หุ้น:
มูลนิธิ Agar Hektoen การเตรียมและการใช้งาน
Hektoen agar หรือ enteric Hektoen agar เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อที่คัดเลือกและแตกต่างกัน มันถูกสร้างขึ้นที่สถาบัน Hektoen โดย King และ Metzger เพื่อแยกแบคทีเรีย enteropathogenic ของจำพวก Shigella และ Salmonella.
สื่อประกอบด้วยโปรตีนเปปโตน, สารสกัดจากยีสต์, เกลือน้ำดี, แลคโตส, ซูโครส, ซาลิซิน, โซเดียมไธโอซัลเฟต, โซเดียมคลอไรด์, โซเดียมคลอไรด์, ซิเตรตเหล็ก, แอมโมเนียมซิเตรท, bromothymol สีฟ้า สูตรนี้ช่วยแยกความแตกต่างของจำพวกชิเกลล่าและซัลโมเนลล่าจากแบคทีเรียที่เหลือซึ่งสามารถเจริญเติบโตได้ในอาหารเลี้ยงเชื้อนี้.
แม้ว่าจะมีวิธีการอื่นที่มีฟังก์ชั่นเดียวกับ Hektoen agar แต่สิ่งนี้นำเสนอความได้เปรียบที่มากกว่าเมื่อเทียบกับวิธีอื่นโดยเฉพาะเมื่อคุณต้องการกู้คืนสายพันธุ์ชิเกลล่า.
สายพันธุ์ของทั้งสองจำพวกนี้ก่อให้เกิดปัญหาระบบทางเดินอาหารในมนุษย์อย่างรุนแรงเนื่องจากการบริโภคอาหารที่มีการปนเปื้อน ดังนั้นการถ่ายทอดจึงเป็นอุจจาระ นั่นคือเหตุผลที่การใช้ Hektoen agar ถูกระบุไว้เป็นหลักในการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของอุจจาระและตัวอย่างอาหาร.
ดัชนี
- 1 มูลนิธิ
- 2 การเตรียมการ
- 3 ใช้
- 4 การควบคุมคุณภาพ
- 5 ข้อ จำกัด
- 6 อ้างอิง
มูลนิธิ
Hektoen agar มี peptones และสารสกัดจากยีสต์เป็นแหล่งของสารอาหารให้องค์ประกอบที่จำเป็นสำหรับการพัฒนาของจุลินทรีย์.
อย่างไรก็ตามมันยังมีเกลือน้ำดีที่ทำหน้าที่ยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียบางชนิดโดยเฉพาะแกรมบวกและแกรมลบบางตัว มันเป็นเพราะเหตุนี้จึงถือว่าเป็นสื่อที่เลือก.
ในทางตรงกันข้าม Hektoen agar เป็นตัวกลางที่ต่างกัน คุณสมบัตินี้ได้รับการยอมรับจากการมีคาร์โบไฮเดรตที่สามารถหมักได้เช่นแลคโตส, แซคคาร่าและซาลิซินพร้อมกับระบบตัวบ่งชี้ค่าความเป็นกรดซึ่งแสดงโดย bromothymol blue และ fuchsin ของกรด.
แบคทีเรียทุกชนิดที่มีความสามารถในการเจริญเติบโตในอาหารเลี้ยงเชื้อที่ไม่ได้อยู่ในสกุลซัลโมเนลล่าและชิเกลล่าจะพัฒนาแซลมอนหรือโคโลนีสีส้มยกเว้นโปรเตอุสประเภท นี่คือสาเหตุที่การหมักของคาร์โบไฮเดรตหนึ่งหรือหลายแห่งที่มีอยู่ซึ่งทำให้กรดเป็นสื่อกลางซึ่งทำให้ตัวบ่งชี้ค่า pH เปลี่ยน.
