รากฐานครึ่ง SIM การเตรียมและการใช้งาน

ครึ่งซิม มันเป็นวุ้นกึ่ง semisolid และอนุพันธ์ออกแบบมาเป็นพิเศษเพื่อช่วยในการระบุแบคทีเรียบางชนิดส่วนใหญ่ของตระกูล Enterobacteriaceae มันประกอบด้วย triptein, เปปโตน, เหล็กซัลเฟต, แอมโมเนียมซัลเฟต, โซเดียมไธโอซัลเฟตและวุ้น.

สื่อนี้อนุญาตให้ทำการทดสอบที่สำคัญสามครั้ง: การผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์ (H)₂S) การก่อตัวของอินโดลและการเคลื่อนที่ดังนั้นตัวย่อของซิม เนื่องจากมีประโยชน์อย่างมากจึงไม่สามารถขาดได้ในห้องปฏิบัติการแบคทีเรีย.

ซึ่งแตกต่างจากสื่ออื่น ๆ สิ่งนี้จะต้องมีลักษณะกึ่งของแข็งเพื่อให้สามารถตรวจจับความเคลื่อนไหวของแบคทีเรียบางตัวได้ ในแง่นี้การทดสอบนี้ทำงานได้ดีมากสำหรับ Enterobacteriaceae แต่ไม่ได้อยู่ในแบคทีเรียแกรมลบและไม่หมักซึ่งเป็นที่ต้องการใช้วิธีอื่นเช่นหยดที่ค้างอยู่.

สื่อ SIM ช่วยให้สามารถแยกแยะคุณสมบัติเฉพาะบางอย่างที่ทำให้แบคทีเรียบางตัวมีความสัมพันธ์กับคุณสมบัติอื่นได้ ตัวอย่างเช่น Escherichia coli มันโดดเด่นด้วยการเป็น H₂S (-), Indole (+) และ motility (+) ในขณะที่ โพรทูส mirabilis มันคือเอช₂S (+), indole (-), motility (+).

ดัชนี

• 1 มูลนิธิ
  • 1.1 แหล่งพลังงาน
  • 1.2 การผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์
  • 1.3 การก่ออินโดล
  • 1.4 การเคลื่อนไหว
• 2 การเตรียมการ
  • 2.1 Half SIM
  • 2.2 น้ำยาของ Kovac
  • 2.3 น้ำยา Erlich
• 3 ใช้
  • 3.1 Seeded
• 4 การควบคุมคุณภาพ
• 5 ข้อ จำกัด
• 6 อ้างอิง

มูลนิธิ

มันเป็นสื่อการเพาะเลี้ยงที่ถือว่าแตกต่างเพราะการใช้มันสามารถแยกแยะระหว่างจุลินทรีย์ที่สามารถผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์จากสิ่งที่ไม่ได้; นอกจากนี้ยังเน้นถึงสิ่งที่ก่อให้เกิดอินโดลจากทริปโตเฟนของสิ่งที่ไม่ได้ก่อตัวและท้ายที่สุดก็แยกแยะแรงจูงใจจากแบคทีเรียที่เคลื่อนที่ไม่ได้.

แหล่งพลังงาน

ในฐานะที่เป็นสื่อการเพาะเลี้ยงใด ๆ มันมีองค์ประกอบที่ให้สารอาหารที่จำเป็นเพื่อให้จุลินทรีย์ที่ไม่ต้องการสามารถพัฒนาได้ องค์ประกอบเหล่านี้แสดงโดย peptones และtripteína.

การพัฒนาของจุลินทรีย์ในสภาพแวดล้อมเป็นสิ่งจำเป็นที่จะสามารถสังเกตเห็นว่ามีหรือไม่มีลักษณะที่ประเมินโดยสื่อนี้.

ผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์

ตัวอักษร S ของคำย่อ SIM หมายถึงการผลิตไฮโดรเจนซัลไฟด์ (H)₂S) แบคทีเรียที่มีความสามารถในการสร้างไฮโดรเจนซัลไฟด์จะใช้ซัลเฟอร์ของโซเดียมไธโอซัลเฟต.

เมื่อ H ถูกสร้างขึ้น₂S - ก๊าซไม่มีสี - สิ่งนี้ทำปฏิกิริยากับเกลือเหล็กที่มีอยู่ในตัวกลางก่อตัวเป็นเหล็กซัลไฟด์มองเห็นได้ชัดเจน (ตะกอนสีดำ) แบคทีเรียที่ไม่ก่อตัว H₂S ทิ้งไว้ตรงกลางของสีเดิม (สีเบจ).

