การเตรียมและใช้ประโยชน์จากน้ำเปปโตน

น้ำ peptonada มันเป็นสื่อการตกแต่งของเหลวที่ไม่เลือกใช้ส่วนใหญ่ใช้เป็นเจือจางสำหรับตัวอย่างอาหารหรือวัสดุอื่น ๆ ซึ่งหมายความว่าจากมุมมองทางเคมีนั้นง่ายมากประกอบด้วยเปปโตนของเนื้อสัตว์โซเดียมคลอไรด์และน้ำ.

มันมีคุณค่าทางโภชนาการบางอย่างที่ช่วยให้ตัวอย่างที่อุดมไปด้วย หากมีแบคทีเรียที่ทารุณหมายถึงมีอำนาจในการซ่อมแซมความมีชีวิต มันมีประโยชน์อย่างยิ่งในการฟื้นตัวของแบคทีเรียที่เป็นของครอบครัว Enterobacteriaceae.

ในกรณีของการกู้คืนของ Salmonellas แนะนำให้ใช้ตัวแปร peptonada water buffered สิ่งนี้ทำหน้าที่เป็นวิธีการเตรียมตัวก่อนการเสริมตัวอย่างในกรณีนี้มันมีองค์ประกอบอื่น ๆ เช่น disodium ฟอสเฟตและไดโพแทสเซียมฟอสเฟต.

โดยทั่วไปแล้วน้ำ peptonada จะเตรียมที่ pH เป็นกลาง แต่มีสายพันธุ์อื่นที่จำเป็นต้องมีค่า pH เท่ากับ 8.5 ± 0.2 (อัลคาไลน์) เนื่องจากแบคทีเรียที่จะถูกแยกออกเป็นด่างนั้นเป็นตัวอย่างเช่น Vibrio cholerae.

ในทางตรงกันข้ามสื่อนี้สามารถใช้เป็นสื่อกลางในการทดสอบการหมักคาร์โบไฮเดรต.

ดัชนี

• 1 มูลนิธิ
• 2 การเตรียมการ
  • 2.1 การเตรียมที่บ้าน (ไม่ใช่เชิงพาณิชย์)
  • 2.2 การเตรียมโดยใช้สื่อการค้า
  • 2.3 การเตรียมการสำหรับการทดสอบการหมัก
  • 2.4 ตัวแปรอื่น ๆ ของน้ำ peptonada
• 3 ใช้
  • 3.1 ตัวอย่างอุจจาระ
  • 3.2 ตัวอย่างอาหาร
• 4 การควบคุมคุณภาพ
• 5 ข้อ จำกัด
• 6 อ้างอิง

มูลนิธิ

Peptones ให้สารอาหารที่จำเป็นสำหรับการพัฒนาแบคทีเรียโดยเฉพาะอย่างยิ่งไนโตรเจนและกรดอะมิโนโซ่สั้นในขณะที่โซเดียมคลอไรด์รักษาสมดุลของออสโมติก.

นอกจากนี้สื่อยังช่วยให้แยกย้ายกันทำให้เป็นเนื้อเดียวกันและซ่อมแซมเซลล์แบคทีเรียที่ได้รับความเสียหายจากกระบวนการทางอุตสาหกรรม.

เนื่องจากเป็นตัวเจือจางจึงเหมาะอย่างยิ่งที่จะแทนที่โซลูชันทางสรีรวิทยา (SSF) หรือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (PBS) ได้อย่างมีประสิทธิภาพ.

การเจริญเติบโตของแบคทีเรียมีความชัดเจนโดยการสังเกตความขุ่นของมัน.

การจัดเตรียม

การเตรียมแบบโฮมเมด (ไม่ใช่เชิงพาณิชย์)

เปปโตนขนาด 1 กรัมและโซเดียมคลอไรด์ 8.5 กรัมละลายในน้ำกลั่น 1 ลิตร ควรปรับค่า pH เป็น 7.0 สำหรับสิ่งนี้คุณสามารถใช้ 1 N โซเดียมคลอไรด์.

การเตรียมโดยใช้สื่อการค้า

น้ำหนัก 15 กรัมของตัวกลางที่ถูกทำให้แห้งและละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร ผสมส่วนผสม หากจำเป็นส่วนผสมจะถูกต้มเป็นเวลา 1 นาทีเพื่อช่วยในการละลายทั้งหมด เสิร์ฟในขวด 100 มล. หรือในหลอด 10 มล. ตามต้องการ Autoclave ที่ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที.

