หุ้น:
Agar Endo Foundation การเตรียมและการใช้งาน
Endo agar หรือ Medium Endo เป็นสื่อกลางทางวัฒนธรรมที่แตกต่างและมีระดับหัวกะทิที่แน่นอน สูตรดั้งเดิมถูกสร้างขึ้นโดย Endo ในปี 1904 เพื่อแยกความแตกต่างของการหมักแลคโตสจากแบคทีเรียที่ไม่ผ่านการหมัก ในตอนแรกมันถูกออกแบบมาเพื่อแยก Salmonella typhi, แต่ต่อมาวัตถุประสงค์ของสื่อก็หันไปค้นหาโคลิฟอร์ม.
หลักการของ Endo agar ได้รับการปรับปรุง แต่สูตรของมันได้รับการเปลี่ยนแปลงมากมายในช่วงหลายปีที่ผ่านมา ปัจจุบันสื่อนี้ประกอบด้วยเนื้อเยื่อสัตว์เปปไทด์ที่ย่อยได้แลคโตสไดโตโพแทสเซียมไฮโดรเจนฟอสเฟตโซเดียมซัลไฟต์ฟูชซินพื้นฐานและวุ้น.
การใช้สื่อหลักได้รับการเชื่อมโยงกับการแยกและความแตกต่างของแบคทีเรียแกรมลบแกรมที่เป็นของครอบครัว Enterobacteriaceae และครอบครัวใกล้เคียง.
เป็นเวลานานที่ใช้ในการตรวจจับโคลิฟอร์มในน้ำตัวอย่างนมและอาหาร แต่ทุกวันนี้การใช้สื่อนี้ถูกแทนที่ด้วยฟังก์ชันอื่นที่คล้ายคลึงกัน อย่างไรก็ตามห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยาบางแห่งใช้วุ้นนี้เพื่อแยก Enterobacteriaceae จากตัวอย่างที่มาทางคลินิก.
ดัชนี
- 1 มูลนิธิ
- 2 การเตรียมการ
- 2.1 Endo agar
- 2.2 Variant of agar m-Endo
- 3 ใช้
- 4 การควบคุมคุณภาพ
- 5 ข้อ จำกัด
- 6 อ้างอิง
มูลนิธิ
Endo agar มี peptones ที่ทำหน้าที่เป็นแหล่งของกรดอะมิโนไนโตรเจนคาร์บอนและพลังงานซึ่งจำเป็นสำหรับการเติบโตของจุลินทรีย์ที่ไม่ต้องการมาก.
ในอีกทางหนึ่งลักษณะที่เลือกได้เล็กน้อยของวุ้นนั้นได้มาจากการเติมโซเดียมซัลไฟต์และฟูชชินพื้นฐาน ส่วนประกอบทั้งสองส่วนบางส่วนหรือทั้งหมดยับยั้งการพัฒนาของแบคทีเรียแกรมบวกส่วนใหญ่.
ตัวละครที่แตกต่างจะได้รับจากการปรากฏตัวของคาร์โบไฮเดรตที่หมักได้ซึ่งในกรณีนี้คือแลคโตสและฟูชชินพื้นฐานซึ่งยังทำหน้าที่เป็นตัวบ่งชี้ของค่า pH.
แบคทีเรียแกรมลบที่เจริญเติบโตบนวุ้นนี้และสามารถหมักแลคโตสจะกลายเป็นอาณานิคมสีชมพูที่แข็งแกร่ง เป็น pathognomonic ของ Escherichia coli การก่อตัวของอาณานิคมสีแดงเข้มที่มีสีเขียวเป็นประกายโลหะสีเขียว นี่คือสาเหตุที่การผลิตสูงของกรดจากการหมักคาร์โบไฮเดรต.
ควรสังเกตว่าสื่อที่อยู่รอบ ๆ อาณานิคมนั้นจะเปลี่ยนเป็นสีชมพูเข้ม ในขณะที่แบคทีเรียที่ไม่ผ่านการหมักแบบแกรมลบของแลคโตสจะกลายเป็นอาณานิคมสีชมพูอ่อนที่คล้ายกับขนาดกลางหรือไม่มีสี.