การปรากฏตัวของตะกอนสีดำสามารถขัดขวางการตีความของการเคลื่อนไหว อย่างไรก็ตามเป็นที่รู้จักกันว่าส่วนใหญ่ของ enterobacteria H- ผลิต₂S คือการเคลื่อนไหวในเชิงบวกเช่น Salmonella, Proteus และ Citrobacter นอกจากนี้การตกตะกอนสีดำที่ครอบคลุมเกือบทุกสื่อแสดงให้เห็นการเคลื่อนไหวในเชิงบวก.

การฝึกอบรมอินโดล

อักษรตัวที่สองของ SIM ย่อมาจาก "I" ซึ่งหมายถึงการก่อตัวของอินโดล.

ในแง่นี้tripteínaนอกเหนือจากการเป็นแหล่งของสารอาหารแล้วยังมีฟังก์ชั่นพื้นฐานอื่น ๆ เปปโตนนี้อุดมไปด้วยกรดอะมิโนที่เรียกว่าทริปโตเฟนดังนั้นมันสามารถแสดงแบคทีเรียที่ผลิตทริปโตเฟน.

เอนไซม์นี้มีหน้าที่ในการตัดกรดอะมิโนทริปโตเฟนด้วยการก่อตัวของอินโดล (สารไม่มีสี) กรด pyruvic และแอมโมเนียม.

นั่นคือเหตุผลที่แสดงให้เห็นถึงปฏิกิริยานี้มีความจำเป็นต้องเพิ่มสารที่เปิดเผย (Ehrlich reagent หรือ reagent ของ Kovac) ไม่ว่าจะมีปฏิกิริยากับอินโดลหรือก่อตัวเป็นสารสีแดง - แดงบานเย็นรูปวงแหวนบนพื้นผิวของวุ้น หากแหวนสีแดงม่วงปรากฏขึ้นการทดสอบอินโดลจะถูกตีความว่าเป็นบวก.

แบคทีเรียที่ไม่มีเอนไซม์นี้จะไม่ก่อวงและถูกตีความว่าเป็นการทดสอบอินโดลเชิงลบ.

เป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องชี้ให้เห็นว่าการทดสอบอินโดลควรจะเป็นครั้งสุดท้ายที่จะถูกตีความเนื่องจากเมื่อเพิ่มรีเอเจนต์แล้วสื่อจะกลายเป็นเมฆมากทำให้ยากต่อการมองเห็นการเคลื่อนไหว.

การเคลื่อนไหว

ในที่สุดตัวอักษร "M" ของคำว่า SIM หมายถึงการเคลื่อนไหว เพื่อให้สามารถประเมินการเคลื่อนที่ได้สื่อนี้เป็นแบบกึ่งของแข็งเนื่องจากลักษณะนี้จำเป็นต่อการสังเกตว่ามีการเคลื่อนไหวของแบคทีเรียหรือไม่ แบคทีเรียที่มีแฟลเจลล่าเป็นแบคทีเรียที่ให้การทดสอบเชิงบวกนี้.

การทดสอบเชิงบวกจะเห็นได้ชัดเมื่อมีการตรวจจับความขุ่นทั้งในหัวเชื้อเริ่มต้นและรอบ ๆ ในขณะที่แบคทีเรียที่ไม่ใช่มือถือจะมีการพัฒนาเฉพาะในเส้นทางเชื้อที่เริ่มต้นเท่านั้น.

การจัดเตรียม

ครึ่งซิม

น้ำหนัก 30 กรัมของตัวกลางที่ถูกทำให้แห้งและละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร ส่วนผสมที่เหลือจะยืนเป็นเวลา 5 นาทีจากนั้นความร้อนให้เดือด, กวนบ่อยจนละลายอย่างสมบูรณ์.

แจกจ่ายส่วนผสมในหลอดทดลองพร้อมฝาปิดฝ้ายและหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที ถอดชั้นวางหลอดออกจากหม้อนึ่งความดันและอนุญาตให้แข็งตัวในตำแหน่งตั้งตรงเพื่อให้สื่ออยู่ในรูปทรงของบล็อก.

สำหรับการจัดเก็บจะถูกเก็บไว้ในตู้เย็นจนกว่าจะมีการใช้งาน สื่อที่เตรียมไว้จะต้องมีค่า pH สุดท้ายที่ 7.3 ± 0.2.

ในช่วงเวลาของการฉีดวัคซีนสื่อจะต้องอยู่ที่อุณหภูมิห้อง สีของสื่อเป็นสีเบจ.

น้ำยาของ Kovac

วัดขนาด 150 มล. ของ amyl หรือ isoamyl หรือ butyl alcohol (ใช้หนึ่งในสามที่กล่าวถึง).

ละลาย p-dimethylaminobenzaldehyde 10 กรัม จากนั้นค่อยๆเติมกรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น 50 มล.

