หุ้น:
มูลนิธิซิมมอนส์ซิเตรตการเตรียมและการใช้งาน
ซิมมอนส์ซิเตรตวุ้น เป็นสื่อของแข็งที่ใช้ทดสอบทางชีวเคมีเพื่อระบุเชื้อจุลินทรีย์โดยเฉพาะแบคทีเรียแกรมลบ สื่อต้นฉบับถูกสร้างขึ้นโดย Koser ในปี 1923.
ผลิตภัณฑ์ Citrate ของ Koser ประกอบด้วยน้ำซุปที่ประกอบด้วยโซเดียมฟอสเฟตแอมโมเนียมฟอสเฟตโมโนโพแทสเซียมฟอสเฟตแมกนีเซียมซัลเฟตและโซเดียมซิเตรต.
ดังที่เห็นได้แหล่งคาร์บอนเพียงแหล่งเดียวในตัวกลางคือซิเตรตและไนโตรเจนคือแอมโมเนียมฟอสเฟตโปรตีนและคาร์โบไฮเดรตที่ถูกมองข้ามว่าเป็นแหล่งที่มาขององค์ประกอบเหล่านี้พวกมันมักอยู่ในสื่ออื่น ๆ.
ดังนั้นแบคทีเรียที่ถูกฉีดวัคซีนในอาหารเลี้ยงเชื้อสามารถทำซ้ำได้หากสามารถรับซิเตรตคาร์บอนได้ การทดสอบเป็นบวกหากมีความขุ่นในสื่อ แต่ก็มีข้อเสียที่อาจเกิดความขุ่นที่ไม่เฉพาะเจาะจง.
ปัญหานี้แก้ไขได้โดย Simmons เพิ่ม agar และ bromothymol blue ในสูตรดั้งเดิมของ Koser แม้ว่าหลักการจะเหมือนกัน แต่ก็ตีความแตกต่างกัน.
ดัชนี
- 1 มูลนิธิ
- 1.1 โหมดการเพาะ
- 1.2 การตีความ
- 2 การเตรียมการ
- 3 ใช้
- 4 ข้อพิจารณาสุดท้าย
- 4.1 Inoculum
- 4.2 เมล็ด
- 4.3 ความเข้มของสี
- 5 อ้างอิง
มูลนิธิ
แบคทีเรียบางตัวมีความสามารถในการเอาชีวิตรอดในกรณีที่ไม่มีการหมักหรือการผลิตกรดแลคติกจำเป็นต้องได้รับพลังงานผ่านการใช้สารตั้งต้นอื่น ๆ ในการทดสอบนี้แหล่งคาร์บอนเพียงแห่งเดียวที่เสนอคือซิเตรต.
แบคทีเรียที่สามารถอยู่รอดภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้เผาผลาญซิเตรตได้อย่างรวดเร็วผ่านทางเลือกอื่นในเส้นทางดั้งเดิมโดยใช้วัฏจักรกรด tricarboxylic หรือวงจรการหมักซิเตรต.
catabolism ของซิเตรตโดยแบคทีเรียประกอบด้วยกลไกของเอนไซม์โดยไม่มีการแทรกแซงของโคเอ็นไซม์เอเอ็นไซม์นี้เรียกว่าซิตริก (citrate oxaloacetate-lyase) หรือซิเตรต desmolase ปฏิกิริยานั้นจะต้องมีประจุบวก bivalent ซึ่งในกรณีนี้คือแมกนีเซียม.
ปฏิกิริยาจะสร้าง oxaloacetate และ pyruvate ซึ่งก่อให้เกิดกรดอินทรีย์ในช่วงกลางของค่าความเป็นกรดด่างที่เกิดขึ้นจากการใช้แหล่งไนโตรเจน กรดอินทรีย์เหล่านี้ใช้เป็นแหล่งกำเนิดคาร์บอนสร้างคาร์บอเนตและไบคาร์บอเนต.
โหมดการหว่าน
ซิมมอนส์ซิเตรตขนาดกลางควรฉีดเชื้อลงในปลาหางโดยใช้ลูปหรือเข็มตรงแล้วบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 35-37 องศาเซลเซียส ในตอนท้ายของเวลาผลลัพธ์จะถูกสังเกต.
