รากฐาน Baird Parker Agar การเตรียมและการใช้งาน

บาร์ดปาร์กเกอร์วุ้น มันเป็นสื่อวัฒนธรรมที่มั่นคงเลือกและแตกต่างกัน มันถูกสร้างขึ้นในปี 1962 สำหรับการตรวจสอบและการนับ coagulase บวก Staphylococcus นับ (เชื้อ Staphylococcus aureus).

ประกอบด้วยเคซีนไฮโดรไลเสตในตับอ่อนเคซีนสารสกัดจากเนื้อยีสต์ลิเธียมคลอไรด์ glycine โซเดียมไพรูเวตโพแทสเซียมเทลลูไรต์วุ้นและไข่แดงอิมัลชัน.

Baird Parker agar นั้นขึ้นอยู่กับความสามารถของ S. aureus ของการลดลลูไรท์และการผลิตเลซิติน คุณสมบัติทั้งสองสร้างอาณานิคมที่มีลักษณะเฉพาะสำหรับสายพันธุ์นี้ ดังนั้นจึงมีประสิทธิภาพที่ดีเยี่ยมในการตรวจจับจุลินทรีย์นี้.

อาณานิคมทั่วไปของ S. aureus พวกเขาเป็นสีดำหรือสีเทาเข้มมีขอบไม่มีสีและรัศมีชัดเจนที่ล้อมรอบพวกเขาแตกต่างจากส่วนที่เหลือของจุลินทรีย์ เชื้อนี้สามารถพบได้ในตัวอย่างทางคลินิกน้ำเครื่องสำอางและอาหารดิบหรืออาหารปรุงสุก.

การวินิจฉัยหรือการตรวจพบมีความสำคัญมากเนื่องจากความหลากหลายของโรคที่ผลิตเช่นอาหารเป็นพิษ, โรคผิวหนังลวก, โรคช็อกพิษ, ฝี, เยื่อหุ้มสมองอักเสบ, เยื่อหุ้มสมองอักเสบ, ภาวะโลหิตเป็นพิษ, เยื่อบุหัวใจอักเสบ, และอื่น ๆ.

ดัชนี

• 1 มูลนิธิ
  • 1.1 พลังทางโภชนาการ
  • 1.2 การคัดเลือก
  • 1.3 ส่วนต่าง
• 2 การเตรียมการ
  • 2.1 อิมัลชันไข่แดง
  • 2.2 โพแทสเซียมเทลไรท์ที่ 1% w / v
  • 2.3 การเตรียมสื่อการเลี้ยง
• 3 ใช้
  • 3.1 ตัวอย่างทางคลินิก
  • 3.2 ตัวอย่างอาหาร
  • 3.3 ตัวอย่างน้ำ
• 4 การควบคุมคุณภาพ
• 5 ข้อเสนอแนะ
• 6 อ้างอิง

มูลนิธิ

พลังงานมีคุณค่าทางโภชนาการ

เคซีนตับอ่อนไฮโดรไลเสต, สารสกัดจากเนื้อสัตว์และสารสกัดจากยีสต์เป็นแหล่งของสารอาหาร, วิตามินและแร่ธาตุที่จำเป็นสำหรับการพัฒนาจุลินทรีย์ทั่วไปในขณะที่ไพรูเวตและไกลซีนเป็นสารประกอบที่เอื้อต่อการเจริญเติบโตของ เชื้อ Staphylococcus aureus.

เลือก

Baird Parker agar นั้นคัดเลือกได้เนื่องจากมีสารที่ยับยั้งการเติบโตของพืชที่มาพร้อมกับการส่งเสริมการพัฒนาของ S. aureus. สารยับยั้งคือลิเธียมคลอไรด์และโพแทสเซียมเทลลูไรท์.

ค่า

วิธีนี้ช่วยให้สามารถแยก S. aureus ของส่วนที่เหลือของ coagulase ลบ Staphylococci. S. aureus มีความสามารถในการลดเทลลูไรต์เป็นเทลลูเรียมฟรีที่เป็นโลหะดำทำให้เกิดโคโลนีสีดำหรือเทาเข้ม.

ในทำนองเดียวกันไข่แดงจะให้พื้นผิวเพื่อพิสูจน์ว่ามีเอนไซม์ lecithinase และไลเปส. S. aureus มันเป็น lecithinase ที่เป็นบวกและดังนั้นจึงจะสังเกตเห็นรัศมีที่ชัดเจนรอบ ๆ อาณานิคมแสดงให้เห็นว่าเลซิตินนั้นถูกไฮโดรไลซ์.

ในแง่นี้ลักษณะที่ปรากฏในวุ้นของอาณานิคมสีดำหรือสีเทาเข้มที่มีรัศมีแสงรอบ ๆ บ่งบอกถึงการปรากฏตัวของ S. aureus. 

หากมีการตกตะกอนโซนมันแสดงว่ามีเอนไซม์ไลเปส บางสายพันธุ์ S. aureus มันเป็นไลเปสที่เป็นบวกและลบอื่น ๆ.