น้ำยาที่พร้อมใช้งานนั้นไม่มีสีหรือสีเหลืองอ่อน ควรเก็บไว้ในขวดสีเหลืองและเก็บไว้ในตู้เย็น ห้ามใช้หากใช้สีน้ำตาลเข้ม ที่ระบุว่าได้รับความเสียหาย รีเอเจนต์นี้เป็นที่ต้องการเมื่อจัดการกับ enterobacteria.

น้ำยา Erlich

p-dimethylaminobenzaldehyde น้ำหนัก 2 กรัมและละลายในแอลกอฮอล์เอทิลสัมบูรณ์ 190 มล. และค่อยๆผสมกับกรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น 40 มล. รักษาน้ำยาของ Kovac ด้วยวิธีเดียวกัน น้ำยา Ehrlich ใช้มากขึ้นสำหรับแบคทีเรียที่ไม่หมักและไม่ใช้ออกซิเจน.

การใช้งาน

ซิมขนาดกลางถูกใช้อย่างมากในห้องปฏิบัติการแบคทีเรียวิทยา มันมีข้อได้เปรียบที่ในหลอดเดียวกันมีลักษณะที่สำคัญสามประการที่สามารถสังเกตได้ในการระบุตัวตนของ Enterobacteriaceae.

ปลูก

วิธีที่ถูกต้องในการหว่านสื่อนี้คือการใช้เข็มซึ่งส่วนหนึ่งของโคโลนีบริสุทธิ์ที่จะทำการศึกษานั้นถูกนำไปใส่ในใจกลางของสื่อในแนวตั้ง จะต้องทำการแทงครั้งเดียว การเจาะไม่ควรถึงด้านล่างของหลอดสิ่งที่ถูกต้องคือครอบคลุมความลึกเพียงสองในสาม.

ไม่แนะนำให้ทำซ้ำ inoculum เช่นนี้อาจนำไปสู่การตีความที่ผิดพลาดของการเคลื่อนไหวในเชิงบวก เชื้อที่ถูกเชื้อจะถูกบ่มใน aerobiosis ที่อุณหภูมิ 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง.

สรุปเวลาที่สังเกตได้หากมีการผลิตเอช₂S และการเคลื่อนไหวถูกอ่าน ในที่สุดอินโดลก็ถูกเปิดเผยเพิ่ม 3 ถึง 4 หยดน้ำยา Ehrlich หรือ Kovac มันผสมเบา ๆ และตีความ.

การควบคุมคุณภาพ

ในฐานะที่เป็นตัวควบคุมการฆ่าเชื้อหลอดหนึ่งหรือสองหลอดจะถูกบ่มโดยไม่มีการฉีดวัคซีนในเตาอบที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง คาดว่าหลังจากเวลานี้จะไม่มีการเติบโตหรือเปลี่ยนสี.

ในการควบคุมคุณภาพสามารถใช้สายพันธุ์ที่ได้รับการรับรองเช่น: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, ชิเกลล่า sonnei ATCC 29930, โพรทูสขิง ATCC 13315.

ผลลัพธ์ที่คาดหวังคือ: Escherichia coli H₂S เชิงลบอินโดลและการเคลื่อนที่ในเชิงบวก, Enterobacter aerogenes การเคลื่อนไหวในเชิงบวกเท่านั้น, Salmonella typhimurium H₂S และการเคลื่อนไหวในเชิงบวกที่มีอินโดลลบ. โพรทูสขิง บวกทั้งหมดในขณะที่ Klebsiella pneumoniae และ ชิเกลล่า sonnei ลบทั้งหมด.

ข้อ จำกัด

-บางสายพันธุ์ Morganella morganii, ในสายพันธุ์อื่นสามารถผลิตเม็ดสีน้ำตาลในสื่อนี้เนื่องจากการผลิตเมลานินนี้ไม่ควรสับสนกับการตกตะกอนของเหล็กซัลไฟด์ ในมืออาชีพที่ไม่มีประสบการณ์สถานการณ์นี้สามารถสร้างผลบวกปลอมในการตีความของการทดสอบ H₂S.

-แบคทีเรียแอโรบิกที่เข้มงวดจะเติบโตบนพื้นผิวของหลอดซึ่งทำให้ยากต่อการตีความการเคลื่อนไหว.

การอ้างอิง

1. BD Laboratories BBL SIM ปานกลาง 2551 มีจำหน่ายที่: bd.com
2. Neogen Laboratories SIM Medium มีจำหน่ายที่: foodsafety
3. Difco Francisco Soria Melguizo SIM Medium 2552 มีจำหน่ายที่: http://f-soria.es
4. ห้องปฏิบัติการ Brizuela-Lab SIM Medium มีจำหน่ายที่: .brizuela-lab.com
5. ห้องปฏิบัติการ Britania SIM Medium 2558 เปิดสอนที่: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา วันที่ 5 บรรณาธิการ Panamericana S.A. อาร์เจนตินา.