบวกต่อการปนเปื้อนของไลซีน.

ปฏิกิริยานี้ถูกกำหนดและตีความในมุม.

การผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์ (H2S)

ปฏิกิริยาเชิงบวกจะสังเกตได้จากการปรากฏตัวของตะกอนสีดำในทั้งหมดหรือบางส่วนของสื่อ โดยทั่วไประหว่างขอบเขตแนวเอียงและฐาน.

หากการตกตะกอนเกิดขึ้นทั่วทั้งท่อจะไม่แสดงปฏิกิริยาอื่น ๆ ที่เกิดขึ้นในตัวกลาง.

บันทึกผลลัพธ์

เมื่อตีความการทดสอบผลลัพธ์จะถูกบันทึกดังนี้:

ก่อนอ่านมุมแล้วด้านล่างหรือทาโก้จากนั้นผลิต H2S และในที่สุดการผลิตก๊าซ.

ตัวอย่าง: K / A + (-) หมายความว่า:

  • K: กรอบอัลคาไลน์ (สีม่วง)
  • ตอบ: พื้นหลังของกรด (สีเหลือง) นั่นคือปฏิกิริยาดีคาร์บอกซิเลชันในเชิงลบและการปนเปื้อนในทางลบ.
  • +: การผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์
  • (-): ไม่มีก๊าซ.

การจัดเตรียม

มีน้ำหนัก 35 กรัมของธาตุเหล็กแห้งไลซีนอะการ์และละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร.

ตั้งไฟจนวุ้นละลายหมดแล้วจึงต้มประมาณ 1 นาทีกวนบ่อย ๆ แจกจ่าย 4 มิลลิลิตรของสื่อในหลอดทดลอง 13/100 พร้อมฝาปิดฝ้าย.

ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที ลบออกจากหม้อนึ่งความดันและอนุญาตให้พักผ่อนในลักษณะเอียงในลักษณะที่มีฐานที่ลึกและยกนูน.

เก็บในตู้เย็น 2-8 องศาเซลเซียส อนุญาตให้มีอารมณ์ก่อนปลูกสายพันธุ์แบคทีเรีย.

สีของสื่อที่ถูกคายน้ำคือสีเบจและสีกลางที่เตรียมไว้คือสีม่วงแดง.

ค่า pH สุดท้ายของสื่อที่เตรียมไว้คือ 6.7 ± 0.2

สื่อจะเปลี่ยนเป็นสีเหลืองโดยมีค่า pH เท่ากับหรือน้อยกว่า 5.2 และสีม่วงที่ pH 6.5 ขึ้นไป.

การใช้งาน

การทดสอบนี้ร่วมกับการทดสอบทางชีวเคมีอื่น ๆ นั้นใช้เพื่อระบุเชื้อแบคทีเรียจากตระกูล Enterobacteriaceae.

สื่อถูกหว่านด้วยห่วงหรือเข็มตรงมีการเจาะหนึ่งหรือสองครั้งที่ด้านล่างของหลอดจากนั้นพื้นผิวของสื่อจะถูกซิกแซก.

มันฟักเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่ 35-37 ° C ในแอโรบิก หากจำเป็นต้องมีการฟักตัวนาน 24 ชั่วโมง.

มันมีประโยชน์เป็นหลักในการแยกความแตกต่างของสายพันธุ์แลคโตส Citrobacter ลบจาก Salmonellas sp.

การอ้างอิง

  1. Mac Faddin J. (2003) การทดสอบทางชีวเคมีสำหรับการจำแนกแบคทีเรียที่มีความสำคัญทางคลินิก วันที่ 3 Panamericana บรรณาธิการ บัวโนสไอเรส อาร์เจนตินา.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด บรรณาธิการ Panamericana S.A. อาร์เจนตินา.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา วันที่ 5 บรรณาธิการ Panamericana S.A. อาร์เจนตินา.
  4. ห้องปฏิบัติการ Britania ไลซีนเหล็กวุ้น 2558 มีจำหน่ายที่: britanialab.com
  5. BD Laboratories BBL Lysine Iron Agar Slants 2550 มีจำหน่ายที่: bd.com
  6. Valtek Laboratories กลางสหรัฐอเมริกา 2552 มีจำหน่ายที่: andinamedica.com