วุ้น EMB พื้นฐานการเตรียมและการใช้งาน

EMB วุ้น เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อที่คัดเลือกและแตกต่างที่ใช้สำหรับการแยกเชื้อแกรมลบแกรมส่วนใหญ่ของตระกูล Enterobacteriaceae และอื่น ๆ ที่ไม่ต้องการแกรมลบบาซิลลัส เป็นที่รู้จักกันโดยย่อ EAM ซึ่งหมายถึง eosin-methylene blue.

สื่อนี้ถูกสร้างขึ้นโดย Holt-Harris and Teague ในปี 1916 ประกอบด้วยเปปโตน, แลคโตส, ซูโครส, ไดโพแทสเซียมฟอสเฟต, วุ้น, eosin, เมธิลีนบลูและน้ำ มันคล้ายกับ MacConkey agar โดยเฉพาะถ้าใช้ EMB agar ที่แก้ไขโดย Levine ซึ่งไม่มีซูโครส.

ในความเป็นจริงห้องปฏิบัติการแต่ละแห่งจะตัดสินใจว่าจะทำงานร่วมกับอย่างใดอย่างหนึ่งหรือไม่เพราะพวกเขาปฏิบัติหน้าที่เดียวกันแม้ว่าชีวเคมีจะแตกต่าง.

มันยังนำเสนอข้อเสียเปรียบเช่นเดียวกับ MacConkey คลาสสิกวุ้นในแง่ของการผลิตจำนวนมากโดย Proteus ดังนั้นเพื่อหลีกเลี่ยงปรากฏการณ์นี้คุณสามารถเพิ่มความเข้มข้นของวุ้นถึง 5%.

ดัชนี

• 1 มูลนิธิ
  • 1.1 Selective
  • 1.2 ส่วนต่าง
• 2 การเตรียมการ
• 3 ใช้
• 4 การควบคุมคุณภาพ
• 5 ข้อพิจารณาสุดท้าย
• 6 อ้างอิง

มูลนิธิ

เลือก

EMB agar นั้นคัดเลือกอย่างละเอียดเพราะมันมีสี anilinic (eosin และ methylene blue) ซึ่งทำหน้าที่เป็นสารยับยั้งป้องกันการเจริญเติบโตของแบคทีเรียแกรมบวกส่วนใหญ่และแบคทีเรียที่เรียกร้องแบคทีเรียแกรมลบ.

อย่างไรก็ตามวุ้นนี้มีข้อเสียเปรียบที่แบคทีเรียแกรมบวกบางตัวสามารถต้านทานการปรากฏตัวของสารยับยั้งและเติบโตเป็นอาณานิคม punctiform ที่ไม่มีสีขนาดเล็กเช่น Enterococcus faecalis และบางส่วน Staphylococcus.

คุณสามารถปลูกยีสต์บางชนิดเช่น แคนดิดาอัลบิแคนคอมเพล็กซ์, มันจะให้โคโลนีสีชมพูขนาดเล็กมาก chlamydospores สามารถพัฒนาได้จากยีสต์นี้ถ้าตัวอย่างถูกหว่านด้วยความลึก.

ค่า

ในทางตรงกันข้าม EMB agar ก็เป็นตัวกลางที่แตกต่างกันเนื่องจากสีย้อมเหล่านี้เข้าด้วยกัน (eosin และ methylene blue) มีคุณสมบัติในการเกิดการตกตะกอนที่ pH ที่เป็นกรดดังนั้นพวกมันจึงทำหน้าที่เป็นตัวบ่งชี้การผลิตของมัน.

ดังนั้นการหมักแลคโตสหรือแบคทีเรียซูโครสอย่างอ่อน ๆ จะทำให้เกิดอาณานิคมสีม่วงใน 24 ถึง 48 ชั่วโมง ตัวอย่างเช่นสกุล Klebsiella, Enterobacter และ Serratia.

แบคทีเรียที่หมักแลคโตสอย่างรุนแรงเช่น Escherichia coli, หรือซูโครสเช่น Yersinia enterocolitica หรือ Proteus penneri, ก่อให้เกิดการตกตะกอนสีดำสีเขียวให้มีลักษณะเป็นเงาโลหะในสายพันธุ์เหล่านี้.