ในส่วนของมันชิกัลล่าและซัลโมเนลล่าไม่สามารถหมักกับคาร์โบไฮเดรตใด ๆ ที่มีอยู่โดยใช้เพพโทนาเป็นแหล่งพลังงานซึ่งทำให้สภาพแวดล้อมเป็นด่างและทำให้อาณานิคมของมันมีสีเขียวแกมน้ำเงิน.
นอกจากนี้ในสื่อนี้ยังสามารถจำแนกแบคทีเรียที่มีความสามารถในการสร้างไฮโดรเจนซัลไฟด์ (ก๊าซไม่มีสี) โซเดียมไธโอซัลเฟตทำหน้าที่เป็นแหล่งของกำมะถันในขณะที่ธาตุเหล็กซิเตรตเป็นสารที่เปิดเผย สารประกอบทั้งสองทำให้เกิดการตกตะกอนสีดำของเหล็กซัลไฟด์ซึ่งเป็นหลักฐานการเกิดปฏิกิริยา.
การตกตะกอนสีดำในใจกลางของอาณานิคมที่มีรัศมีโปร่งใสรอบ ๆ ให้ลักษณะตาปลา ลักษณะนี้แสดงให้เห็นการปรากฏตัวของเชื้อซัลโมเนลล่า.
ในที่สุดโซเดียมคลอไรด์จะรักษาความสมดุลของออสโมติกและวุ้นให้ความคงตัวแก่ตัวกลาง.
การจัดเตรียม
น้ำหนัก 76 กรัมของตัวกลางที่ถูกทำให้แห้งและละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร เขย่าส่วนผสมแรง ๆ แล้วปล่อยให้มันพักเป็นเวลา 10 ถึง 15 นาที มันสามารถทำให้ร้อนและต้มทำให้เคลื่อนไหวแบบหมุนได้จนกว่าจะละลายหมด สื่อนี้ไม่ได้ autoclaved.
เมื่อสื่อถึงอุณหภูมิประมาณ 45 ° C ปริมาตร 20 มิลลิลิตรจะถูกเทลงในจานเพาะเชื้อที่ผ่านการฆ่าเชื้อโดยตรง.
วุ้นได้รับอนุญาตให้แข็งตัว ในเวลานั้นพวกเขาก็พร้อมใช้งาน ขอแนะนำให้ใช้พวกเขาทันที หากไม่สามารถทำได้ควรเก็บไว้ในตู้เย็นจนกว่าจะนำมาใช้.
ควรนำแผ่นออกจากตู้เย็นก่อนที่จะนำไปปลูกเพื่อให้ได้อุณหภูมิห้อง.
ค่าความเป็นกรด - ด่างของสื่อควรอยู่ที่ 7.5 ± 0.2 สีของสื่อที่ถูกคายน้ำคือสีม่วงและเตรียมเป็นสีเขียวอมน้ำตาล.
ใช้
แนะนำให้ใช้ Hektoen agar สำหรับการค้นหาแบคทีเรียในสกุล Shigella และ Salmonella ในอุจจาระและตัวอย่างอาหาร.
ความเป็นไปได้ของการแยกแบคทีเรียเหล่านี้จะเพิ่มขึ้นอย่างมากหากตัวอย่างได้รับการเสริมด้วยน้ำซุปพิเศษเช่นเซเลไนท์น้ำซุปซีสตีนซีสตีนน้ำซุปเตตราเธโอเนตและอื่น ๆ.
หัวเชื้อต้องแข็งแรงและการเพาะจะกระทำโดยการปอก เพลตถูกบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมงในแอโรบิก.
แนะนำให้ใช้ระยะฟักตัวเป็นเวลา 48 ชั่วโมงเนื่องจากลักษณะของอาณานิคมนั้นชัดเจนสำหรับการตีความและความแตกต่างในเวลานี้.
การควบคุมคุณภาพ
ในการควบคุมคุณภาพของสื่อนี้จะใช้สายพันธุ์แบคทีเรียที่ผ่านการรับรองเช่น: Salmonella typhimurium ATCC 14028, เชื้อ Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 และ ชิเกลล่า sonnei ATCC 25931.
