มูลนิธิช็อกโกแลตวุ้น, การใช้และการเตรียม

วุ้นช็อคโกแลต มันเป็นสื่อวัฒนธรรมที่มั่นคงอุดมสมบูรณ์ไม่เลือกและไม่แตกต่างกัน ส่วนใหญ่จะใช้สำหรับการแยกเชื้อจุลินทรีย์ที่เรียกร้องจากมุมมองทางโภชนาการแม้ว่ามันจะสามารถเติบโตของแบคทีเรียชนิดใด.

นั่นคือเหตุผลที่มีประโยชน์เพิ่มขึ้นโดยเฉพาะอย่างยิ่งในการเพาะตัวอย่างที่ปกติปลอดเชื้อเช่นน้ำไขสันหลังและน้ำไขข้อ แม้ว่ามันจะรวมอยู่ในวิธีที่เลือกสำหรับการหว่านตัวอย่าง polymicrobial แต่ในกรณีเหล่านี้มีความจำเป็นต้องเพิ่มยาปฏิชีวนะที่ยับยั้งพืชด้วยกัน.

สื่อนี้มีลักษณะสีน้ำตาลคล้ายกับช็อคโกแลตดังนั้นชื่อของมัน การเตรียมนั้นคล้ายกับวุ้นในเลือดมากในกรณีนี้เลือดจะต้องได้รับความร้อนเพื่อที่เม็ดเลือดแดงจะแตก.

การเตรียมการของมันเช่น agar blood นั้นละเอียดอ่อนมากเนื่องจากมีการปนเปื้อนได้ง่าย ด้วยเหตุนี้ห้องปฏิบัติการหลายแห่งจึงต้องการที่จะได้รับสื่อนี้ที่เตรียมไว้แล้วโดยบ้านพาณิชย์ที่รับประกันคุณภาพ.

ดัชนี

• 1 มูลนิธิ
• 2 ใช้
  • 2.1 Chocolate agar จัดทำขึ้นด้วย Columbia agar
  • 2.2 Chocolate agar ที่เตรียมไว้พร้อมกับ GC base agar (สำหรับ gonococci)
  • 2.3 วุ้นช็อคโกแลตปรุงด้วยMüeller Hinton agar
  • 2.4 Chocolate agar จัดทำขึ้นโดย Thayer Martin agar
• 3 การเตรียมการ
  • 3.1 การคำนวณ
  • 3.2 ชั่งน้ำหนักและละลาย
  • 3.3 ฆ่าเชื้อ
  • 3.4 การรวมตัวของเลือด
  • 3.5 อีกวิธีในการเตรียมช็อกโกแลตวุ้นโดยไม่ใช้เลือด
• 4 การควบคุมคุณภาพ
• 5 อ้างอิง

มูลนิธิ

สื่อนี้ประกอบด้วยฐานของวุ้นที่อุดมไปด้วยสารอาหารและเลือดอุ่น การแตกของเม็ดเลือดแดงทำให้ปัจจัย X (hemin) และปัจจัย V (NAD) ซึ่งจำเป็นสำหรับการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์บางชนิดเช่นสกุล Haemophilus. นอกจากนี้ยังมีประโยชน์อย่างมากสำหรับการแยก Neisserias sp.

เช่นเดียวกับ agar blood สามารถใช้สื่อต่าง ๆ เป็น agar พื้นฐานขึ้นอยู่กับความต้องการ สื่อที่ใช้คือการแช่หัวใจสมองและวุ้นถั่วเหลือง trypticase แม้ว่าที่แนะนำมากที่สุดคือโคลัมเบีย agar, Müeller Hinton, GC agar และ Thayer Martin agar.

ช็อคโกแลตวุ้นบางสายพันธุ์มีผลิตภัณฑ์เสริมอาหารเสริมที่เรียกว่า Isovitalex หรือ Polivitex.

อาหารเสริมเหล่านี้มีวิตามินบี₁₂, L-glutamine, adenine, guanine hydrochloride, กรด p-aminobenzoic, nicotinamide adenine dinucleotide (NAD), ไพรีฟอสเฟต thiamine, ferric nitrate, กรดไฮโดรคลอไรด์, cysteine ​​hydrochloride.

เป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องทราบว่าช็อคโกแลตอาการ์นั้นอุดมไปด้วยมากกว่าวุ้นในเลือด แต่ไม่อนุญาตให้สังเกตรูปแบบภาวะเม็ดเลือดแดงแตก.

