มูลนิธิ CLAR Agar การใช้งานและการเตรียมการ

วุ้น CLED (Cystine-Lactose-Electrolytes-Deficient) เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อแข็งที่ใช้สำหรับการวินิจฉัยโรคติดเชื้อทางเดินปัสสาวะ องค์ประกอบของสื่อการเพาะเลี้ยงได้รับการออกแบบมาเพื่อการเจริญเติบโตที่ดีของเชื้อโรคในปัสสาวะและเหมาะอย่างยิ่งสำหรับการหาปริมาณของหน่วยการสร้างอาณานิคม (CFU).

สื่อการเพาะเลี้ยง CLED นั้นไม่สามารถคัดเลือกได้เนื่องจากเชื้อแกรมลบและเชื้อจุลินทรีย์แกรมบวกสามารถเจริญเติบโตได้ แต่นี่ไม่ใช่ปัญหาเนื่องจากการติดเชื้อทางเดินปัสสาวะส่วนใหญ่เกิดจากจุลินทรีย์ชนิดเดียว.

ในกรณีของการติดเชื้อ polymicrobial 2 หรือ 3 แบคทีเรียที่แตกต่างกันสามารถหาได้ แต่มันหายากมากและส่วนใหญ่เป็นตัวอย่างที่ปนเปื้อน.

ในบรรดาแบคทีเรียแกรมลบที่สามารถเจริญเติบโตได้ในอาหารเลี้ยงเชื้อนี้คือแบคทีเรียที่เป็นของครอบครัว Enterobacteriaceae และบาซิลลัสลำไส้อื่น ๆ , uropathogens ที่แยกได้บ่อยที่สุดในตัวอย่างปัสสาวะ, ต่อไปนี้: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, ท่ามกลางคนอื่น ๆ.

ในทำนองเดียวกันในหมู่แบคทีเรียแกรมบวกที่สามารถเติบโตในสื่อนี้คือ Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, แลคโตบาซิลลัสเอส และพวกเขายังสามารถปลูกยีสต์ได้อย่างซับซ้อน Candida albicans.

อย่างไรก็ตามเนื่องจากองค์ประกอบทางเคมีของสื่อมันไม่อนุญาตให้มีการเจริญเติบโตของเชื้อโรคทางเดินปัสสาวะบางชนิดเช่น Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, ท่ามกลางคนอื่น ๆ.

ดัชนี

• 1 พื้นฐานของ CLED agar
• 2 พื้นฐานของ CLED agar (Bevis)
• 3 ใช้
  • 3.1 การเก็บตัวอย่างปัสสาวะ
  • 3.2 การตีความ
  • 3.3 บัตรประจำตัว
• 4 การเตรียมการ
• 5 อ้างอิง

รากฐานของ CLED agar

สื่อการเพาะเลี้ยง CLED มีสารสกัดจากเนื้อสัตว์เป็นแหล่งพลังงานเคซีนตับอ่อนไฮโดรไลเสตและเจลาตินไฮโดรไลเสต พวกเขาให้สารอาหารสำหรับการพัฒนาของแบคทีเรียที่ต้องการมาก.

นอกจากนี้ยังมีซีสตีนซึ่งเป็นกรดอะมิโนที่ช่วยให้การเจริญเติบโตของโคลิฟอร์มแยกได้ด้วยขนาดที่เล็ก.

แลคโตสมีคาร์โบไฮเดรตที่สามารถหมักได้ด้วยเหตุนี้สื่อนี้จึงมีความแตกต่าง ความสามารถในการแยกแยะแบคทีเรียที่หมักจากแลคโตสที่ไม่ผ่านการหมัก.

แบคทีเรียที่หมักจะเปลี่ยนค่า pH ของตัวกลางโดยการผลิตกรดพัฒนาอาณานิคมสีเหลืองในขณะที่แบคทีเรียที่ไม่หมักจะไม่สร้างการเปลี่ยนแปลงในตัวกลางดังนั้นพวกมันจึงใช้สีของวุ้นดั้งเดิมสีเขียว.

ปฏิกิริยาการหมักจะถูกเปิดเผยด้วยการมีตัวบ่งชี้ค่าความเป็นกรด - ด่างซึ่งในสื่อนี้คือสีน้ำเงินโบรโมธีมอล.

