วุ้นมีรากฐานมาตรฐานการเตรียมการและการใช้งาน

agar บัญชีมาตรฐาน เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อที่ไม่ผ่านการคัดเลือกและได้รับการออกแบบมาสำหรับการวัดปริมาณของจุลินทรีย์จุลินทรีย์แอโรบิกที่มีอยู่ในตัวอย่างน้ำดื่มน้ำเสียเครื่องดื่มนมและอาหารอื่น ๆ สื่อนี้เป็นที่รู้จักกันในนาม PCA agar สำหรับคำย่อในภาษาอังกฤษ Plate Number Agar มันถูกสร้างขึ้นในปี 1953 โดย Buchbinder, Baris และ Goldstein.

บัญชีสื่อวุ้นมาตรฐานประกอบด้วยสารสกัดจากยีสต์, Triptein, กลูโคส, วุ้นและน้ำกลั่น สูตรนี้ประกอบด้วยองค์ประกอบทางโภชนาการขั้นพื้นฐานที่ช่วยให้การพัฒนาของจุลินทรีย์จุลินทรีย์แอโรบิกในปัจจุบันไม่ต้องการ.

เนื่องจากสื่อไม่มีสารยับยั้งแบคทีเรียสามารถพัฒนาได้โดยไม่มีข้อ จำกัด ดังนั้นจึงเหมาะสำหรับการนับจำนวนอาณานิคมทั่วไป อย่างไรก็ตามเทคนิคการหาปริมาณของเพลตจะไม่ตรวจจับแบคทีเรียทั้งหมดที่มีอยู่ แต่จะมีเพียงแบคทีเรียที่มีความสามารถในการเจริญเติบโตภายใต้สภาพแวดล้อมที่มีการเพาะเลี้ยงวุ้นแบบมาตรฐาน.

ในแง่นี้เทคนิคการหาปริมาณของเพลตพยายามหาปริมาณแบคทีเรียประเภทแอโรบิกโดยทั่วไปคือพวกที่พัฒนาที่อุณหภูมิระหว่าง 25 และ 40 ° C ด้วยอุณหภูมิที่เหมาะสมของการเจริญเติบโตที่ 37 ° C.

กลุ่มแบคทีเรียนี้มีความสำคัญมากเพราะมีแบคทีเรียที่ทำให้เกิดโรคส่วนใหญ่สำหรับมนุษย์.

มันควรจะสังเกตว่าบางครั้งมันอาจจะน่าสนใจในการหาปริมาณของแบคทีเรียที่อยู่ในอาหาร แบคทีเรียเหล่านี้เป็นแบคทีเรียที่พัฒนาที่อุณหภูมิต่ำ< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

แบคทีเรียอุณหภูมิที่พัฒนาในช่วงระหว่าง 50 ° C ถึง 80 ° C หรือมากกว่านั้นอาจมีความสำคัญในอาหารบางประเภทเช่นกระป๋อง.

ปริมาณของจุลินทรีย์จะแสดงในหน่วยการขึ้นรูปโคโลนี (CFU) ต่อกรัมหรือมิลลิลิตรของตัวอย่าง.

ดัชนี

• 1 มูลนิธิ
• 2 การเตรียมการ
  • 2.1 สำหรับเทคนิคการเทแผ่น
  • 2.2 สำหรับการปลูกพื้นผิว
• 3 ใช้
  • 3.1 เทคนิคการเทแผ่น (seeded โดยความลึก)
  • 3.2 เทคนิคการหว่านบนพื้นผิว
• 4 การควบคุมคุณภาพ
• 5 ข้อ จำกัด
• 6 อ้างอิง

มูลนิธิ

สื่อการตรวจนับมาตรฐานถูกออกแบบมาเพื่อให้การพัฒนาที่น่าพอใจของแบคทีเรียแอโรบิกที่ไม่ต้องการเนื่องจากสารสกัดจากยีสต์, tripheine และกลูโคสให้สารอาหารที่จำเป็นสำหรับการพัฒนาของจุลินทรีย์ที่ดี.

ในทางตรงกันข้ามสื่อมีสีที่ชัดเจนและมีลักษณะโปร่งใสซึ่งเป็นเหตุผลว่าทำไมจึงเหมาะสำหรับการแสดงอาณานิคมที่พัฒนาโดยวิธีการหว่านลึก (เทลงในจาน).

นอกจากนี้ยังเป็นไปได้ที่จะนับอาณานิคมโดยวิธีการหว่านบนพื้นผิวด้วยไม้พายของ Drigalski.

เมื่อโหลดจุลินทรีย์สูงต้องทำการเจือจางทศนิยมของตัวอย่างภายใต้การศึกษาเพื่อนับ CFU.

ควรสังเกตว่าสื่อนี้ได้รับการแนะนำโดย American Public Health Association (APHA) สำหรับการนับ mesophiles แอโรบิก.