โพแทสเซียมไฮโดรเจนฟอสเฟตทำให้สมดุลค่า pH ของตัวกลางและวุ้นเป็นองค์ประกอบที่ให้ความมั่นคงที่มั่นคง.
การจัดเตรียม
Endo Agar
น้ำหนัก 41.5 กรัมของตัวกลางที่ถูกทำให้แห้งและละลายในน้ำกลั่น 1 ลิตร ความร้อนผสมโดยตื่นเต้นบ่อย ๆ จนกว่าจะมีการสลายตัวของสื่อทั้งหมด ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ 121 ° C ที่ความดัน 15 ปอนด์เป็นเวลา 15 นาที.
เมื่อนำออกจากหม้อนึ่งความดันอนุญาตให้เย็นที่อุณหภูมิประมาณ 45-50 ° C เขย่าส่วนผสมเพื่อทำให้เป็นเนื้อเดียวกันก่อนเสิร์ฟ เท 20 มล. ลงในจานเพาะเชื้อที่ปลอดเชื้อ.
ปล่อยให้แผ่นแข็งตัวกลับด้านและเก็บในกล่องหรือห่อด้วยกระดาษสีเข้มก่อนเก็บในตู้เย็น มันสำคัญมากที่จะต้องปกป้องสื่อที่เตรียมไว้จากแสงโดยตรง แนวทางปฏิบัติที่แนะนำคือการเตรียมจำนวนเงินที่แน่นอนที่จะต้องใช้.
หากเก็บไว้ในตู้เย็นควรใช้แผ่นความร้อนก่อนใช้งาน.
ค่า pH ของสื่อควรอยู่ระหว่าง 7.2 ถึง 7.6 และสีของสื่อที่เตรียมไว้นั้นเป็นสีชมพูอ่อน.
Variant agar m-Endo
มีอีกรุ่นหนึ่งของ Endo agar (m-Endo) ที่ตามสูตรของ McCarthy, Delaney และ Grasso ซึ่งมีสารประกอบมากกว่าและแตกต่างกันไปตามวิธีการเตรียม.
ตัวแปรนี้ประกอบด้วย: แลคโตส, triptose, การย่อยอาหารของเคซีน, การย่อยอาหารของเนื้อเยื่อของสัตว์, โซเดียมคลอไรด์, โพแทสเซียมฟอสเฟต dibasic, โซเดียมซัลไฟต์, สารสกัดจากยีสต์, โพแทสเซียมฟอสเฟต monobasic, fuchsin พื้นฐาน, โซเดียมซัลเฟต ของโซเดียมและวุ้น.
ในกรณีนี้เรามีน้ำหนัก 51 กรัมของอาหารที่ถูกอบแห้งและแขวนไว้ในน้ำกลั่น 1 ลิตรที่มีเอทานอล 20 มิลลิลิตร.
ความร้อนเล็กน้อยในขณะที่กวนจนสื่อละลายอย่างสมบูรณ์ อย่าร้อนมากเกินไปและไม่ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดัน เมื่อส่วนผสมเป็นเนื้อเดียวกันให้บริการในจานเลี้ยงเชื้อที่ปลอดเชื้อและอนุญาตให้แข็งตัว.
ใช้
ในบางประเทศยังคงใช้สำหรับการนับจำนวนและโคลิฟอร์มทั้งหมดในตัวอย่างน้ำและอาหารโดยเฉพาะอย่างยิ่งการมีอยู่ของ Escherichia coli เป็นตัวบ่งชี้หลักของการปนเปื้อนอุจจาระ.
M-Endo agar ได้รับการแนะนำโดย American Public Health Association (APHA) สำหรับการตรวจสอบและควบคุมโปรแกรมการฆ่าเชื้อโรคและบำบัดน้ำเสียรวมถึงการประเมินคุณภาพน้ำดื่ม.
