มูลนิธิขนาดกลาง MIO การเตรียมและการใช้งาน

ครึ่ง MIO เป็นการทดสอบทางชีวเคมีที่ใช้ในการระบุชนิดของแบคทีเรียที่เป็นของตระกูล Enterobacteriaceae มันค่อนข้างมีคุณค่าทางโภชนาการและประกอบด้วยกลูโคส, สารสกัดจากยีสต์, เปปโตน, triptein, L-ornithine ไฮโดรคลอไร, bromocresol สีม่วงและวุ้น.

ความหมายของคำย่อ (MIO) อธิบายพารามิเตอร์แต่ละตัวที่สามารถสังเกตได้ในสื่อนี้ การเคลื่อนไหวอินโดลและ ornithine การเคลื่อนไหวคือความสามารถของจุลินทรีย์ที่จะย้ายโดยการปรากฏตัวของ flagella เพื่อให้สังเกตคุณสมบัตินี้ความสอดคล้องของตัวกลางต้องเป็นแบบกึ่งแข็งดังนั้นการเตรียมมีจำนวนวุ้นน้อยกว่า.

การผลิตอินโดลแสดงให้เห็นถึงการมีเอนไซม์ tryptophanase ซึ่งทำหน้าที่เกี่ยวกับกรดอะมิโนทริปโตเฟนซึ่งจำเป็นต่อการใช้รีเอเจนต์ที่เปิดเผยเพื่อทำให้การผลิตอินโดลสามารถมองเห็นได้.

ในที่สุด ornithine ตัดสินว่าแบคทีเรียมีความสามารถในการ decarboxylating กรดอะมิโนนั่นคือถ้ามันมีเอนไซม์ orinithine decarboxylase.

ดัชนี

• 1 มูลนิธิ
  • 1.1 เปปโตน, ยีสต์สกัดและ triptein
  • 1.2 การเคลื่อนไหว
  • 1.3 กลูโคส
  • 1.4 L-Ornithine
  • 1.5 ตัวบ่งชี้ค่า pH
• 2 เทคนิคการเพาะและพัฒนา
• 3 การเตรียมการ
  • 3.1 MIO Medium
  • 3.2 Kovacs reagent (ผู้พัฒนาทดสอบ Indole)
• 4 ใช้
• 5 การควบคุมคุณภาพ
• 6 อ้างอิง

มูลนิธิ

เปปโตน, สารสกัดจากยีสต์และ triptein

องค์ประกอบเหล่านี้นำไปสู่พลังทางโภชนาการของสื่อนี้ พวกเขาทำหน้าที่เป็นแหล่งของสารอาหารและกรดอะมิโนที่จำเป็นสำหรับการพัฒนาแบคทีเรีย.

นอกจากนี้ทริปไตน์ยังเป็นแหล่งของทริปโตเฟนเพื่อเป็นหลักฐานการปรากฏตัวของเอนไซม์ทริปโตเฟนเอนไซม์ซึ่งจะย่อยสลายทริปโตเฟนโดยการลดการปนเปื้อนที่ปล่อยออกมาจาก Indole กรด pyruvic แอมโมเนียและพลังงาน.

อินโดลไม่มีสีดังนั้นการปรากฏตัวของมันก็ถูกเปิดเผยโดยการเติมน้ำยา Ehrlich หรือ Kovacs ห้าหยดทั้งคู่ด้วย p-dimethylaminobenzaldehyde.

กลุ่มอัลดีไฮด์ของสารประกอบนี้ทำปฏิกิริยากับอินโดลทำให้เกิดผลิตภัณฑ์สีแดงม่วงรูปวงแหวนบนพื้นผิววุ้น.

ร่องรอยใด ๆ ของสีควรถูกพิจารณาว่าเป็นหลักฐานเชิงบวก การทดสอบควรอ่านได้ทันทีเพราะหลังจากที่ในขณะที่สีเสื่อมโทรม.

ในทางกลับกันการทดสอบนี้ควรเปิดเผยหลังจากบันทึกผลของการเคลื่อนไหวและ decarboxylation ของ ornithine.

การตีความ

การทดสอบเชิงบวก: การก่อตัวของวงแหวนสีแดงบานเย็นเมื่อเพิ่มหยดน้ำยา Kovacs.

การทดสอบเชิงลบ: ไม่มีการก่อตัวของแหวน.

การเคลื่อนไหว

ความสามารถของแบคทีเรียในการเคลื่อนที่จะเป็นหลักฐานหากสังเกตได้จากตัวกลางที่ขุ่นหรือหากมีการเจริญเติบโตของเส้นหนาที่ขยายรอบการฉีดวัคซีนเริ่มต้น.

การทดสอบการเคลื่อนไหวในเชิงลบจะถูกหลักฐานโดยการสังเกตเส้นบาง ๆ ของการเจริญเติบโตและรอบ ๆ จะไม่มีการเติบโต.

มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องอ่านการเคลื่อนที่ก่อนที่จะเปิดเผยอินโดลเนื่องจากการเพิ่มของเมฆรีเอเจนต์ในตัวกลางทั้งหมด.

ในแบคทีเรียที่เคลื่อนที่ได้ แต่เติบโตช้ามันเป็นเรื่องยากที่จะแสดงให้เห็นถึงความสามารถในการเคลื่อนที่ของมันด้วยสื่อนี้ ในกรณีนี้ขอแนะนำให้ใช้การทดสอบหรือวิธีการอื่นเช่นสื่อการเคลื่อนไหวหรือวิธีการปล่อย.

กลูโคส

กลูโคสเป็นคาร์โบไฮเดรตที่หมักได้ซึ่งนอกจากจะให้พลังงานแก่กรดสื่อแล้วยังเป็นเงื่อนไขที่จำเป็นสำหรับ decarboxylation ของกรดอะมิโน ornithine ที่จะเกิดขึ้น.

การหมักกลูโคสควรเกิดขึ้นเสมอตามหลักการที่ว่าแบคทีเรียทั้งหมดที่เป็นของครอบครัว Enterobacteriaceae การหมักกลูโคส.

L-Ornithine

หากแบคทีเรียผลิตเอนไซม์ ornithine decarboxylase มันอาจทำหน้าที่เมื่อสื่อได้รับกรดจากการหมักกลูโคส.

เอนไซม์ ornithine decarboxylase ทำหน้าที่กับกลุ่มคาร์บอกซิลของกรดอะมิโนที่ผลิตอะมีนเรียกว่า putresine ซึ่งจะทำให้สารเป็นด่างอีกครั้ง.

การทดสอบนี้ควรอ่านหลังจาก 24 ชั่วโมงของการฟักตัวเพราะถ้าคุณพยายามอ่านก่อนที่คุณจะสามารถตีความการทดสอบผิดพลาดได้.

ต้องจำไว้ว่าปฏิกิริยาแรกที่เกิดขึ้นคือการหมักกลูโคสดังนั้นสื่อจะเปลี่ยนเป็นสีเหลืองในระยะเริ่มแรก (10 ถึง 12 ชั่วโมงแรก) ถ้า decarboxylation ของ ornithine เกิดขึ้นในไม่ช้าตัวกลางจะเปลี่ยนเป็นสีม่วง.

มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องตีความการทดสอบ decarboxylation ornithine ก่อนที่จะเปิดเผยอินโดลเนื่องจากการเติมน้ำยา Kovacs ปรับเปลี่ยนสีของสื่อ.

การตีความ

การทดสอบเชิงลบ: สีเหลืองปานกลางหรือพื้นหลังสีเหลือง.

การทดสอบเชิงบวก: สีม่วงอย่างสมบูรณ์.

ตัวบ่งชี้ PH

ในกรณีนี้ใช้สีม่วง bromocresol บุคคลที่รับผิดชอบในการเปิดเผยเมื่อมีการเปลี่ยนแปลงค่า pH อยู่ตรงกลาง เมื่อเป็นกรดตัวบ่งชี้จะเปลี่ยนเป็นสีเหลืองและเมื่อด่างกลายเป็นสีม่วง.

เทคนิคของเมล็ดและการพัฒนา

ในการปลูกสื่อ MIO นั้นจะใช้การลูปหรือเข็มแบบตรงและมีการรวบรวมส่วนหนึ่งของอาณานิคมที่จะทำการศึกษา.

มีการเจาะลึกลงในสื่อ MIO เป็นเส้นตรง ไม่แนะนำให้ทำการเจาะสองครั้งเนื่องจากสามารถให้ภาพเคลื่อนไหวที่ผิดพลาดได้หากการเจาะไม่ได้อยู่ในที่เดียวกัน.

ฟักไข่เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมงที่ 37 องศาเซลเซียสในแอโรบิกสิส สังเกตผลลัพธ์ในลำดับนี้: การเคลื่อนที่การลดการสลายตัวของ ornithine และเผยให้เห็นอินโดลในที่สุด.

ขอแนะนำให้ใช้แบบไร้เชื้อ 2 มิลลิลิตรของสื่อ, ถ่ายโอนไปยังหลอดที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วทำการทดสอบอินโดลที่นั่น, เพื่อให้ผลลบถ้าส่วนที่เหลือของหลอดดั้งเดิมสามารถบ่มได้ 24 ชั่วโมง, เพื่อเปิดเผยอินโดลอีกครั้ง.

การพัฒนาอินโดลนั้นดำเนินการในลักษณะดังต่อไปนี้: น้ำยา Kovacs 3 ถึง 5 หยดจะถูกเพิ่มเข้าไปในสื่อ MIO และกระตุ้นให้เกิดแรง มีการตรวจสอบว่าวงแหวนแดงสีแดงม่วงปรากฏขึ้นหรือไม่.