การจัดเตรียม

น้ำหนัก 23.5 กรัมของตัวกลางที่ถูกทำให้แห้งและละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร ในการละลายอย่างสมบูรณ์ส่วนผสมจะต้องได้รับความร้อนกวนบ่อย ๆ จนกว่าจะเดือด ขั้นตอนย่อยต่อไปนี้ขึ้นอยู่กับเทคนิคการเพาะที่จะใช้.

สำหรับเทคนิคเทจาน

แจกจ่ายโดยการจ่าย 12 ถึง 15 มล. ลงในหลอดทดลอง ต่อจากนั้นฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที อนุญาตให้แข็งตัวในแนวตั้งในรูปแบบของบล็อก เก็บในตู้เย็นจนกว่าจะใช้.

ละลายคิวเมื่อมันจะถูกใช้ เมื่อละลายแล้วให้เก็บไว้ในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 44-47 ° C ในขณะที่กำลังเตรียมตัวอย่าง.

สำหรับการปลูกบนพื้นผิว

ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 121 ° C จากนั้นแจกจ่าย 20 มล. ในจานเลี้ยงเชื้อปลอดเชื้อ อนุญาตให้แข็งตัวคว่ำและเก็บในตู้เย็นจนกว่าจะใช้.

เทใส่จานก่อนใช้ ค่า pH ของตัวกลางควรเป็น 7.0 ± 0.2.

ใช้

การนับจำนวนมาตรฐานของวุ้นถูกใช้ในเทคนิคการนับ mesophil แบบแอโรบิกระหว่างการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของน้ำและอาหาร การนับจำนวน mesophiles แบบแอโรบิคนั้นเป็นสิ่งจำเป็นเนื่องจากมันเป็นตัวกำหนดคุณภาพของตัวอย่างภายใต้การศึกษา.

การประยุกต์ใช้เทคนิคนี้ (การใช้สื่อนี้) ช่วยให้มองเห็นด้วยตาเปล่าของอาณานิคมที่แยกได้สำหรับการทำปริมาณ.

เทคนิคการเทแผ่นโลหะ (ฝังลึก)

-กระบวนการ

เทคนิคประกอบด้วยดังต่อไปนี้:

1) ทำให้เป็นเนื้อเดียวกันตัวอย่างเพื่อแจกจ่ายแบคทีเรียที่มีอยู่.

2) การระงับเริ่มต้นดำเนินการในขวดปลอดเชื้อหรือถุงโดยคำนึงถึงอัตราส่วน 10 กรัมหรือตัวอย่าง 10 มิลลิลิตรใน 90 มิลลิลิตรของสารเจือจาง (10)^-1).

3) จากการระงับเริ่มต้นการเจือจางทศนิยมที่เกี่ยวข้องจะทำขึ้นอยู่กับประเภทของตัวอย่าง เช่น: (10^-2, 10^-3, 10^-4) การเจือจางทำด้วยน้ำเปปโตนหรือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต.

เมื่อต้องการทำสิ่งนี้ให้ใช้ 1 มิลลิลิตรของสารแขวนลอยเริ่มต้นและวางในสารละลายเจือจาง 9 มล. และดำเนินการเจือจางถ้าจำเป็นและใช้ 1 มิลลิลิตรของการเจือจาง^-2 และอื่น ๆ.

4) ใช้ 1 มล. ของการเจือจางแต่ละครั้งและวางในจาน Petri ปลอดเชื้อที่ว่างเปล่า.

5) เพิ่มแต่ละจาน 12 ถึง 15 มล. ของวุ้นนับมาตรฐานละลายก่อนหน้านี้และตั้งที่ 44 - 47 ° C.

6) ให้การเคลื่อนที่แบบหมุนที่ราบเรียบกับแผ่นกระจายตัวอย่างไปยังวุ้นอย่างสม่ำเสมอและอนุญาตให้แข็งตัว.

7) แผ่นกลับด้านและฟักไข่ที่ 37 ° C ใน aerobiosis เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมง.

8) เมื่อเวลาเสร็จแล้วให้ดำเนินการตรวจสอบแผ่นเปลือกโลกและนับอาณานิคมในการเจือจางที่อนุญาต มันถูกเลือกสำหรับการนับแผ่นเหล่านั้นที่มีระหว่าง 30 ถึง 300 CFU.

การนับสามารถทำได้ด้วยตนเองหรือใช้อุปกรณ์ตัวนับอาณานิคม.

ค่าที่อนุญาตต่อมิลลิลิตรของตัวอย่างอาจแตกต่างกันไปในแต่ละประเทศตามมาตรฐานที่ถูกควบคุม.