การเพาะจะกระทำบนพื้นผิวของวุ้นเท่านั้น อย่าทำการเจาะ.
การตีความ
หากสื่อมีสีดั้งเดิม (สีเขียว) และไม่มีการเจริญเติบโตที่มองเห็นได้การทดสอบจะเป็นลบ แต่ถ้าสื่อเปลี่ยนเป็นสีน้ำเงินแสดงว่ามีผลิตภัณฑ์เป็นด่างซึ่งตรวจพบโดยตัวบ่งชี้ค่า pH ในกรณีนี้การทดสอบเป็นบวก.
สิ่งนี้เกิดขึ้นเพราะหากแบคทีเรียใช้คาร์บอนของซิเตรตก็สามารถนำไนโตรเจนของแอมโมเนียมฟอสเฟตที่ปล่อยแอมโมเนียออกมาทำให้เป็นด่าง.
ในทางกลับกันหากสังเกตการเติบโตของแบคทีเรียในตัวกลาง แต่ไม่มีการเปลี่ยนสีการทดสอบก็ควรพิจารณาในเชิงบวกด้วยเนื่องจากหากมีการเติบโตก็หมายความว่าแบคทีเรียนั้นสามารถใช้ซิเตรตเป็นแหล่งคาร์บอนได้ แม้ว่าจะไม่มีการเปลี่ยนแปลงค่า pH ในขณะนี้ (บางครั้งอาจใช้เวลา).
หากมีข้อสงสัยในการตีความสีสุดท้ายก็สามารถเปรียบเทียบกับหลอดซิเตรตที่ไม่มีการปนเปื้อน.
การจัดเตรียม
น้ำหนัก 24.2 กรัมของตัวกลางที่ถูกทำให้แห้งด้วยน้ำหนึ่งลิตร ผสมและปล่อยให้ยืนประมาณ 5 นาทีโดยประมาณ เสร็จสิ้นการละลายกลางด้วยความร้อนเป็นเวลา 1 หรือสองนาทีกวนบ่อย.
ทำหน้าที่ 4 มิลลิลิตรในหลอดทดลองและหม้อนึ่งความดันที่ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที เมื่อออกจากหม้อนึ่งความดันให้เอียงด้วยความช่วยเหลือของการสนับสนุนในลักษณะที่วุ้นแข็งตัวในรูปแบบของจุดสูงสุดของฟลุตด้วยพุกเล็กน้อยหรือด้านล่างและมุมเอียงมากขึ้น.
ค่า pH สุดท้ายของตัวกลางซิเตรตคือ 6.9 (สีเขียว) สื่อนี้ไวต่อการเปลี่ยนแปลงค่า pH มาก.
ที่ pH 6 หรือต่ำกว่าตัวกลางจะเปลี่ยนเป็นสีเหลือง ไม่เห็นสีนี้ในการทดสอบกับแบคทีเรีย.
และที่ pH 7.6 หรือสูงกว่าตัวกลางจะเปลี่ยนเป็นสีน้ำเงินเข้มปรัสเซียน.
ใช้
ซิมมอนส์ซิเตรตวุ้นใช้สำหรับการระบุเชื้อจุลินทรีย์บางชนิดโดยเฉพาะแบคทีเรียในตระกูล Enterobacteriaceae และแบคทีเรียอื่นที่ไม่ใช่น้ำตาล.
ข้อพิจารณาสุดท้าย
ซิมมอนส์ซิเตรตขนาดกลางเป็นการทดสอบที่ละเอียดอ่อนมากเพราะสามารถรับผลบวกได้หากเกิดข้อผิดพลาด.
การดูแลที่จะต้องดำเนินการดังต่อไปนี้:
หัวเชื้อ
อย่าทำให้หัวเชื้อแบคทีเรียที่มีความหนาหรือเต็มไปเพราะอาจทำให้เกิดสีเหลืองทองแดงเพื่อพัฒนาในพื้นที่เพาะปลูกโดยไม่ส่งผลกระทบต่อส่วนที่เหลือของสื่อ แต่สามารถนำไปสู่ความเชื่อที่ว่ามีการเติบโต สิ่งเดียวกันไม่ได้หมายถึงความเป็นบวกของการทดสอบ.