ในกรณีที่ S. aureus หากไลเปสเป็นบวกจะมีการสังเกตบริเวณทึบแสงรอบ ๆ อาณานิคมสีดำหรือสีเทาเข้มและจากนั้นรัศมีที่ชัดเจนเนื่องจากการกระทำของเลซิติน.

อาณานิคมของแบคทีเรียอื่นที่ไม่ใช่ S. aureus สามารถเจริญเติบโตได้ในอาหารเลี้ยงเชื้อนี้จะพัฒนาโคโลนีที่ไม่มีสีหรือสีน้ำตาลโดยไม่มีรัศมี.

อาณานิคมสีดำผิดปกติสามารถสังเกตได้ว่ามีหรือไม่มีขอบไม่มีสี แต่ไม่มีรัศมีชัดเจน ไม่ควรคำนึงถึงอาณานิคมเหล่านี้ แต่ไม่สอดคล้องกัน S. aureus.

การจัดเตรียม

อิมัลชั่นไข่แดง

นำไข่ไก่สดล้างให้สะอาดแล้ววางไว้ 2 ถึง 3 ชั่วโมงในแอลกอฮอล์ 70% จากนั้นไข่จะเปิดอย่างปลอดเชื้อและไข่ขาวจะถูกแยกออกจากไข่แดงอย่างระมัดระวัง หลังจากนั้นนำไข่แดง 50 มล. มาผสมกับสารละลายทางสรีรวิทยาที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว 50 มล.

โพแทสเซียมเทลไรท์ที่ 1% w / v

บ้านเชิงพาณิชย์บางแห่งขาย potur tellurite โพแทสเซียม 1% พร้อมใช้ มันถูกเพิ่มไปยังสื่อก่อนที่สื่อจะแข็งตัว.

ในการจัดทำสารละลายนี้ในห้องปฏิบัติการมีน้ำหนักโพแทสเซียมเทลลูไรท์ 1.0 กรัมและละลายในส่วนของน้ำ หลังจากนั้นปริมาณของน้ำจะเสร็จสมบูรณ์ถึง 100 มล. วิธีการแก้ปัญหาจะต้องผ่านการฆ่าเชื้อโดยวิธีการกรอง.

การเตรียมสื่อการเลี้ยง

มีน้ำหนัก 60 กรัมของตัวกลางที่ถูกทำให้แห้งและละลายในน้ำกลั่น 940 มล. ทิ้งส่วนผสมที่เหลือประมาณ 5 ถึง 10 นาที.

ใช้ความร้อนโดยการกวนสื่อบ่อย ๆ เพื่อปรับปรุงกระบวนการละลาย ให้เดือดประมาณหนึ่งนาที ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที.

รอจนกระทั่งอุณหภูมิ 45 ° C แล้วเติมอิมัลชั่นไข่แดง 50 มล. และเทลลูไรท์ 1% 10 มิลลิลิตร ผสมให้เข้ากันและให้บริการ 15 ถึง 20 มล. บนจานเพาะเชื้อที่ปลอดเชื้อ.

อนุญาตให้แข็งสั่งคว่ำใน plaquers และเก็บในตู้เย็นจนกว่าจะใช้.

ค่า pH สุดท้ายของสื่อที่เตรียมควรอยู่ที่ 6.8 ± 0.2.

ก่อนปลูกตัวอย่างให้รอจนกระทั่งแผ่นใช้อุณหภูมิโดยรอบ หว่านแผ่นโดยการปอกหรือหว่านบนพื้นผิวด้วยไม้พาย Drigalski.

สีของตัวกลางที่ถูกคายน้ำคือสีแทนและสีของตัวกลางที่เตรียมไว้คือ.

ใช้

ตัวอย่างทางคลินิก

ตัวอย่างทางคลินิกมีเมล็ดโดยตรงโดยการปล่อยส่วนหนึ่งของวัสดุที่ปลายด้านหนึ่งของแผ่นและจากนั้นมันจะปรากฏออกมาด้วยความอ่อนเพลีย ฟักไข่เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมงที่ 35-37 °ซ.

ตัวอย่างอาหาร

ตัวอย่างอาหารที่มีน้ำหนัก 10 กรัมและเป็นเนื้อเดียวกันใน 90 มล. ของน้ำบริสุทธิ์ peptonated 0.1% จะมีการเจือจางจากที่นั่นหากจำเป็น ฉีดเชื้อแผ่นสามเท่าด้วยสารละลาย 0.3 มล. ที่เตรียมไว้และหว่านบนพื้นผิวด้วยไม้พาย Drigalski ฟักไข่เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมงที่ 35-37 °ซ.

วิธีการนี้ช่วยให้สามารถนับจำนวนอาณานิคมทั่วไปที่ได้รับและเป็นอุดมคติเมื่อมี S. aureus สูงกว่า 10 CFU ต่อตัวอย่าง g / ml.