ควรสังเกตว่าถ้าใช้สื่อเลวีน EMB (ไม่มีซูโครส), Yersinia enterocolitica และ Proteus penneri พวกมันจะสร้างอาณานิคมที่โปร่งใส.

แบคทีเรียที่ไม่ได้ทำการหมักแลคโตสหรือซูโครสจะได้รับการบำรุงรักษาโดยการมีเพปโทนซึ่งให้กรดอะมิโนและไนโตรเจนที่จำเป็นต่อการพัฒนาแบคทีเรียและสร้างอาณานิคมโปร่งใส ยกตัวอย่างเช่น Salmonella และ Shigella จำพวกอื่น ๆ ในกลุ่ม.

ในทำนองเดียวกันมันเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องทราบว่าประเภท Acinetobacter สามารถนำเสนออาณานิคมของลาเวนเดอร์สีฟ้าแม้ว่ามันจะไม่ได้เป็นถังหมักของแลคโตสหรือซูโครส แต่พวกเขามีคุณสมบัติในการแก้ไขเมทิลีนสีฟ้าในผนังเซลล์ของมัน สิ่งนี้สามารถเกิดขึ้นได้กับแบคทีเรียออกซิเดชั่นอื่น ๆ.

การจัดเตรียม

สื่อการอบแห้งแบบดั้งเดิมคือสีเบจอ่อน.

ในการเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อควรทำการชั่งน้ำหนักและแขวนลอยขวดขนาด 36 กรัมในขวดที่บรรจุน้ำกลั่นหนึ่งลิตร.

หลังจากที่ทิ้งส่วนผสมไว้ 5 นาทีที่เหลือให้นำ fiola ไปยังแหล่งความร้อนผสมอย่างแรงและต่อเนื่องจนเดือดและละลายจนหมด.

หลังจากนั้นจะต้องฆ่าเชื้อโดยใช้หม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที.

ในตอนท้ายของเวลามันจะถูกลบออกจากหม้อนึ่งความดันและปล่อยทิ้งไว้ให้พักสักครู่ จากนั้นจะเสิร์ฟร้อนแม้กระทั่ง (45 - 50 ° C) ระหว่าง 15 ถึง 20 มิลลิลิตรของวุ้นในแต่ละจานเพาะเชื้อ ขนาดกลางควรเป็นสีน้ำเงินสารสีน้ำเงิน.

หลังจากเสิร์ฟแผ่นเปลือกโลกจะถูกเปิดออกเล็กน้อยจนกระทั่งวุ้นเย็นลงเล็กน้อย จากนั้นพวกเขาได้รับความคุ้มครองและอนุญาตให้แข็งตัวอย่างสมบูรณ์ ต่อมาพวกเขาจะได้รับคำสั่งในที่ยึดแผ่นคว่ำและเก็บไว้ในตู้เย็น (8 ° C) จนกว่าพวกเขาจะใช้.

ขั้นตอนนี้จะดำเนินการโดยเฉพาะอย่างยิ่งในเครื่องดูดควันไหลแบบราบเรียบหรือด้านหน้าเครื่องเผาแผดเผาเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อน.

โปรดทราบว่าแต่ละอาคารพาณิชย์จะระบุจำนวนเงินที่ต้องชั่งน้ำหนักเพื่อเตรียมสื่อวัฒนธรรม.

ค่า pH สุดท้ายของสื่อควรเป็น 7.2 ± 0.2

การใช้งาน

สื่อนี้ใช้ในการหว่านปัสสาวะและอุจจาระหรือตัวอย่างทางคลินิกใด ๆ โดยเฉพาะอย่างยิ่งหากมีการสงสัยว่ามีแบคทีเรียแกรมลบที่เรียกร้องแกรมลบที่ไม่ต้องการเช่นแบคทีเรียที่เป็นของ Enterobacteriaceae ซึ่งเติบโตได้ดีมากในอาหารนี้.

เชื้อแบคทีเรียก่อโรคของจำพวกชิเกลล่าและซัลโมเนลล่านั้นแตกต่างจากโคโลนีที่ไม่มีสีหรืออำพันเล็กน้อย.