วิธีที่นิยมใช้มากที่สุดคือการกรองด้วยเมมเบรนหลังจากเพิ่มปริมาณตัวอย่างด้วย Lauryl sulphate broth เป็นเวลา 2 ถึง 4 ชั่วโมง.
นอกจากนี้ยังสามารถใช้เป็นตัวแทนของ EMB วุ้นในการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของอาหารและน้ำด้วยเทคนิคจำนวนที่น่าจะเป็นไปได้มากที่สุด (NMP) โดยเฉพาะในขั้นตอนการยืนยันที่สมบูรณ์เพื่อยืนยันการมีอยู่ของ อี. โคไล จากน้ำซุป EC ที่ขุ่น.
การควบคุมคุณภาพ
ในการประเมินคุณภาพของชุด Endo agar ที่เตรียมไว้สายพันธุ์ควบคุมที่รู้จักหรือผ่านการรับรองจะถูกหว่านลงไป.
ในสายพันธุ์ที่สามารถใช้สำหรับวัตถุประสงค์นี้คือ: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, โพรทูส mirabilis ATCC 14153 และ Enterococcus faecalis ATCC 11700.
สายพันธุ์ถูกหว่านโดยความอ่อนล้าและบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมงในแอโรบิก.
ผลลัพธ์ที่คาดหวังคือ:
- ไปยัง Escherichia coli: อาณานิคมสีแดงที่แข็งแกร่งด้วยเงาโลหะ.
- ไปยัง อี. Cloacae และ เค pneumoniae อาณานิคมควรเป็น mucoid สีชมพู.
- ในกรณีของเอส. typhimurium, S. flexneri และ P. mirabilis อาณานิคมมักเป็นสีชมพูอ่อนหรือไม่มีสี.
- ในที่สุด, E. faecalis คาดว่าจะยับยั้งบางส่วนดังนั้นการเจริญเติบโตของมันควรจะยากจนกับอาณานิคมที่มีขนาดเล็กมากของสีชมพูที่แข็งแกร่ง.
ข้อ จำกัด
-สื่อ Endo มีพลังงานในการเลือกต่ำดังนั้นจึงเป็นไปได้ว่าจุลินทรีย์แกรมบวกบางชนิดเช่น Staphylococcus, Enterococcus และยีสต์สามารถเจริญเติบโตได้.
-แบคทีเรียอื่น ๆ ที่ไม่ได้อยู่ในตระกูล Enterobacteriaceae สามารถพัฒนาได้ในอาหารนี้เช่น Pseudomonas sp และ Aeromonas sp. ลักษณะของสายพันธุ์เหล่านี้เป็นอาณานิคมที่ไม่มีสี.
-สื่อที่เตรียมไว้นี้มีความไวต่อแสงมากดังนั้นการได้รับสารนี้เป็นเวลานานทำให้ระบบตัวบ่งชี้เสื่อมสภาพซึ่งสร้างความเสียหายอย่างไม่สามารถย้อนกลับได้.
-ส่วนประกอบของอาหารเลี้ยงเชื้อถือว่าเป็นสารก่อมะเร็งดังนั้นควรหลีกเลี่ยงการสัมผัสโดยตรง.
-สื่อที่ถูกคายน้ำจะดูดความชื้นอย่างมากและควรเก็บไว้ในภาชนะเดิมที่อุณหภูมิห้องปิดให้แน่นและในสภาพแวดล้อมที่แห้ง.
การอ้างอิง
- BD Laboratories Endo Agar 2013 จำหน่ายได้ที่: bd.com
- Neogen Laboratories M Endo Agar มีจำหน่ายที่: foodsafety.neogen.com
- "Agar Endo" Wikipedia, สารานุกรมฟรี. 7 ก.ย. 2560, 08:27 UTC ก.พ. 28 2019, 22:55 มีอยู่ใน: en.wikipedia.
- ห้องปฏิบัติการ MercK Endo agar 2019 มีจำหน่ายที่: merckmillipore.com
- เอกสารทางเทคนิคของห้องปฏิบัติการ M -Endo Agar LES 2558 มีจำหน่ายที่: liofilchem.net