การใช้งาน

ช็อกโกแลตวุ้นที่เตรียมไว้กับโคลัมเบียวุ้น

สื่อนี้ประกอบด้วยเคซีนและหัวใจตับอ่อนย่อยเปปไทด์เนื้อสัตว์ที่ย่อย, โซเดียมคลอไรด์, วุ้น, สารสกัดจากยีสต์และแป้งข้าวโพด นอกจากนี้ยังอุดมไปด้วยวิตามินแร่ธาตุและกรดอะมิโนที่จำเป็น.

ฐานนี้มีเลือดอุ่นเหมาะสำหรับการแยกแบคทีเรียในสกุล Neisseria ในทางตรงกันข้ามถ้าหากมีการเพิ่มอาหารเสริมสำหรับ Brucella ลงในอาหารสามารถแยกเชื้อจุลินทรีย์ดังกล่าว ผลลัพธ์จะดีขึ้นโดยใช้เลือดม้า.

ช็อกโกแลตวุ้นเตรียมโดย GC ฐานวุ้น (สำหรับ gonococci)

สื่อนี้ประกอบด้วย peptones, แป้งข้าวโพด, monobasic และ dibasic buffer, โซเดียมคลอไรด์และวุ้น.

ช็อคโกแลตวุ้นที่เตรียมจำหน่ายในเชิงพาณิชย์ส่วนใหญ่จะมาพร้อมกับฐานนี้และไม่มีเลือดอุ่น แต่ส่วนผสมสังเคราะห์ของ hemin และสารเคมีเสริมของปัจจัยการเจริญเติบโต, วิตามิน, เกลือแร่, กรดอะมิโน, ปัจจัย V และกลูโคส.

ช็อกโกแลตวุ้นที่เตรียมไว้ด้วยMüeller Hinton agar

มันถูกใช้เพื่อทำการทดสอบความไวต่อยาต้านจุลชีพของจุลินทรีย์ที่ต้องการเช่น Streptococcus pneumoniae ใช้เลือด ram ที่อุ่นขึ้น 5%.

มันยังทำหน้าที่สำหรับการแยกหลักของ Neisserias และ Haemophilus แต่ในกรณีเฉพาะของการแยก Haemophilus การใช้เลือดม้าเป็นที่ต้องการเนื่องจากเป็นแหล่งที่อุดมไปด้วยปัจจัย X และ V.

ในทางตรงกันข้ามถ้าตัวอย่างที่จะหว่านมาจากพื้นที่ที่ไม่ผ่านการฆ่าเชื้อแนะนำให้เติมยาปฏิชีวนะเพื่อยับยั้งพืชปกติของพื้นที่.

ตัวอย่างการหายใจตัวอย่างที่สงสัยว่ามีแบคทีเรียในสกุลนั้น Haemophilus Bacitracin ใช้ในการยับยั้งการเจริญเติบโตของ Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus และ Saprophytic Neisseria.

ในกรณีของตัวอย่างของอวัยวะเพศแผลริมอ่อนที่มันเป็นที่น่าสงสัย Haemophilus ducreyi, มีการใช้วุ้นช็อคโกแลตที่เตรียมในลักษณะต่อไปนี้แล้ว: วุ้นMüeller-Hinton ที่มีเลือดม้า chocolatized 5%, 1% Isovitalex เพิ่มประสิทธิภาพและ 3 μg / ml vancomycin.

ช็อกโกแลตวุ้นที่เตรียมกับวุ้นเธเออร์มาร์ติน

สื่อนี้มีความพิเศษสำหรับการแยก Neisseria gonorrhoeae. มันจะต้องมียาปฏิชีวนะเพื่อยับยั้งการประกอบพืช ใช้เลือดแกะ.

การจัดเตรียม

สิ่งบ่งชี้สำหรับการเตรียมวุ้นพื้นฐานที่ควรใช้ พวกเขาอยู่ที่ด้านหลังของบรรจุภัณฑ์ที่แห้ง พวกเขามักจะอธิบายว่าควรชั่งน้ำหนักเท่าใดเพื่อเตรียมสื่อวัฒนธรรมหนึ่งลิตร.

ในห้องปฏิบัติการคุณสามารถเตรียมปริมาณที่ต้องการได้อาจมากหรือน้อยกว่าหนึ่งลิตร.