การจัดเตรียม

Half MIO

น้ำหนัก 31 กรัมของสื่อ MIO และละลายในน้ำกลั่นหนึ่งลิตร.

ตั้งไฟจนส่วนผสมเดือดประมาณ 1 นาทีคนให้เข้ากันจนวุ้นละลายหมด แจกจ่าย 4 มิลลิลิตรของสื่อในหลอดทดลอง 13/100 พร้อมฝาปิดฝ้าย.

ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดันที่อุณหภูมิ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที ลบออกจากหม้อนึ่งความดันและปล่อยให้มันยืนตรงในชั้นวางในลักษณะที่มีการสร้างบล็อกกึ่งแข็ง.

เก็บในตู้เย็น 2-8 องศาเซลเซียส อนุญาตให้มีอารมณ์ก่อนปลูกสายพันธุ์แบคทีเรีย.

สีของตัวกลางที่ถูกอบแห้งจะเป็นสีเบจและของตัวกลางที่เตรียมจะมีสีเหลือบม่วงเล็กน้อย.

ค่า pH สุดท้ายของสื่อที่เตรียมไว้คือ 6.5 ± 0.2

สื่อจะเปลี่ยนเป็นสีเหลืองพร้อม pH ที่เป็นกรดและเป็นสีม่วงที่ pH อัลคาไลน์.

น้ำยา Kovacs (ผู้พัฒนาทดสอบ Indole)

รีเอเจนต์นี้เตรียมไว้ดังนี้:

มีการวัดค่า amyl, isoamyl หรือ butyl alcohol 150 มิลลิลิตร (หนึ่งในสาม) ในนั้น 10 กรัม p-dimethylaminobenzaldehyde จะละลาย จากนั้นกรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น 50 มล. จะถูกเติมอย่างช้าๆ.

รีเอเจนต์ที่เตรียมไว้นั้นไม่มีสีหรือสีเหลืองอ่อน ควรเก็บไว้ในขวดสีเหลืองและเก็บไว้ในตู้เย็น สีน้ำตาลเข้มแสดงการเสื่อมสภาพ.

นอกจากนี้น้ำยา Kovacs สามารถถูกแทนที่ด้วยน้ำยา Ehrlich หลังมีความไวมากขึ้นเป็นที่ต้องการที่จะเปิดเผยอินโดลในแบคทีเรียที่ผลิตได้ในปริมาณที่น้อยที่สุดเช่นเดียวกับในแบคทีเรียแกรมลบที่ไม่ผ่านการหมักและแกรมบางชนิด.

ใช้

สื่อนี้เป็นการทดสอบที่เติมแบตเตอรี่ของการทดสอบทางชีวเคมีสำหรับการระบุแบคทีเรียที่เป็นของครอบครัว Enterobacteriaceae.

ข้อมูล de-carboxylation ของ ornithine ทำหน้าที่แยกความแตกต่าง ชิเกลล่า sonnei, ที่ให้ผลบวก Shigella boydii, Shigella flexneri และ S. dysenterieae, ที่ให้เชิงลบ.

มันยังแยกความแตกต่างของสกุล Klebsiella ซึ่งให้ค่าลบสกุล Enterobacter ซึ่งส่วนใหญ่ของสายพันธุ์ของมันเป็นบวก.

การควบคุมคุณภาพ

ทุกครั้งที่มีการเตรียมแบทช์ของสื่อกลาง MIO สามารถทำการทดสอบควบคุมได้ สำหรับเรื่องนี้สายพันธุ์ที่รู้จักกันหรือได้รับการรับรองจะใช้ในการสังเกตพฤติกรรมของสื่อ.

สายพันธุ์ที่สามารถใช้ได้คือ Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes และ โพรทูส mirabilis.

ผลที่คาดหวังคือ E. coli และ M. morganii. แดน M: +, I: + และ O: +.

Klebsiella pneumoniae ให้ผลลบทั้งหมด (M: -, I: -, O :-). โพรทูส mirabilis และ Enterobacter aerogenes แดน M: + I: - และ O: +.

การอ้างอิง

1. Mac Faddin J. (2003) การทดสอบทางชีวเคมีสำหรับการจำแนกแบคทีเรียที่มีความสำคัญทางคลินิก วันที่ 3 Panamericana บรรณาธิการ บัวโนสไอเรส อาร์เจนตินา.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด บรรณาธิการ Panamericana S.A. อาร์เจนตินา.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา วันที่ 5 บรรณาธิการ Panamericana S.A. อาร์เจนตินา.
4. ห้องปฏิบัติการ Britania MIO Medio 2015 มีจำหน่ายที่: britanialab.com
5. BD Laboratories BBL Motility Indole Ornithine (MIO) ขนาดกลาง 2550 มีจำหน่ายที่: bd.com
6. Valtek Laboratories กลาง M.I.O. การเคลื่อนไหวอินโดล Ornithine 2010 มีจำหน่ายที่: andinamedica.com