เย็นและใช้หรือเก็บในตู้เย็น ค่า pH สุดท้ายของสื่อคือ 7.2 ± 0.2.

สีของสื่อที่ถูกคายน้ำคือสีเบจอ่อนและเตรียมเป็นสีเหลืองอ่อน.

การเตรียมการสำหรับการทดสอบการหมัก

สำหรับการเตรียมก่อนหน้า - ก่อนที่จะฆ่าเชื้อ - ควรเพิ่มคาร์โบไฮเดรตในความเข้มข้นสุดท้ายที่ 1% รวมทั้งตัวบ่งชี้ Andrade (กรดฟุชชิน) หรือฟีนอลสีแดง (0.018 กรัม / ลิตร) ควรวางระฆังเดอแรมเพื่อตรวจสอบการก่อตัวของก๊าซบนท่อ.

สายพันธุ์น้ำ peptonada อื่น ๆ

-น้ำเปปโตนบัฟเฟอร์หรือบัฟเฟอร์

มันมีเคซีนเอนไซม์ไฮโดรไลเสท, โซเดียมคลอไรด์, โพแทสเซียม dihydrogen ฟอสเฟตและโซเดียมไฮโดรเจนฟอสเฟต dodecahydrate ค่า pH สุดท้ายคือ 7.0 ± 0.2.

สำหรับการเตรียมการนั้นให้ชั่งน้ำหนัก 20 กรัมของอาหารแห้งและละลายในน้ำกลั่น 1 ลิตร ให้ยืนประมาณ 5 นาทีโดยประมาณ ความร้อนเป็นเวลา 1 นาทีจนละลายอย่างสมบูรณ์.

เทลงในขวดที่เหมาะสมตามต้องการ ฆ่าเชื้อโดยใช้หม้อนึ่งความดันที่ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที.

-น้ำอัลคาไลน์ peptoned

น้ำหนัก 25 กรัมของตัวกลางที่ถูกทำให้แห้งและละลายในน้ำ 1 ลิตร ดำเนินการต่อตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ค่า pH อยู่ในช่วง 8.3 ถึง 8.7.

ใช้

หัวเชื้อจะทำโดยการวางตัวอย่างโดยตรง.

มันถูกใช้เพื่อเจือจางตัวอย่างโดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อสงสัยว่าอาจมีแบคทีเรียที่เสียหาย โดยทั่วไปแล้วการเจือจางคือ 1:10 และ 1: 100.

ฟักไข่เป็นเวลา 24 ชั่วโมงในแอโรบิคที่อุณหภูมิ 35-37 °ซ.

ตัวอย่างอุจจาระ

สำหรับตัวอย่างอุจจาระที่มองหาเชื้อซัลโมเนลลาแนะนำให้ใช้น้ำที่มีบัฟเฟอร์หรือบัฟเฟอร์เป็นสื่อกลางในการเสริมคุณค่าก่อน.

เมื่อต้องการทำสิ่งนี้ให้ทำดังนี้:

หากอุจจาระเกิดขึ้นให้นำตัวอย่าง 1 กรัม หากเป็นของเหลวให้ใช้อุจจาระ 1 มิลลิลิตรแล้วพักในหลอดที่มีน้ำ peptonated บัฟเฟอร์ 10 มล. ในกรณีของไม้กวาดทางทวารหนักให้ปล่อยวัสดุที่มีอยู่ในไม้กวาดลงในหลอดด้วยน้ำ peptonated บัฟเฟอร์.

ในทุกกรณีผสมและทำให้ตัวอย่างเป็นเนื้อเดียวกันอย่างดี.

ฟักไข่ที่ 37 ° C เป็นเวลา 18 ถึง 24 ชั่วโมง ต่อจากนั้นทำการย่อยในน้ำซุปที่เสริมคุณค่าเช่นซีลีนซีสตีนน้ำซุปหรือน้ำซุปเตตราเธโอเนตที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18-24 ชั่วโมง ในที่สุดก็พัฒนาในสื่อที่เลือกสรรสำหรับ Salmonella เช่น SS agar, XLD agar, Hektoen agar และอื่น ๆ.