การคำนวณ

มีการสร้างกฎสามข้อเพื่อคำนวณว่าควรชั่งน้ำหนักเท่าใดเพื่อเตรียมปริมาตรที่ต้องการ ตัวอย่างเช่น:

หากจำเป็นต้องมีน้ำหนัก 1 ลิตรต้องมีน้ำหนัก 40 กรัมและห้องปฏิบัติการต้องการ 800 มล. มีการกล่าวถึง:

1,000 มล. -40 กรัม

800 มล. - X

สูตรจะเป็นดังนี้:

X = 32 gr (จำนวนน้ำหนัก 800 มล.).

ชั่งน้ำหนักและละลาย

เราทำการชั่งน้ำหนักที่จำเป็นและวางลงใน Fiola ด้วยน้ำ.

ความร้อนความร้อนปานกลางและผสมเบา ๆ กับการเคลื่อนไหวแบบหมุนจนสื่อที่ถูกคายน้ำละลายหมดทิ้งให้เดือดประมาณ 1 นาที.

ฆ่าเชื้อ

Fiola ถูกนำเข้าสู่หม้อนึ่งความดันเพื่อฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 20 นาที.

เลือดรวมกัน

เมื่อปล่อยให้หม้อนึ่งความดันถูกปล่อยให้เหลือจนกว่าอุณหภูมิของสื่อจะอยู่ระหว่าง 56 ถึง 70 ° C เพื่อวางเลือดและผสมจนกระทั่งสื่อเปลี่ยนเป็นสีน้ำตาล.

หากคุณกำลังจะเพิ่มอาหารเสริมนี่เป็นเวลาที่จะทำ จากนั้นผสมและบริการ 20 มล. ต่อจานเพาะเชื้อแต่ละชนิด.

ขั้นตอนทั้งหมดจะต้องดำเนินการในฮูดไหลแบบราบเรียบหรือรอบหัวเผาบุนเซน.

ปล่อยให้ยืนจนกว่าจะแข็งตัวและเก็บไว้ในตู้เย็น.

อีกวิธีในการเตรียมช็อกโกแลตวุ้นโดยไม่ใช้เลือด

สื่อฐานถูกเตรียมตามที่อธิบายไว้ข้างต้นฮีโมโกลบินที่ได้รับในเชิงพาณิชย์จะถูกละลายและฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดัน.

วิธีแก้ปัญหาทั้งสองได้รับอนุญาตให้เย็นถึง 50 ° C เข้าร่วมและเพิ่มอาหารเสริม ผสมในสภาพปลอดเชื้อแล้วเสิร์ฟในจานเลี้ยงเชื้อปลอดเชื้อ.

การควบคุมคุณภาพ

มันเป็นสิ่งสำคัญที่เลือดจะถูกวางไว้ที่อุณหภูมิที่ระบุเพราะมันเป็นสิ่งที่ดีในการ lyse เซลล์เม็ดเลือดแดงและในเวลาเดียวกันรักษาปัจจัย V ที่เป็นความร้อน.

ไม่ควรมีฟองอากาศบนพื้นผิวของวุ้น แต่ละชุดของ 100 แผ่นควรจะบ่มหนึ่งหรือสองแผ่นในเตาที่ 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมงเพื่อตรวจสอบความเป็นหมัน.

เพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่ดีที่สุดควรใช้ช็อกโกแลตวุ้นหลังจากการเตรียม.

สายพันธุ์แบคทีเรียควบคุมควรถูกนำไปใช้ในห้องปฏิบัติการเพื่อประเมินประสิทธิภาพของอาหารที่เตรียมสดใหม่สำหรับการเจริญเติบโตของเชื้อจุลินทรีย์ที่มีความต้องการหลักที่มีความสำคัญทางคลินิก.

การอ้างอิง

1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994) จุลชีววิทยาคลินิกภาคปฏิบัติ มหาวิทยาลัยกาดิซรุ่นที่ 2 บริการสิ่งพิมพ์ UCA.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด อาร์เจนตินา Panamericana S.A บทบรรณาธิการ.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา (ฉบับที่ 5) อาร์เจนตินา, Panamericana บรรณาธิการ.
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. ความเป็นไปได้ของการใช้สื่อการเลี้ยงพื้นฐานของ GC-Biocen Agar ในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยา. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238 วางจำหน่ายที่: scielo.sld.
5. ผู้มีส่วนร่วมใน Wikipedia ช็อกโกแลตวุ้น Wikipedia, สารานุกรมเสรี 17 ธันวาคม 2018, 19:54 UTC วางจำหน่ายแล้วที่: en.wikipedia.org.