-การคำนวณ UFC

การคำนวณทั่วไปทำโดยใช้สูตรต่อไปนี้:

แสดงผลลัพธ์เป็น 1 หรือ 2 หลักคูณด้วยฐาน 10 ที่เหมาะสม ตัวอย่าง: หากผลลัพธ์คือ 16.545 ผลลัพธ์จะถูกปัดเศษตามหลักที่สามเป็น 17,000 และจะแสดงดังต่อไปนี้: 1.7 x 10⁴. ตอนนี้ถ้าผลลัพธ์ที่ได้คือ 16,436 จะถูกปัดเศษเป็น 16,000 และแสดงเป็น 1.6 x 10⁴.

เทคนิคการปลูกบนพื้นผิว

-กระบวนการ

-ฉีดวัคซีนที่มีตัวอย่างโดยตรง 0.1 มิลลิลิตรหากเป็นของเหลวให้แขวนลอยเริ่มต้น 10^-1 หรือการเจือจางติดต่อกัน 10^-2, 10^-3 ฯลฯ อยู่ตรงกลางของแผ่นอะคริลิกสำหรับบัญชีมาตรฐาน.

-กระจายตัวอย่างอย่างเท่าเทียมกันด้วยไม้พาย Drigalski หรือก้านแก้วรูปตัว L ปล่อยให้ยืนเป็นเวลา 10 นาที.

-พลิกกลับแผ่นและฟักใน aerobiosis ที่ 37 ° C เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมง.

-ดำเนินการต่อเพื่อนับอาณานิคมเลือกเพลทที่อยู่ในช่วงระหว่าง 20 - 250 CFU.

-การคำนวณ UFC

สำหรับการคำนวณจะใช้ตัวคูณเจือจางซึ่งเป็นค่าผกผัน ตัวเลขจะถูกปัดเศษเป็น 2 ตัวเลขนัยสำคัญ (การปัดเศษตามหลักที่สาม) และแสดงในฐานกำลัง 10 ตัวอย่างเช่นถ้า 224 CFU ถูกนับในตัวอย่างโดยไม่มีการเจือจาง (10^-1) รายงาน 22 x 10¹  UFC แต่ถ้าตัวเลขเป็น 225 จะมีการรายงาน 23 x 10¹ UFC.

ทีนี้ถ้าคุณนับ 199 CFU ในการลดสัดส่วน 10^-3, จะมีการรายงาน 20 x 10⁴ UFC แต่ถ้านับ 153 CFU ในการเจือจางเดียวกันจะมีการรายงาน 15 x 10⁴ UFC.

การควบคุมคุณภาพ

สื่อการนับวัฒนธรรมมาตรฐานสามารถประเมินได้โดยใช้สายพันธุ์ที่ได้รับการรับรองที่รู้จักเช่น: Escherichia coli ATCC 8739, เชื้อ Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, แลคโตบาซิลลัสเฟอรัม ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC 12022.

หากสื่อวัฒนธรรมอยู่ในสภาพที่เหมาะสมคาดว่าการเติบโตที่น่าพอใจในทุกกรณียกเว้น L. fermentum ที่สามารถมีประสิทธิภาพปกติ.

ในการประเมินความแห้งแล้งของอาหารเลี้ยงเชื้อหนึ่งหรือสองแผ่นของแต่ละชุดที่เตรียมไว้ (ไม่ถูกกำจัดเชื้อ) ควรถูกบ่มที่ 37 ° C ใน aerobiosis เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ในตอนท้ายของเวลานี้ไม่ควรสังเกตการเติบโตหรือการเปลี่ยนสีของสื่อ.

ข้อ จำกัด

-อย่าละลายวุ้นมากกว่าหนึ่งครั้ง.

-สื่อที่เตรียมไว้สามารถเก็บได้นานถึง 3 เดือนตราบใดที่เก็บไว้ในตู้เย็นและป้องกันแสง.

-สื่อนี้ไม่เหมาะสำหรับการเรียกร้องให้จุลินทรีย์หรือ anaerobes.

การอ้างอิง

1. การบริหารแห่งชาติของยาอาหารและเทคโนโลยีการแพทย์ (ANMAT) การวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของอาหารวิธีการวิเคราะห์อย่างเป็นทางการจุลินทรีย์ที่เป็นตัวบ่งชี้ เล่มที่ 2014 3. มีให้ที่: anmat.gov.ar
2. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. วุ้นนับจาน 2552 มีจำหน่ายที่: http://f-soria.es
3. Laboratories Conda Pronadisa วุ้นสำหรับวิธีมาตรฐาน (PCA) ตาม APHA และ ISO 4833 มีจำหน่ายที่: condalab.com
4. ห้องปฏิบัติการ Britania นับบนจานวุ้น 2558 มีจำหน่ายที่: britanialab.com
5. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B และVelázquez O. 2009. เทคนิคสำหรับการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของอาหาร ฉบับที่ 2 คณะเคมี UNAM เม็กซิโก วางจำหน่ายที่: depa.fquim.unam