ผลลัพธ์ที่คาดหวังมีดังต่อไปนี้: Salmonella typhimurium และ เชื้อ Salmonella enteritidis พวกเขาจะต้องพัฒนาอาณานิคมสีเขียวสีน้ำเงินโดยมีหรือไม่มีจุดศูนย์กลางสีดำ ในขณะที่สายพันธุ์ชิเกลล่านั้นจะเติบโตเป็นอาณานิคมสีเขียวแกมน้ำเงิน.
คุณยังสามารถรวมสายพันธุ์ของ Escherichia coli ATCC 29212, โพรทูส mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 และ เชื้อ Staphylococcus aureus ATCC 25923.
ในกรณีเหล่านี้คุณสมบัติที่สังเกตได้มีดังต่อไปนี้: อี. โคไล และ เค pneumoniae ในสื่อนี้พวกเขาจะพัฒนาอาณานิคมของแซลมอนถึงส้มด้วยการตกตะกอนของสีเดียวกันรอบตัวพวกเขา ในขณะเดียวกันโพรทูสจะพัฒนาอาณานิคมสีเขียวสีน้ำเงินโดยมีหรือไม่มีจุดศูนย์กลางสีดำ.
ในขณะที่ S. aureus และ E. faecalis ควรยับยั้งบางครั้ง E. faecalis จัดการเพื่อเติบโตเป็นอาณานิคมสีเหลืองเล็กมาก.
ในทางตรงกันข้ามเนื่องจากสื่อนี้ไม่ได้ผ่านการฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันมันเป็นสิ่งสำคัญในการประเมินความเป็นหมันของสื่อ ดังนั้นแต่ละชุดที่เตรียมควรถูกบ่มหนึ่งถึงสองแผ่นโดยไม่ต้องฉีดวัคซีนที่ 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมงในแอโรบิบ.
เห็นได้ชัดว่าคาดว่าจะไม่มีการเติบโตใด ๆ บนจาน.
ข้อ จำกัด
-โปรเตอุสสายพันธุ์สามารถพัฒนาในสภาพแวดล้อมนี้และลักษณะของอาณานิคมของพวกเขาสามารถสับสนกับสายพันธุ์ Salmonella หรือ Shigella ด้วยเหตุผลนี้อาณานิคมใด ๆ ที่น่าสงสัยจะต้องได้รับการยืนยันด้วยการทดสอบทางชีวเคมี.
-มันเป็นสิ่งจำเป็นที่จะมาพร้อมกับการใช้งานของสื่อนี้กับ agars เลือกน้อยอื่น ๆ เพราะหากพบว่าเชื้อจุลินทรีย์ที่พบในระดับความเข้มข้นต่ำอาจไม่พัฒนาในสื่อนี้.
-อย่าร้อนมากเกินไปในระหว่างการเตรียมเนื่องจากความร้อนมากเกินไปจะเปลี่ยนองค์ประกอบของสื่อ.
-การหมักแลคโตสที่ผิดปกติอาจไม่ปรากฏให้เห็น.
การอ้างอิง
- ผู้มีส่วนร่วมใน Wikipedia Hektoen วุ้นลำไส้ Wikipedia, สารานุกรมเสรี 13 มีนาคม 2019, 23:38 UTC ได้ที่: .wikipedia.org / เข้าถึง 16 มีนาคม 2019.
- BD Laboratories BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar) 2013 จำหน่ายได้ที่: bd.com
- ห้องปฏิบัติการ Britania Hektoen Enteric Agar 2558 มีจำหน่ายที่: britanialab.com
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. วุ้น Hektoen วุ้น มีจำหน่ายที่: f-soria.es
- คู่มือ Difco & BBL, Hektoen Enteric Agar ฉบับที่ 2 มีอยู่ใน: bd.com/europe