แบคทีเรียแลคโตสที่ไม่ใช่การหมักอื่น ๆ ก็เติบโตเช่น Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter และอื่น ๆ.

เช่นเดียวกันสื่อนี้มีประโยชน์อย่างมากในการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของอาหารและน้ำเนื่องจากมันเหมาะสำหรับขั้นตอนการยืนยันที่สมบูรณ์ของการกำหนดโคลิฟอร์มซึ่งก็คือเพื่อยืนยันการมีอยู่ของ อี. โคไล จาก turbid EC broths จากจำนวนที่เป็นไปได้มากที่สุด (NMP).

การควบคุมคุณภาพ

ในการตรวจสอบว่าสื่อวัฒนธรรมที่เพาะปลูกใหม่ทำงานได้ดีคุณสามารถปลูกสายพันธุ์ควบคุมเพื่อสังเกตลักษณะของอาณานิคมและตรวจสอบว่าพวกมันให้ตามที่คาดไว้.

สำหรับเรื่องนี้สายพันธุ์ ATCC หรือสายพันธุ์ที่ระบุอย่างดีของ อี. โคไล, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa และแบคทีเรียแกรมบวกบางชนิดเช่น S. aureus.

คาดว่า อี. โคไล สร้างอาณานิคมสีน้ำเงิน - ดำที่ได้รับการพัฒนามาอย่างดีด้วยความมันวาวสีเขียว ตราบใดที่, Enterobacter aerogenes และ Klebsiella sp พวกมันจะต้องให้อาณานิคมของเมือกที่มีการพัฒนาที่ดีเป็นสีน้ำเงินแกมน้ำเงิน.

สำหรับส่วนของ, Salmonella typhimurium และ Shigella flexneri, พวกเขาจะต้องพัฒนาอาณานิคมขนาดใหญ่ไม่มีสีหรือมีสีอำพันเล็กน้อย.

ในที่สุดประเภท Pseudomonas aeruginosa มันเติบโตขึ้นเป็นอาณานิคมที่ไม่มีสีขนาดไม่สม่ำเสมอในขณะที่แบคทีเรียแกรมบวกควรถูกยับยั้งหรือเติบโตอย่างไม่สมบูรณ์ด้วยอาณานิคมขนาดเล็กมาก.

ข้อพิจารณาสุดท้าย

บางครั้งการทำหมันอาจทำให้เมทิลสีฟ้าลดลงโดยสังเกตเป็นสีส้ม เพื่อให้เมทิลีนสีน้ำเงินสามารถออกซิไดซ์และสีม่วงเพื่อนำกลับมาใช้ใหม่จะต้องผสมเบา ๆ จนกว่าสีจะดีขึ้น.

นอกจากนี้หลังจากการฆ่าเชื้อสามารถทำให้สีตกตะกอนได้ดังนั้นจึงต้องผสมให้เข้ากันก่อนเสิร์ฟจาน Petri.

การอ้างอิง

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B และVelázquez O. 2009. เทคนิคสำหรับการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของอาหาร ฉบับที่ 2 คณะเคมี UNAM เม็กซิโก.
2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. การจำแนกลักษณะและการกระจายสายพันธุ์ของ Escherichia coli สาเหตุที่ทำให้เกิดโรคที่แยกได้ของไก่เนื้อจากฟาร์มสัตว์ปีกในเปรู การสอบสวนรายได้ สัตว์แพทย์ เปรู 2012 23 (2): 209-219 มีจำหน่ายที่: scielo.org.
3. Laboratories Conda S.A. Eosin Agar และ Methylene Blue 2553 มีจำหน่ายที่: condalab.com
4. ห้องปฏิบัติการ Britania Levine E.M.B (กับ Eosin และ Methylene Blue) 2011 จำหน่ายที่: britanialab.com
5. BD Laboratories BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar) ดัดแปลง 2013 จำหน่ายได้ที่: bd.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา (ฉบับที่ 5) อาร์เจนตินา, Panamericana บรรณาธิการ.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด อาร์เจนตินา Panamericana S.A บทบรรณาธิการ