ในขณะที่ความเข้มข้นของอิเล็กโทรไลต์ต่ำของสื่อยับยั้งการเจริญเติบโตทั่วไปของประเภท Proteus, เรียกว่าผลการจับกลุ่ม สิ่งนี้สร้างความได้เปรียบด้วยความเคารพต่อวิธีการอื่นเพราะมันจะช่วยให้นับ UFCs รวมทั้งถ้ามีสกุลโปรเตอุสอยู่.

อย่างไรก็ตามความเข้มข้นต่ำของอิเล็กโทรไลต์ยับยั้งการเจริญเติบโตของพืชบางชนิด Shigella, การเสียเปรียบในแง่อื่น ๆ.

พื้นฐานของ CLED agar (Bevis)

มีความแตกต่างหรือการดัดแปลงของสื่อนี้ทำโดย Bevis ซึ่งรวมองค์ประกอบของกรดฟุกซินดั้งเดิม (ตัวบ่งชี้ Andrade) ลงในองค์ประกอบเดิม มันทำหน้าที่ร่วมกับ bromothymol blue เพื่อแยกความแตกต่างของการหมักจากแบคทีเรียที่ไม่ผ่านการหมัก.

ความแตกต่างระหว่างสื่อแบบดั้งเดิมและสื่อที่ถูกดัดแปลงคือสีที่อาณานิคมใช้ ในกรณีของแบคทีเรียที่หมักแลคโตสนั้นโคโลนีจะมีสีส้มแดงที่มีรัศมีสีชมพูหรือสีแดง.

การใช้งาน

CLED agar ใช้เพื่อการเก็บตัวอย่างปัสสาวะเท่านั้น การใช้สื่อนี้โดยเฉพาะอย่างยิ่งบ่อยครั้งในห้องปฏิบัติการยุโรปในขณะที่ในอเมริกามีการใช้งานน้อยกว่า.

การรวบรวมตัวอย่างต้องตรงตามพารามิเตอร์บางอย่างเพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่น่าเชื่อถือรวมถึง:

• ไม่ทานยาปฏิชีวนะก่อนรับตัวอย่าง.
• ควรปัสสาวะตั้งแต่ชั่วโมงแรกของเช้าเนื่องจากมีความเข้มข้นมากขึ้นเมื่อไม่สามารถทำการเก็บตัวอย่างด้วยวิธีการรุกราน.
• ล้างองคชาตให้สะอาดก่อนนำตัวอย่าง.
• ยกเลิกการสตรีมปัสสาวะครั้งแรกจากนั้นจึงวางคอนเทนเนอร์.
• เก็บปัสสาวะระหว่าง 25 ถึง 30 มล. ในภาชนะที่มีฉลากปลอดเชื้อ.
• ไปที่ห้องปฏิบัติการที่ล้อมรอบด้วยน้ำแข็งทันที.
• จะต้องดำเนินการก่อนการปล่อย 2 ชั่วโมงหรือแช่เย็นที่ 4 ° C เป็นเวลาสูงสุด 24 ชั่วโมง.

เก็บตัวอย่างปัสสาวะ

ตัวอย่างปัสสาวะจะต้องเจือจาง 1:50.

สำหรับการเจือจางให้วางปัสสาวะของผู้ป่วย 0.5 มล. และเจือจางด้วยสารละลายทางสรีรวิทยาที่ปลอดเชื้อ 24.5 มล.

วัด 0.1 มล. ของปัสสาวะเจือจางและหว่านต่อพื้นผิวด้วยไม้พาย drigalski บนสื่อ CLED นี่คือวิธีการเพาะที่ระบุไว้สำหรับการนับอาณานิคม นั่นคือเหตุผลที่ใช้ในตัวอย่างปัสสาวะเนื่องจากผลลัพธ์จะต้องแสดงใน CFU / ml.

สำหรับการหาปริมาณของโคโลนีที่ได้รับให้ดำเนินการดังนี้นับโคโลนีของจานแล้วคูณด้วย 10 จากนั้นเป็น 50 ด้วยวิธีนี้คุณจะได้รับปริมาณของ CFU / มิลลิลิตรของปัสสาวะ.

การตีความ

นับมากกว่า 100,000 CFU / ml - การติดเชื้อในปัสสาวะ

นับต่ำกว่า 1,000 CFU / ml- ไม่ติดเชื้อ

การนับระหว่าง 1,000-10,000 CFU / ml - การปนเปื้อนที่สงสัยเป็นไปได้และการสุ่มตัวอย่างซ้ำ.