ในทำนองเดียวกันหัวเชื้อแบคทีเรียที่มีความหนาสามารถสร้างผลบวกที่ผิดพลาดได้เนื่องจากสารประกอบอินทรีย์ที่ผ่านการเตรียมไว้ล่วงหน้าภายในผนังเซลล์ของแบคทีเรียที่ตายแล้วสามารถปล่อยคาร์บอนและไนโตรเจนเพียงพอ.
ดังนั้นอุดมคติคือการปลูกโดยใช้เข็มแทนการจัดการกับทองคำขาวเพื่อหลีกเลี่ยงการใช้วัสดุส่วนเกิน.
ปลูก
ในทางกลับกันเมื่อแบตเตอรี่ของการทดสอบทางชีวเคมีถูกนำมาใช้เพื่อระบุตัวตนของจุลินทรีย์ในคำถามมันเป็นสิ่งสำคัญที่การทดสอบซิเตรตเป็นครั้งแรกที่จะได้รับการฉีดวัคซีนเพื่อหลีกเลี่ยงการลากโปรตีนหรือคาร์โบไฮเดรตจากสื่ออื่น.
ภายใต้สถานการณ์เช่นนี้เป็นไปได้ที่จะได้รับผลบวกปลอมเนื่องจากสารใด ๆ เหล่านี้ที่นำมาใช้โดยไม่ได้ตั้งใจจะถูกเผาผลาญและทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงค่า pH.
อีกวิธีหนึ่งในการหลีกเลี่ยงการลากของสารคือการเผาที่จับได้ดีและใช้หัวเชื้อใหม่ระหว่างการทดสอบหนึ่งกับอีกการทดสอบหนึ่ง.
ควรใช้ความระมัดระวังเมื่อสัมผัสโคโลนีเพื่อทำการหัวเชื้อเนื่องจากควรหลีกเลี่ยงการลากส่วนหนึ่งของวุ้นจากวัฒนธรรมที่แบคทีเรียมาเนื่องจากการอธิบายก่อนหน้านี้.
ในแง่นี้ Matsen, Sherris และ Branson แนะนำให้เจือจาง inoculum ในสารละลายทางสรีรวิทยาก่อนที่จะทำการทดสอบ citrate เพื่อหลีกเลี่ยงการถ่ายโอนแหล่งคาร์บอนอื่น ๆ.
ความเข้มของสี
จะต้องคำนึงถึงความเข้มของสีที่เกิดขึ้นเมื่อการทดสอบเป็นบวกอาจแตกต่างกันไปตามบ้านในเชิงพาณิชย์.
นอกจากนี้ยังมีจุลินทรีย์ที่ทดสอบเป็นบวกที่ 24 ชั่วโมง แต่มีสายพันธุ์อื่น ๆ ที่ต้องใช้เวลา 48 ชั่วโมงหรือมากกว่านั้นเพื่อสร้างการเปลี่ยนแปลงของค่า pH.
การอ้างอิง
- Mac Faddin J. (2003) การทดสอบทางชีวเคมีสำหรับการจำแนกแบคทีเรียที่มีความสำคัญทางคลินิก วันที่ 3 Panamericana บรรณาธิการ บัวโนสไอเรส อาร์เจนตินา.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด บรรณาธิการ Panamericana S.A. อาร์เจนตินา.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา วันที่ 5 บรรณาธิการ Panamericana S.A. อาร์เจนตินา.
- BD Laboratories BBL ซิมมอนส์ซิเตรต Agar Slants 2558. วางจำหน่ายที่: bd.com
- ห้องปฏิบัติการ Britania ซิมมอนส์ซิเตรตวุ้น 2558 มีจำหน่ายที่: britanialab.com
- ห้องปฏิบัติการวินิจฉัย Valtek ซิมมอนส์ซิเตรตวุ้น 2559 เปิดรับที่: andinamedica.com.