หากคุณสงสัยว่ามีปริมาณ S. aureus มันมีขนาดเล็กหรือมีพืชจำนวนมากแนะนำให้เพิ่มปริมาณตัวอย่างในน้ำซุปถั่วเหลือง tripticase ที่มี NaCl 10% และโซเดียม pyruvate 1% สิ่งนี้จะเป็นประโยชน์ต่อการเติบโตของ S. aureus และจะยับยั้งการพัฒนาของพืชที่มาพร้อมกัน หลอดที่มีเมฆมากจะได้รับการเพาะเชื้อบน Baird Parker agar.

ตัวอย่างน้ำ

ในระบบการกรองสูญญากาศและผ่านการฆ่าเชื้อน้ำ 100 มล. จะถูกกรองแล้วเมมเบรน microporous 0.4 ไมครอนจะถูกลบออกด้วยแคลมป์ปลอดเชื้อและวางไว้บนแผ่นแบร์ร์ปาร์กเกอร์ ฟักไข่เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมงที่ 35-37 องศาเซลเซียส เทคนิคนี้ช่วยให้การนับอาณานิคมทั่วไปของ S. aureus.

การควบคุมคุณภาพ

ในการประเมินคุณภาพของ Baird Parker agar สามารถใช้สายพันธุ์ที่รู้จักเช่น เชื้อ Staphylococcus aureus ATCC 25923, เชื้อ Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 หรือ โพรทูส mirabilis ATCC 43071.

ในกรณีของสายพันธุ์ของ S. aureus ATCC นั้นเป็นที่รู้จักกันในการลด tellurite และพวกมันคือ lipase และ lecithinase ที่เป็นบวก ดังนั้นจะต้องมีการพัฒนาที่น่าพอใจและการเติบโตของอาณานิคมนูนที่มีจุดศูนย์กลางสีดำและไม่มีขอบสีด้วยรัศมีทึบแสงและรัศมีอื่นชัดเจนมากขึ้น.

ในทางกลับกัน S. epidermidis คาดว่าจะมีการพัฒนาที่ไม่ดีในสื่อนี้โดยมีอาณานิคมสีเทาน้ำตาลถึงดำไม่มีรัศมีชัดเจน.

ไปยัง อี. โคไล และ P. mirabilis คาดว่าจะถูกยับยั้งทั้งหมดหรือบางส่วน ในกรณีของการเจริญเติบโตอาณานิคมสีน้ำตาลจะพัฒนาโดยไม่มีเขตทึบแสงหรือรัศมีที่ชัดเจน.

คำแนะนำ

-ไม่ควรให้ความร้อนปานกลางหลังจากเติมเทลลูไรท์และไข่แดง.

-การเตรียมอิมัลชันไข่แดงและการเติมในสื่อกลางเป็นขั้นตอนที่มีความเสี่ยงสูงต่อการปนเปื้อน ต้องใช้ความระมัดระวังอย่างมาก.

-หากมีการปรากฏตัวของอาณานิคมทั่วไปของ S. aureus จะต้องได้รับการยืนยันโดยการติดตั้งการทดสอบ coagulase กับสายพันธุ์ดังกล่าว.

-หากมีข้อสงสัยเกี่ยวกับ coagulase จะต้องทำการทดสอบเพื่อยืนยันอื่น ๆ.

-ระวังอย่าให้สับสนกับการปรากฏตัวของอาณานิคมทั่วไปของ S. aureus กับอาณานิคมที่ผิดปกติของสีดำ.

การอ้างอิง

1. ผู้มีส่วนร่วมใน Wikipedia แบร์ร์ - ปาร์กเกอร์วุ้น Wikipedia, สารานุกรมเสรี 15 มีนาคม 2017, 19:36 UTC สามารถใช้ได้ที่: wikipedia.org/ เข้าถึง 18 กุมภาพันธ์ 2019.
2. BD Laboratories แบร์ร์ปาร์กเกอร์อะการ์ 2549 จำหน่ายที่: bd.com
3. ห้องปฏิบัติการ Britania แบร์อาร์กเกอร์ฐานวุ้น 2558 มีจำหน่ายที่: britanialab.com
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2552. แบร์ดปาร์กเกอร์อะการ์ วางจำหน่ายแล้วที่: http://f-soria.es/Inform
5. ห้องปฏิบัติการ Britania โพแทสเซียมเทลไรต์ 2558 มีจำหน่ายที่: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Carrying เชื้อ Staphylococcus aureus enterotoxigenic ประเภท A ในรอยเปื้อนโพรงหลังจมูกในตัวจัดการอาหาร. Rev Med ชิลี 2017; 145: 1559-1564
7. เวเนซุเอลา Covenin มาตรฐาน 1292-89 (1989) อาหาร การแยกและการนับ เชื้อ Staphylococcus aureus. ที่มีอยู่ใน:sencamer.gob.ve