ตัวอย่างอาหาร

น้ำเปปโตนถูกใช้เป็นสื่อกลางในการเพิ่มคุณค่าหรือเป็นสารเจือจางอย่างง่าย แต่ถ้ามีการค้นหาสายพันธุ์ของเชื้อซัลโมเนลล่ามันจะถูกใช้เป็นสื่อกลางในการตกแต่งก่อนหน้า.

ในอาหารดำเนินการดังนี้:

สำหรับอาหารแข็งมีน้ำหนัก 25 กรัมของตัวอย่างและสำหรับอาหารเหลววัดได้ 25 มล. สถานที่กล่าวว่าส่วนหนึ่งในขวดที่มีน้ำกลั่น 225 มล. ผสมและทำให้เป็นเนื้อเดียวกันตัวอย่าง.

หากมีข้อสงสัยว่าโหลดของจุลินทรีย์คือการเจือจางอนุกรมสูงหรือทศนิยมสามารถทำได้เพื่ออำนวยความสะดวกในการนับหน่วยการขึ้นรูปโคโลนี (CFU).

จำนวนการเจือจางจะขึ้นอยู่กับประเภทของตัวอย่างและประสบการณ์การวิเคราะห์.

หากสงสัยว่าโหลดของจุลินทรีย์ต่ำมากก็ไม่จำเป็นต้องทำให้เจือจาง จากนั้นทำการซับในสื่อที่เลือก.

ในกรณีของอาหารจากทะเลเช่นอาหารทะเลปลาและอื่น ๆ ในการค้นหา Vibrio cholerae หรือสายพันธุ์ Vibrio อื่น ๆ ควรใช้น้ำเปปโตนในการปรับค่า pH 8.5 (น้ำอัลคาไลน์ peptonated).

การควบคุมคุณภาพ

จากแต่ละชุดที่เตรียมไว้หลอดหนึ่งถึงสองควรถูกบ่มโดยไม่ต้องฉีดวัคซีนเป็นเวลา 24 ชั่วโมงในแอโรบิคที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เมื่อสิ้นสุดเวลาไม่ควรสังเกตความขุ่นหรือการเปลี่ยนสี.

นอกจากนี้ยังมีการใช้สายพันธุ์ควบคุมที่รู้จักกันดีในการประเมินประสิทธิภาพ:

สำหรับสิ่งนี้แบคทีเรียสายพันธุ์ต่อไปนี้สามารถใช้ได้: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, เชื้อ Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, เชื้อ Salmonella enteritidis ATCC 13076.

ในทุกกรณีคาดว่าจะมีการพัฒนาของจุลินทรีย์ที่น่าพอใจซึ่งสังเกตได้จากความขุ่นของตัวกลาง.

ข้อ จำกัด

-สื่อที่ถูกคายน้ำจะดูดความชื้นอย่างมากดังนั้นจึงควรเก็บไว้ให้ห่างจากความชื้น.

-ไม่ควรใช้สื่อนี้หากสังเกตการเสื่อมสภาพบางประเภท.

-ควรเก็บอาหารเลี้ยงเชื้อไว้ที่อุณหภูมิระหว่าง 10 - 35 °ซ

-สื่อที่เตรียมไว้ควรเก็บในตู้เย็น (2-8 ° C).

การอ้างอิง

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B และVelázquez O. เทคนิคสำหรับการวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาของอาหาร 2552, 2nd ed. คณะเคมี UNAM เม็กซิโก เวอร์ชั่นสำหรับผู้ดูแลระบบของคู่มือและเอกสาร (AMyD) ของคณะเคมี UNAM 1. มีให้ที่: http://depa.fquim.unam.mx
2. ห้องปฏิบัติการ Britania น้ำ peptonada ที่ถูกบัฟเฟอร์ 2558 มีจำหน่ายที่: britanialab.com
3. Neogen Laboratories น้ำเปปโตน มีจำหน่ายที่: foodsafety.neogen.com
4. ห้องปฏิบัติการ Britania น้ำเปปโตน 2558 มีจำหน่ายที่: britanialab.com
5. ห้องปฏิบัติการของเมอร์ค น้ำเปปโตนบัฟเฟอร์ วางจำหน่ายที่: merckmillipore.com
6. Laboratories Conda Pronadisa น้ำอัลคาไลน์ peptoned วางจำหน่ายที่: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด บรรณาธิการ Panamericana S.A. อาร์เจนตินา.