บัตรประจำตัว

อาณานิคมที่ปลูกบนวุ้น CLED ควรทำเป็นกรัมและขึ้นอยู่กับลักษณะ morphotypeintive ของจุลินทรีย์ที่จะทำการเพาะเลี้ยงบางอย่าง.

ตัวอย่างเช่นถ้ามันเป็นบาซิลลัสแกรมลบมันจะถูกหว่านลงบนวุ้น MacConkey ซึ่งการหมักหรือไม่มีแลคโตสจะถูกยืนยัน นอกจากนี้ยังมีสารอาหารเสริมเพื่อทำหน้าที่ทดสอบออกซิเดส.

ในกรณีที่แกรมพบ cocci บวกกรัมมันสามารถ subcultured ในวุ้นแมนนิทอลรสเค็มและในอาหารวุ้น ในขั้นตอนหลังจะทำการทดสอบตัวเร่งปฏิกิริยา ในที่สุดหากมีการตรวจพบยีสต์มันจะถูกหว่านลงบนวุ้น Sabouraud.

ห้องปฏิบัติการหลายแห่งใช้สื่อกลางของ CLED และชอบใช้เลือดวุ้น MacConkey และสารอาหารที่มีคุณค่าทางโภชนาการเพื่อทำการเก็บตัวอย่างปัสสาวะ.

การจัดเตรียม

ในขวดที่มีน้ำกลั่นหนึ่งลิตรละลายวุ้น CLED 36.2 กรัม หลังจากพัก 5 นาทีให้อุ่นวุ้นที่ได้รับการพักไว้อีกครั้งผสมให้เข้ากันจนเดือดเป็นเวลา 1 นาที.

จากนั้นฆ่าเชื้อที่ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาทีในหม้อนึ่งความดัน เมื่อเวลาสิ้นสุดลงมันจะถูกลบออกจากหม้อนึ่งความดันและอนุญาตให้เย็นจนกระทั่งถึงอุณหภูมิ 45 ° C หลังจากนั้นให้บริการระหว่าง 15 - 20 มล. ในแต่ละจานเพาะเชื้อ.

ขั้นตอนการให้บริการแผ่นจะต้องดำเนินการภายในเครื่องดูดควันไหลแบบลามินาร์หรือด้านหน้าเครื่องเผาแผดเผาเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อน.

จานเสิร์ฟที่ได้รับอนุญาตให้แข็งตัวได้รับคำสั่งในที่ใส่จานคว่ำและเก็บไว้ในตู้เย็น (2-8 ° C) จนกว่าจะใช้.

ค่า pH สุดท้ายของสื่อที่เตรียมไว้ควรเป็น 7.3 ± 0.2.

การอ้างอิง

1. คำแนะนำสำหรับการวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของการติดเชื้อทางเดินปัสสาวะ. Chil infectol.  2001 18 (1): 57-63 มีจำหน่ายที่: scielo.org.
2. Panchi J. การจำแนกเชื้อจุลินทรีย์ที่ทำให้เกิดการติดเชื้อทางเดินปัสสาวะในผู้ป่วยภายในที่ได้รับการสวนปัสสาวะ 2559. งานระดับปริญญาตรีเพื่อขอใบอนุญาตชื่อในห้องปฏิบัติการทางคลินิก มหาวิทยาลัยเทคนิคแห่ง Ambato เอกวาดอร์.
3. ห้องปฏิบัติการ Britania ครึ่ง CLED วางจำหน่ายแล้วที่: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories คำแนะนำสำหรับการใช้งาน CLED Agar 2013 มีจำหน่ายที่: www.renylab.ind.br.
5. Cultimed Laboratories คู่มือพื้นฐานของจุลชีววิทยา วางจำหน่ายแล้วที่: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. ตัวเลือก CLED agar ในงานเลี้ยงปัสสาวะ การประเมินในอนาคตและการเปรียบเทียบ การวินิจฉัยโรค Microbiol ติดเชื้อ 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994) จุลชีววิทยาคลินิกภาคปฏิบัติ มหาวิทยาลัยกาดิซรุ่นที่ 2 บริการสิ่งพิมพ์ UCA.